防老剂D对小鼠致癌性的实验研究

以含N-苯基-2-萘胺约85％,N-苯基-1-萘胺约4％且不含2-萘胺的国产防老剂D混于饲料中,饲喂幼年雄性C57/BL小鼠共一年半,饲料中防老剂D浓度在三个剂量组均逐步增加,分别为0.04％—0.5％、0.08％—0.6％及0.24％—0.8％。停止饲喂后半年杀死全部存活动物,作仔细的组织学检查。实验结果证明防老剂D对小鼠有致癌作用。63头实验组小鼠的恶性肿瘤总发生率为72.7％,癌瘤发病率为57.1％,其中主要包括肺癌、肝细胞癌和颌下腺癌,19头自然对照小鼠有21％肉瘤但无癌。实验和对照组癌发生率和肺、肝、颌下腺腺癌的各别发生率在统计学上均有显著差异。实验组中也较常见肝、脾、肾等血管内皮肉瘤的发生。肿瘤发生率和防老剂D的剂量之间存在着一定的相关性。     

N-苯基-2-萘胺对ICR小鼠致癌性的研究

以国产工业D防和其提纯的主要成份N-苯基-2-萘胺(PBNA)溶于二甲亚砜,每周两次皮下注射于雄性刚成年ICR小鼠,剂量每次12毫克或4毫克,共35次。实验八个月末检查实验及二甲亚砜对照动物每组20头,发现12毫克×35次工业D防和同剂量PBNA各诱发45%恶性肿瘤,其中大部为肺癌。PBNA对小鼠致癌性可能有剂量一反应关系。二甲亚砜对照组20头小鼠无任何肿瘤。     

N-苯基-2-萘胺对拟柱胞藻生长、抗氧化酶及光合系统Ⅱ的影响

为探究化感物质对入侵水华蓝藻-拟柱胞藻(Cylindrospermopsis raciborskii)的影响, 研究对不同浓度(0、0.05、0.10、0.50、1.00和2.00 mg/L)N-苯基-2-萘胺处理下拟柱胞藻的生长、抗氧化酶活性及叶绿素荧光诱导动力学进行了测定。结果表明, 藻叶绿素a含量随N-苯基-2-萘胺浓度升高而显著降低, 浓度大于0.50 mg/L时, 拟柱胞藻叶绿素a含量显著低于对照。72h, N-苯基-2-萘胺对拟柱胞藻的EC50为1.02 mg/L。叶绿素荧光诱导动力学参数表明, 浓度小于0.50 mg/L时, 拟柱胞藻的最大光化学效率(P0)、单位面积上有活性的反应中心(RC/CS0)、以吸收光能为基础的性能指数(PIABS)及以单位面积为基础的性能指数(PICS)均显著高于对照, 而反映2ms时有活性的反应中心的开放程度的0则显著低于对照组。当N-苯基-2-萘胺浓度大于0.50 mg/L时, 以上参数均呈现相反趋势。这表明低浓度N-苯基-2-萘胺能提高拟柱胞藻的光合效率, 而在高浓度时, 拟柱胞藻PSⅡ有活性的反应中心减少, 电子传递受到阻碍, 光合效率下降。与对照相比, 在浓度高于0.50 mg/L条件下, 拟柱胞藻的过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性显著增加, 表明拟柱胞藻能产生大量的抗氧化酶来减少N-苯基-2-萘胺的损伤。这些结果表明N-苯基-2-萘胺可能通过抑制PSⅡ的电子传递和减少其有活性的反应中心来影响拟柱胞藻的生长, 也暗示了N-苯基-2-萘胺能作为潜在的抑藻物质来控制拟柱胞藻水华。       

石灰菌代谢产物的化学研究(Ⅰ)

从石灰菌(Lactarius hysginus Fr.)提取物的中性部分,分离得到六个化合物,经物理常数和光谱分析,鉴定为麦角甾醇(A)、硬脂酸甲脂(B)、N-苯基-2-萘胺(C)、24E-麦角甾7,22-二烯-6-酮一3β,5α-二醇(D)、庚酰胺(E)、24E-麦角甾-7.22-二烯-3β,5α,6β-三醇(F),其中化合物D作为天然产物尚未见文献报道。     

萘及其衍生物对普通小球藻的毒性效应

本文研究了萘及其衍生物(萘、1-萘酚、2-萘酚和1-萘胺)对普通小球藻的生长、叶绿素含量、光合强度和呼吸强度的影响。萘、1-萘酚和1-萘胺在低浓度下能促进普通小球藻的生长,高浓度则抑制藻的生长;2-萘酚在实验浓度下都抑制藻的生长。萘、1-萘酚、2-萘酚和1-萘胺的96hEC_(50)分别为98.06、11.87、13.39和6.95mg/L。萘及其衍生物对叶绿素含量和光合强度的影响比对生长的影响强,而对叶绿素含量的影响又比对光合强度的影响强。可以这样认为:萘及其衍生物对普通小球藻生长的抑制是通过抑制藻叶绿素a的形成,进而降低光合强度实现的。低浓度的萘和1-萘酚增强普通小球藻的呼吸强度,而高浓度则减弱;与此相反,低浓度的2-萘酚对藻的呼吸强度影响不大,高浓度能显著增强;在实验浓度下的1-萘胺使藻呼吸强度明显减弱,但随着时间的推移,呼吸强度出现回升,且高浓度回升较快。     

N-苯基-2-萘胺对大鼠组织混合功能氧化酶的影响

本文报道致癌物N-苯基-2-萘胺(P-BNA)对大鼠组织混合功能氧化酶的影响。PBNA腹腔注射七天后,实验动物肝重、肝微粒体蛋白量、肝微粒体细胞色素P-450总量以及7-乙氧基香豆素-O-去乙基酶活力均增加,而芳烃羟化酶和混合功能胺氧化酶活力有所下降。实验动物肺、肾混合功能胺氧化酶活力未受此致癌物处理影响,但肺、肾中7-乙氧基香豆素-O-去乙基酶活力和芳烃羟化酶活力均明显增加。文章对PBNA这种选择性诱导混合功能氧化酶的可能原因及其意义,并联系PBNA在动物引癌中所表现出的器官亲和性进行了讨论。     

寡糖的荧光标记高效液相色谱分析

 利用氨化还原的方法把高量子产率的荧光标记物——α-萘胺,接到异麦芽糖寡糖的还原端。用硅胶薄层色谱、荧光光谱及快原子轰击质谱证实反应物的完全性及其结构。高效液相色谱用Micropak si5硅胶柱,以乙腈-水(含0.05％三乙胺)为梯度洗脱液可使含有二到九个糖残基的异麦芽糖寡糖的α-萘胺衍生物全部分离。本法对异麦芽糖二糖的荧光检测灵敏测度为2.35Pmol。     

N-苯基-2-萘胺气溶胶小鼠吸入诱癌的实验研究

选用C_(57)黑鼠,在一特制的中毒橱中进行了PBNA气溶胶的吸入诱癌实验。中毒橱中PBNA的浓度为180—230毫克/立方米。动物每日吸入2小时,每周吸入5日,共吸入一年,饲养到22个月解剖。实验结果50％的实验动物(23/46)患了各种恶性肿瘤,其中肺癌14例。对照动物中14.89％患有恶性肿瘤(7/47),但无一例肺癌。实验组14例肺癌中12例为腺癌。PBNA是一种重要的橡胶配合剂,本实验用的PBNA经高压液相色层分析,证明不含2-萘胺,因此实验结果提示PBNA本身很可能是一个致癌物。     

防老剂D和四氯化碳协同致大鼠肝硬变和肝癌的观察

55头雌性及雄性大鼠每周一次灌喂四氯化碳,其前后各两天灌喂防老剂D溶液。在半年至一年半期间,雄鼠中69.7%发生肝硬变,硬变肝的405有胆管细胞癌,33%兼有肝细胞癌或微癌。实验雌鼠40%有肝硬变,其中一例有胆管细胞癌合并肝微癌。存活较久的14头实验雌鼠尚发生11例癌瘤,包括肺癌、卵巢癌、胰腺癌、甲状腺癌及颌下腺癌。单纯多次灌喂四氯化碳的对照雌雄性大鼠36头发生16.7%肝硬变,无任何癌瘤。实验组和对照组在肝硬变、肝癌及全部癌瘤的发生率方面有统计学上显著差异。实验证明防老剂D和四氯化碳在雄大鼠肝硬变和肝癌的发生有协同作用。实验中使用雌鼠数目偏少,未见显著协同作用。     

沉水植物浸提液组分对三种常见附植藻类生长的影响

采用长江中下游湖泊典型沉水植物乡土种轮叶黑藻(Hydrilla verticillata)、穗状狐尾藻(Myriophyllum spicatum)和外来种伊乐藻(Elodea nuttallii)、水盾草(Cabomba caroliniana)叶片浸提液的组分:N-苯基-2-萘胺(4种沉水植物均有)、苯丙酮(伊乐藻特有)和苯并呋喃(水盾草特有),研究不同物质种类及浓度对3种附植藻类:普通小球藻(Chlorella vulgaris)、斜生栅藻(Scenedesmus obliqnus)和四尾栅藻(S.quadricanda)的相对生长率、藻细胞浓度、叶绿素含量等生长指标的影响。结果表明:3种物质均显著降低斜生栅藻和普通小球藻的细胞浓度以及叶绿素含量,对四尾栅藻生长的抑制较弱。3种附植藻类生长指标对不同物质浓度及处理时间的响应存在显著差异,呈现低浓度促进、高浓度抑制现象,随时间推移藻类显示出明显的生长趋势。物质作用效果:苯丙酮苯并呋喃N-苯基-2-萘胺,表明外来种沉水植物叶片浸提液中特有物质具有较强的抑藻效应。     

植物生理学实验中一类偶氮化合物的分光光度检测

偶氮化合物在可见光特定波长下有最大吸收峰,但对这一特定波长认定目前仍不统一。本试验利用分光光度计法测定了偶氮化合物的特定吸收峰。结果表明：NO2-、对氨基苯磺酸（或磺胺）及α-萘胺在酸性条件下形成偶氮化合物特定吸收峰在A520nm处,并非A510nm、A530nm或A540nm。     

NT-proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定

旨在制备并鉴定抗人NT-pro BNP特异性单克隆抗体。采用重组NT-pro BNP蛋白免疫Balb/c小鼠,取血清效价高的脾细胞与SP2/0细胞融合,经HAT筛选和有限稀释法亚克隆,获得阳性杂交瘤细胞株,用动物体内诱生法制备腹水,用正辛酸-硫酸铵沉淀法将抗体纯化,并测定抗体的亚类、效价、特异性及相对亲和力。结果表明,获得4株能稳定分泌抗人NT-pro BNP单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为1G12、1B2、3D5和2D11。抗体Ig亚类,1G12和1B2为Ig G2a型,2D11为Ig G1型,3D5为Ig G2b型;1G12,1B2和3D5的抗体效价达到106,而2D11的效价仅达104。特异性好,1G12、1B2、3D5和2D11四株抗体的亲和常数依次为9.32×1011、1.07×1012、2.31×1012和6.33×1010。成功制备了特异性抗人NT-pro BNP单克隆抗体。     

小鼠循环肝癌细胞模型的建立与评价

目的采用小鼠肝癌Hepa 1-6细胞建立小鼠肝癌循环肿瘤细胞(CTCs)模型。方法采用雄性C57BL/6小鼠108只,按照体重分为3组,每组36只。3个组分别每只尾静脉接种0.2 m L的浓度为1×106、5×106和1×107个/m L的小鼠肝癌Hepa 1-6细胞单细胞悬液。各组分别于接种后第1、5、9、13、17、21天检测采血,采用流式细胞术检测,计算2万个有核细胞中CTCs数目及比例、相对CTCs抑制率,记录动物死亡率。(2)采用雄性C57BL/6小鼠80只,按体重分为2组,分别为模型对照组、甲苯磺酸索拉菲尼组,每组40只。每只尾静脉接种0.2m L的浓度为5×106个/m L的Hepa 1-6细胞单细胞悬液,接种后第2天开始灌胃给予甲苯磺酸索拉菲尼(50 mg/kg),连续21 d,并于给药第3、8、15、21天采血进行CTC检测。结果 (1)接种浓度为1×106个/m L的细胞悬液后,第1、5、9、13、17、21天的动物CTCs比例为:25.1%、18.1%、8.9%、4.4%、2.9%、0.3%,未出现动物死亡;接种浓度为5×106个/m L的细胞悬液后,第1、5、9、13、17、21天的动物CTCs比例为:40.4%、35.4%、15.4%、9.0%、6.6%、4.1%,未出现动物死亡;接种浓度为1×107个/m L的细胞悬液后,第1、5天的动物CTCs比例为:39.1%、33.5%,在接种完毕之后立即出现动物死亡,且所有动物在接种后第7天全部死亡。(2)甲苯磺酸索拉菲尼给药期间D3、D8、D15、D21相对循环肿瘤细胞清除率分别为:-7.5%、4.6%、55.3%、-94.5%,与模型对照组比较差异有显著性(P0.05或P0.01)。结论采用浓度为5×106个/m L小鼠肝癌细胞Hepa 1-6悬液尾静脉注射可建立小鼠肝癌CTC模型,可用于抑制循环肿瘤细胞药物的筛选与评价。     

CYP2D亚家族基因在脊椎动物中的研究进展

细胞色素P450(CYP)对有机体的生存至关重要。CYP2D亚家族是CYP超家族的一个成员,在哺乳类、鸟类和两栖类都有发现,该亚家族因能对临床上很多药物进行代谢而得到广泛关注。由于在人类药品氧化Ⅰ相起重要催化作用,CYP2D亚家族基因研究主要集中在哺乳动物中的模式种,而在其他脊椎动物中研究比较少。本研究从CYP2D亚家族基因在脊椎动物(哺乳类、鸟类、两栖类和其他动物)中的进化研究,以及不同动物CYP2D基因与人类CYP2D基因的同源性方面进行综述。     

人PSP94与TNFα衍生物联合治疗人前列腺癌的实验研究

构建了表达人 PSP94、TNFα衍生物 ( TNFα D1 1 a)及 PSP94与 TNFα D1 1 a( PSP94- TNFαD1 1 a)双功能蛋白真核表达质粒 pc DNA- TNFα D1 1 a、pc DNA- PSP94和 pc DNA- PSP94- TNFαD1 1 a,与 rh PSP94和 rh TNFα D1 1 a蛋白分别在人前列腺癌裸鼠移植瘤动物模型上进行了 PSP94与 TNFαD1 1 a联合治疗人前列腺癌的实验研究 .当动物肿瘤直径长至约 1 0 mm时 ,将以上 3种真核表达质粒分别以 50 μg/只的量给相应组动物的左右四头肌内注射一次 ,同时设 pc DNA3.0空载体对照组 ;rh PSP9450μg/kg、rh TNFαD1 1 a 1 0 0万单位 /kg、rh PSP94和 rh TNFαD1 1 a以同样剂量联合给药 ,肌肉注射 ,每 d一次 ,连续 1 0 d,同时设环磷酰胺阳性对照组和生理盐水阴性对照组 .基因治疗动物给药后第 1 5d处死 ,蛋白治疗组停药后第 2 d处死 ,观察疗效 ,计算抑瘤率 .结果显示 ,以上述方式给药 ,无论是基因治疗组还是重组蛋白组 ,给 PSP94的动物肿瘤虽然未见明显缩小 ,但肿瘤组织均出现不同程度的坏死和液化现象 ;给 TNFαD1 1 a的未见明显的抑瘤效果 ;PSP94-TNFαD1 1 a融合基因或 rh PSP94+ rh TNFαD1 1 a联合给药 ,不仅肿瘤有所缩小 ,而且也有不同程度的坏死和液化现象出现 .初步认为 :( 1 ) PSP94有一定的抗前列腺     

我国两株登革2型病毒5′和3′端非编码区序列测定及二级结构分析

 为测定我国两株临床症状、乳鼠神经毒力不同的登革 2型病毒流行株 5′和 3′端非编码区序列 (untranslated region,UTR) ,分析二级结构差异与毒力变化的关系 ,分别从 D2 - 0 4、D2 - 44株感染的 C6/ 36细胞及鼠脑中提取总 RNA.以该 RNA为模板 ,利用 RACE法 ,分别扩增了 D2 - 0 4、D2 -44株的 5′和 3′末端 c DNA片段 .将其分别与 p GEM- T载体连接得到重组质粒 ,测定上述 c DNA插入片段的序列 .用 RNAdraw软件预测 D2 - 0 4、D2 - 44株 5′和 3′端非编码区的二级结构 .D2 - 0 4、D2 -44株 5′端和 3′端非编码区分别有 96和 454个核苷酸 .其中 5′非编码区 59位 C(D2 - 0 4 )→T(D2 -44 ) ,使 D2 - 44二级结构稳定性下降 ;3′端非编码区有 1 5个核苷酸不同 ,其中 T(355)→ A,T(32 6)→ G引起了所在位置二级结构自由能变化 ,且分别位于两个保守序列区 (conserved sequence,CS)CS1、CS2 A.这些位点变化可能与毒力有关 .     

我国两株登革2型病毒5′和3′端非编码区序列测定及二级结构分析

为测定我国两株临床症状、乳鼠神经毒力不同的登革 2型病毒流行株 5′和 3′端非编码区序列 (untranslated region,UTR) ,分析二级结构差异与毒力变化的关系 ,分别从 D2 - 0 4、D2 - 44株感染的 C6/ 36细胞及鼠脑中提取总 RNA.以该 RNA为模板 ,利用 RACE法 ,分别扩增了 D2 - 0 4、D2 -44株的 5′和 3′末端 c DNA片段 .将其分别与 p GEM- T载体连接得到重组质粒 ,测定上述 c DNA插入片段的序列 .用 RNAdraw软件预测 D2 - 0 4、D2 - 44株 5′和 3′端非编码区的二级结构 .D2 - 0 4、D2 -44株 5′端和 3′端非编码区分别有 96和 454个核苷酸 .其中 5′非编码区 59位 C(D2 - 0 4 )→T(D2 -44 ) ,使 D2 - 44二级结构稳定性下降 ;3′端非编码区有 1 5个核苷酸不同 ,其中 T(355)→ A,T(32 6)→ G引起了所在位置二级结构自由能变化 ,且分别位于两个保守序列区 (conserved sequence,CS)CS1、CS2 A.这些位点变化可能与毒力有关 .     

维生素D与佝偻病

维生素D为类固醇物质,具有抗佝偻病的作用。其种类很多,但以D_2(麦角钙化醇)及D_3(胆钙化醇)较为重要(见图1)。D_3主要含在肝、牛奶、蛋黄等动物食物中,皮肤中7-脱氢胆固醇经紫外线照射后能转变为D_3。D_2由含在藻类、植物油及酵母中的麦角固醇亦经紫外线(OH)_2-D_3>是在肾脏里进行的,由肾细胞的线粒体1-羟化酶催化。1,25-(OH)_2-D_3是具有高度生物活性的物质,作用于靶细胞。     

长江口北支大型底栖动物群落周年变化特征

分析了长江口北支滩涂大型底栖动物的群落结构和多样性变化特征。共采集大型底栖动物78种,包括环节动物7种、软体动物23种、节肢动物28种、脊索动物18种、其它两种,全年优势种有8种。密度为0.08 ind/m^2（1月）-1.24 ind/m^2（7月）,生物量为0.006 g/m^2（2月）-0.58 g/m^2（5月）,Margalef丰富度指数（D）为0.82（1月）-3.88（7月）,Pielou均匀度指数（J）为0.60（9月）-0.86（1月）,Shannon-Wiener多样性指数（H＇）为1.59（2月）-2.76（10月）。底栖动物密度与环境因子进行相关性分析显示,北支潮间带的大型底栖动物群落按照盐度、沉积特征等不同可分为3组,盐度和温度是影响底栖动物群落分布的主导因子。     

利用底栖动物监测严家湖农药污染

本文报道了严家湖氧化塘建成前后底栖动物群落变化,共发现寡毛类12种,水生昆虫幼虫15种,软体动物8种,其他动物2种。讨论比较3种监测方法:(1)依据底栖动物群落结构各大类的比例,提出了六级标准;(2)用群落的多样性指数,由Shannon和Weaver的公式计算,并结合化学数据比较,提出D=0,D1,D=1—2,D=2—3.5,D=3.5—5,D5六级评价;(3)用底栖动物的残留物积累,分析不同污染带的动物(Limnodrilus hoffmeisteri,Glyptotendipes sp.,Bellamya aeruginosa,Anodonta pacifica)体内的BHC。作者认为群落结构方法比较好。文中还讨论了水体富营养化问题。