适应性突变中的DNA的重组事件

适应性突变（adaptive mutation）或定向突变（directed mutation）最先是指大肠杆菌（Escherichia coli）lac-突变细胞在以乳糖为唯一的培养基础上,随选择时间延长lac+回复子数量不断增加的现象.     

光合细菌Rhodobacter sphaeroides glnB—lacZ融合子的构建

亚克隆了Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓｇｌｎＢ启动子,以ｐＭＰ２２０为载体构建成ｂｌｎＢ－ｌａｃＺ融合子。将ｇｌｎＢ－ｌａｃＺ、ｎｉｆＨ－ｌａｃＺ、ｎｉｆＡ＝ｌａｃＺ分别导入Ｒ．ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ谷氨酸合酶突变株ｇｌｔＢ、ｇｌｔＤ和野生型菌株中,分析了突变对固氮基因转录表达的影响,试验证明,在ｇｌｔＢＤ突变株中ｎｉｆＨ的表达受阻遏,ｎｉｆＡ表达水平很低。这证明ｇｌｔ基因的突变引     

puc启动子上游DNA二元对称序列突变对Rhodobactersphaeroides…

为了鉴定ｐｕｃＢＡ基因表达受氧调控的顺式调节位点,通过ＰＣＲ和多了聚核苷酸定点突变的体外操作,在ｐｕｃ转录子５’上游非编码区产生了７个不同突变和５个不同１０ｂｐ缺失序列。构建了含有各种顺序突变的ｐｕｃ上游区,ｐｕｃ启动子和报告基因ｌａｃＺ的转录融合子。通过融合子β－半乳糖苷酶活性分析,发现位于ｐｕｃ启动子上游二元对称结构的突变使用ｐｕｃ启动子上游二元对称结构的突变使得ｐｕｃ基因在有氧条件下去阻遏表     

puc启动子上游DNA二元对称序列突变对Rhodobacter sphaeroides氧调节的影响

为了鉴定ｐｕｃＢＡ基因表达受氧调控的顺式调节位点,通过ＰＣＲ和多聚核苷酸定点、突变的体外操作,在ｐｕｃ转录子５＇上游非编码区产生了７个不同突变和５个不同１０ｂＰ缺失序列。构建了含有各种顺式突变的ｐｕｃ上游区、ｐｕｃ启动子和报告基因ｌａｃＺ的转录融合子。通过融合子β－半乳糖苷酶活性分析,发现位于ｐｕｃ启动子上游二元对称结构的突变使得ｐｕｃ基因在有氧条件下去阻遏表达。ＩＨＦ束缚位点的突变可使β－半乳糖苷酶活性提高。     

MHC Class Ib grc—G／C基因的研究进展

ＭＨＣ的ｃｌａｓｓ基因,可分为经典的ｃｌａｓｓ Ｉ和非经典的ｃｌａｓｓＩ,后者称ｃｌａｓｓ Ｉｂ。ｃｌｓｓ Ｉ与β／β Ｔ细胞相关在细胞表面高密度表达,ｃｌａｓｓ Ｉｂ在细胞表面弱表达,其功能尚不清楚,ｃｌａｓｓ Ｉｂ的基因区域中含有一个ｇｒｃ区域,ｇｒｃ基因的ｒｃｃ,ｆｔ,ｄｗ－３三组基因组成。     

光合细菌Rhodobacter sphaeroides glnBlacZ 融合子的构建与表达

亚克隆了Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ ｇｌｎＢ启动子,以ｐＭＰ２２０ 为载体构建成ｇｌｎＢｌａｃＺ融合子。将ｇｌｎＢｌａｃＺ、ｎｉｆＨｌａｃＺ、ｎｉｆＡｌａｃＺ分别导入Ｒ． ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ 谷氨酸合酶突变株ｇｌｔＢ－ 、ｇｌｔＤ－ 和野生型菌株中,分析了突变对固氮基因转录表达的影响。试验证明,在ｇｌｔＢＤ 突变株中ｎｉｆＨ 的表达受阻遏,ｎｉｆＡ 表达水平很低。这证明ｇｌｔ 基因的突变引起固氮酶结构基因和固氮正调节基因的转录被阻遏,而ｇｌｎＢ 基因的表达几乎不受影响。试验还测定了环境中结合态氮和有机酸等信号分子对ｇｌｎＢ 和ｎｉｆＨ 表达的影响,发现加入氨或谷氨酰胺后,ｎｉｆＨ 的表达受到明显的阻遏作用,ｇｌｎＢｌａｃＺ的β半乳糖苷酶活性虽下降３０ ％ 左右但不随结合态氮浓度升高而变化,仍维持在一个较高的水平。α酮戊二酸和丙酮酸对ｎｉｆＨ 的表达有部分去阻遏作用而对ｇｌｎＢ的表达无诱导作用     

乳链菌肽的作用位点

乳链菌肽 (ｎｉｓｉｎ)是由乳酸乳球菌属乳酸亚种 (Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ .ｌａｃｔｉｓ)的某些菌株产生的一种抗菌多肽 ,对范围广泛的革兰氏阳性菌有极强的抑杀作用。它是一种多肽 ,很容易被人体消化酶分解成氨基酸而被人体吸收和利用 ,因此乳链菌肽作为食品防腐剂具有天然无毒的特点。人们一直都试图将乳链菌肽当做一种抗生素用于医疗方面 ,由于它易被人体消化酶分解和溶解度不高 ,以及在其它方面存在着一些缺陷 ,目前还不适于药用。近年来 ,很多致病菌对常见的抗生素产生了抗性 ,甚至有些菌对人们所能依靠的最后…     

研究适应突变的一个新的实验系统

以鼠伤寒沙门菌嘌呤生物合成途径中一个反式调节基因purR的超阻遏突变体(purRS)为材料,利用该突变体在补加限量腺嘌呤和以乳糖为惟一碳源的NCE培养基上生长非常缓慢(不能形成菌落)的特性,观察到了编码阻遏蛋白的调节基因purR可在上述非致死选择条件下产生迟后突变现象.迟后突变体重建实验证明,此类突变体为非缓慢生长突变体;统计分析显示,迟后突变体呈Poisson分布,表明突变发生在选择平板上;共转导分析初步证明,迟后突变发生在被选择基因purR或purD 结构基因的cis元件16 bp PUR box.以上结果暗示,利用此实验系统观察到的迟后突变现象是与随机突变不同的适应突变的结果.将适应突变基因从碳代谢和氨基酸合成的结构基因扩大到编码阻遏蛋白的调节基因,既为适应突变的普遍性提供了新的证据,也为适应突变研究提供了一个新的实验系统.     

乳链菌肽的生物合成及其分子结构与功能的关系

乳链菌肽 (Ｎｉｓｉｎ)是乳酸乳球菌乳酸亚种 (Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ.ｌａｃｔｉｓ)某些菌株产生的一种小肽 ,亦称之为乳酸链球菌肽或乳酸链球菌素。由于它对许多革兰氏阳性菌 ,包括葡萄球菌 (Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ)、梭菌 (Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ)、芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓ)、利斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａ)等造成食品严重危害的腐败菌有强烈抑制作用 ,并对人体安全无毒 ,是人们广为应用的一种天然食品防腐剂 ,已被全世界 5 0多个国家和地区用于乳制品、罐头食品、植物蛋白食品、肉制品的防腐保鲜。…     

乳酸克鲁维酵母LAC4启动子的克隆及UASⅡ功能的研究

用ＰＣＲ方法取得乳酸克鲁维酵母ＣＢＳ１４１和ＬＡＣ４基因从－６６１到＝２１ｂｐ区段与大肠杆菌ｌａｃＺ基因融合构建成表达载体ＹＦＤ１１４并转化Ｋ．ｌａｃｔｉｓＹ１６７。通过半乳糖,乳糖,山梨醇或ＩＰＴＧ诱导,我们研究了所克隆的ＡＬＣ４启动子的功能。     

pINC－lacZ逆转录病毒载体的构建及其在小鼠胚胎干细胞中的表达

小鼠胚胎干细胞系（ＥＳ）是从囊胚的内细胞团中建立起来的多潜能胚胎干细胞系。ＥＳ细胞系目前正广泛用于将基因打靶后的突变和其它遗传变化导入小鼠的种系中。其中,嵌合鼠的获得是非常必要的一步。这就需要用一个可以广泛表达的基因对ＥＳ细胞进行标记。大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的表达在细胞水平就能很容易地观察到,而且对哺乳动物细胞没有任何毒害作用,因而是一个被广泛地用于各种细胞基因表达研究中的报导基因。猿类巨细胞病毒早期（ＳｉＣＭＶＩＥ）启动子是一个广泛用于转基因小鼠研究中的强启动子。然而,该启动子在ＥＳ细胞方面应用的报道尚未见到。本研究用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切,从ｐｓｖ－β－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ中得到３．７Ｋｂ的ｌａｃＺ基因片断,将其插入到ｐＩＮＣ载体上（Ｆｉｇ．１）,得到ｐＩＮＣ－ｌａｃＺ（Ｆｉｇ．２）。用ＮｏｔⅠ线性化ｐＩＮＣ－ｌａｃＺ后,电击导入ＭＥＳＰＵ－１３细胞中。ＭＥＳＰＵ－１３为本实验室从１２９／Ｔｅｒ品系小鼠的囊胚中建立的一个ＥＳ细胞系。转化细胞在含有２５０μｇ／ｍｌＧ４１８的培养基上培养两周,进行ＭＥＳＰＵ－１３细胞稳定转化子的筛选。在一次转化实验中,从１ｘ１０７个转化的ＭＥＳ     

乳酸克鲁维酵母高拷贝整合载体的构建及应用

用酿酒酵母２６ｓ ｒＤＮＡ作探针克隆乳酸克鲁维酵母Ｋ．ｌａｃｔｉｓ ２．２ｋｂ ｒＤＮＡ片段,对其作限制内切酶图谱分析。以该基因片段为同源整合的靶顺序,酿酒酵 ＵＲＡ３基因为选择标记构载体质粒ｐＩＲＫ并对其在宿主Ｋ．ｌａｃｔｉｓ ＭＷ９８－８ｃ细胞中的整合位点,拷数及稳定性进行测定和分析。     

志贺氏菌福氏2a 301株ipaH4.5突变株的构建及生物学功能分析

利用λ-Red重组系统对福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因进行缺失突变,构建了福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因缺失突变株?ipaH4.5,利用低拷贝质粒构建ipaH4.5缺失突变株的回复突变株△ipaH4.5HF。PCR方法证实了ipaH4.5基因的缺失和回复。对野生株、突变株和回复突变株的生长代谢及细胞侵袭能力进行比较;ELISA方法检测3株菌侵袭鼠J774巨噬细胞后培养上清中炎性因子的水平。生长代谢实验表明缺失和回复ipaH4.5不影响志贺氏菌的生长速度,侵袭实验表明缺失和回复ipaH4.5也不影响志贺氏菌对HeLa细胞和鼠J774巨噬细胞的侵袭能力,表明ipaH4.5基因与志贺氏菌的生长代谢和侵袭能力无关;鼠J774巨噬细胞培养上清中细胞因子水平的改变提示该基因在志贺氏菌侵入细胞后抑制宿主细胞炎症反应。     

HeNe激光辐照对离体质粒DNA损伤及诱发lacZ基因突变的研究

利用低功率ＨｅＮｅ激光辐照离体质粒ＤＮＡ,分析了质粒ＤＮＡ的损伤效应和ｌａｃＺ基因的突变。结果表明ＨｅＮｅ激光低剂量辐照可提高质粒转化活性,随着剂量增加可引起ＤＮＡ结构显著损伤,导致质粒失活,同时可诱发ｌａｃＺ基因突变,其最高突变率可达１０．５８×１０－４,且突变率的剂量效应曲线可用Ｙ＝ａ＋ｂｘ＋ｃｘ２来描述。与紫外线辐照相比,ＨｅＮｅ激光对ｌａｃＺ基因的诱变效率低于紫外线。     

在处理春麦合子上化学诱变的效果

早在1947年Auerbach在利用芥子剂诱发果蝇突变的研究中,即发现有突变细胞与正常细胞的嵌合现象(mosaicism)。显然,在个体发育中,携带有突变细胞的个体,其所产生的子代,则未必是由突变细胞发育而成。因此在突变细胞与正常细胞之间乃存在有筛选竞争关系。如果人们能够最大限度地排除突变细胞被淘汰的作用,那么,在突变育种     

大肠杆菌β—D—半乳糖苷酶的定位突变及突变酶的动力学性质

利用人工合成的寡核苷酸探针,将编码大肠杆菌β-D-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)的Lac Z基因中537位Glu密码子GAA分别用GAC(Asp)、CAA(Gln)、GTC(Val)来替代,替代后的突变酶的催化活性显著降低.同天然β-D-半乳糖苷酶相比,作用于ONPG底物时,突变酶的k_(cat)值分别为0.13%(Asp-537)、0.0006%(Gln-537)、0.0035%(Val-537),但它们的K_m值并无明显改变.无论是天然酶还是突变酶,底物类似物IPTG是一个强有力的抑制剂,而过渡态类似物2-脱氧-2-氨基-半乳糖和L-核糖只对突变酶有微弱的抑制作用.活化剂叠氮钠的激活作用小于β-D-半乳糖苷酶的Glu-461突变酶.催化甲醇成酯反应的能力小于天然酶.突变酶对热更不稳定.以上结果表明Glu-537残基是该酶催化反应的必需基团.     

福氏2a志贺氏菌2457T HtpG蛋白诱导小鼠炎性反应

[目的]构建福氏2a志贺氏菌2457T株的htpG缺失突变株和回复株,对HtpG蛋白的功能进行初步研究.[方法]采用X-Red重组系统对htpG基因进行缺失突变,构建了福氏2a志贺氏菌2457T株的htpG缺失突变株,并利用低拷贝质粒构建了htpG突变株的回复株.在此基础上,对野生株、突变株和回复株的生长曲线、生化反应、豚鼠角膜试验进行了比较分析,并考察了野生株、突变株和回复株腹腔注射引起小鼠炎症反应的强弱.[结果]HtpG蛋白功能与福氏志贺氏菌的基本生化代谢无关,也不影响细菌穿透上皮细胞的能力,但腹腔注射后能够引起小鼠强烈的炎症反应.[结论]HtpG蛋白功能可能与细菌的免疫致病性相关.     

新型隐球酵母铜应答转录因子Cuf1与荚膜的生物合成相关性

[目的]新型隐球酵母是人类条件致病真菌,主要感染免疫缺陷患者.该酵母最显著的特征是细胞外包被着多糖荚膜,这一重要致病因子的调控机制复杂.本文研究旨在阐述编码铜依赖转录因子的CUF1基因对其荚膜生物合成的负调控作用.[方法]以野生型菌株为对照,对CUF1缺失的突变菌株进行菌落形态观察、荚膜墨汁染色的显微观察、细胞聚沉试验以及荚膜定量分析.[结果]与野生型菌株相比,△cuf1突变株产生的菌落更粘,显微镜下亦可明显观察到荚膜更厚.同样数量的细胞,突变株聚沉平衡后体积更大.此外,荚膜粗提物定量称重分析也证明突变株产生了更多的荚膜.并且外源铁可以回复△cuf1突变株荚膜过量产生的表型.[结论]铜应答转录因子1(Cuf1)对荚膜的生物合成具有负调控作用.Cuf1可能通过铁的高亲和吸收途径调控铁吸收而实现该作用的.     

遗传不稳定性与人类肿瘤

人类在进化历程中,突变可自然发生。保守的估计,自人类与黑猩猩区分的那一刻起,人类每代每个二倍体基因组平均发生4.2个氨基酸的突变(ａｍｉｎｏａｃｉｄａｌｔｅｒｉｎｇ)。虽然这些突变至少有38%为自然选择所去除,但每代二倍体细胞中每个基因组仍可保留1.6个新突变[1]。已经证实,肿瘤细胞中存在许多生长调控基因(ｇｒｏｗｔｈｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｇｅｎｅ)的突变。这些突变可分为4类:①ＤＮＡ序列改变;②染色体数改变;③染色体易位;④基因扩增。这4种突变通常发生于一定类型的肿瘤,在正常细胞中难以见到。但是肿瘤中突变的存在并不说明…     

第25届国际生物学奥林匹克竞赛试题 理论B-5

<正>33.5株大肠杆菌突变体(1~5)各携带一个影响lac操纵子的突变。突变l中的突变位于lacY基因中。另外4个各包含下面突变中的一个:誗lac Z的无义突变;产生一个没有功能的β-半乳糖苷酶誗lacO~c突变;使得阻遏物无法结合到操纵子上誗启动子突变:RNA聚合酶无法结合到启动子上誗超级阻遏物突变;半乳糖无法结合和抑制阻遏物