阿糖胞苷对大鼠海马神经元原代培养的影响

目的：探讨在大鼠海马神经元原代培养过程中,阿糖胞苷对培养神经元的影响。方法：将新生24 h大鼠,分离出海马组织,进行原代海马神经元培养,再将细胞分为阿糖胞苷组和对照组,阿糖胞苷组加入1μmol/L阿糖胞苷,通过检测神经元特异性标志物微管相关蛋白-2（Map-2）计算培养神经元的数量,通过台盼蓝染色法观察细胞的存活率。结果：培养第7天,阿糖胞苷组神经元数量为（11±3）个,对照组为（10±4）个,两组无明显差异;阿糖胞苷组神经元细胞在培养第14天时存活率为74%,培养第21天时存活率为49%,而对照组神经元14天时存活率为96%,21天存活率为88%,两组神经元存活率差异明显。结论：原代培养海马神经元时,阿糖胞苷对神经元产量及形态影响不明显,但是由于阿糖胞苷的毒性作用,明显缩短神经元的存活时间,影响长期培养神经元的存活率。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和Jun基因表达的影响

目的 :观察低氧预处理对缺氧 复氧后大鼠海马神经元Jun表达的影响。方法 :取培养 12d的两组 (对照组和低氧预处理组 )神经元 ,同时置于缺氧环境 (0 .90L LN2 0 .10L LCO2 )中培养 4h后取出 ,置含 0 .10L LCO2 和空气的培养箱内复氧培养 2 4h和 72h ,于不同时间取出 ,观察神经元存活数 ,并用抗Jun抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察Jun表达阳性和阴性神经元数目 ,计算Jun表达神经元所占百分率。结果 :经低氧预处理的海马神经元缺氧 复氧后Jun表达阳性神经元百分率较对照组明显减少 ,神经元存活数明显高于对照组。结论 :低氧预处理可使海马培养神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧 复氧后神经元Jun的表达。提高神经元存活数     

吗啡对大鼠海马神经元突触传递的作用及机制探讨

目的 :从离子通道角度研究吗啡对中枢神经系统兴奋性及抑制性突触传递的作用并探讨其机制。方法 :　原代培养新生Wistar大鼠的海马神经元。采用膜片钳技术研究吗啡对其兴奋性及抑制性突触后电流及谷氨酸诱发电流的影响。结果 :①吗啡可明显增强海马神经元兴奋性突触传递 ,加吗啡后自发兴奋性突触后电流 (sEPSC)的发放频率增加了 ( 2 0 7.8± 2 0 .9) %。此作用可被阿片受体阻断剂纳洛酮阻断 (P <0 .0 1) ;②吗啡对微小兴奋性突触后电流 (mEPSC)的发放频率及谷氨酸诱发电流的幅度没有明显影响 (P >0 .0 5 ) ;③吗啡可明显抑制神经元自发抑制性突触后电流 (sIPSC) ,纳洛酮可拮抗吗啡作用 (n =13 ,P <0 .0 1)。结论 :实验结果提示吗啡对海马神经元的兴奋作用不是由于吗啡直接作用于兴奋性氨基酸—谷氨酸突触传递过程 ,而是可能由于抑制了抑制性中间神经元 ,间接产生的兴奋作用。     

甘麦大枣汤对抑郁模型大鼠海马神经元突触结构及结构蛋白表达的影响

目的:观察甘麦大枣汤对抑郁模型大鼠行为学及单胺递质的影响,并从突触结构及结构蛋白MAP-2与GAP-43表达改变探讨其潜在作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、氟西汀组(10.8mg/kg)、甘麦大枣汤高、低剂量组(9.72、4.86 g/kg),每组12只。除对照组外,其余各组大鼠均采用慢性不可预见性温和应激(CUMS)建立抑郁模型,并于造模同时给药组灌胃给药,连续21 d。采用糖水消耗实验和旷场测试评价大鼠抑郁样行为,ELISA法检测海马单胺递质5-HT、NE含量,Golgi染色观察神经元突触损伤情况,免疫组化法和Western blot法检测海马突触结构蛋白MAP-2和GAP-43的表达。结果:与对照组比较,抑郁模型大鼠糖水偏好度及自主活动评分均显著下降(P<0.01),海马5-HT、NE含量显著下降(P<0.01),树突棘缺失明显,同时MAP-2和GAP-43表达均显著下调(P<0.01);甘麦大枣汤干预后,模型大鼠抑郁样行为明显缓解(P<0.01),5-HT、NE含量显著升高(P<0.05),树突棘密度、长度及分枝增加,...     

重组人白细胞介素-6对缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax 表达和神经元凋亡的影响

实验在培养的大鼠海马神经元中观察了重组人白细胞介素-6（recombinant human interleukin-6,rhIL-6）对缺氧-复氧后Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响。把培养12d的大鼠海马神经元分为对照组和rhIL-6组,同时于缺氧环境（90% N2 10% CO2）中培养2、4h后,再于常氧培养箱内复氧培养24和72h。于不同时间取出,分别用抗Bcl-2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色,观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax的表达,并用原位末端标记（TUNEL）法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果可见,与缺氧前相比,缺氧-复氧后24和72h,海马神经元Bal-2表达明显减弱,Bax表达明显增强,凋亡神经元明显增多。经rhIL-6预处理的海马神经元与对照组相比,缺氧-复氧后24和72h,Bcl-2表达明显增强,Bax神经明显减弱,凋亡神经元明显减少。本实验结果提示,rhIL-6对海马神经元缺氧-复氧损伤具有一定的保护作用。     

ELK-1/JNK/c-Fos对左归降糖解郁方(ZGJTJYF)体外培养的模拟糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的:研究信号通路ELK-1/JNK/c-Fos在左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)环境下抗海马神经元凋亡中的作用。方法:原代培养海马神经元,加入高糖(150 mmol/L)+皮质酮(200μmol/L),构建DD体外细胞模型;将培养的海马神经元细胞随机分为5组:空白血清组、正常组、左归降糖解郁方含药血清组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)含药血清组和模型组(每组3个复孔)。模型组和正常组给予等量培养液,其余组加入相应体积分数10%的相应血清,均干预18 h。分别采用Hoechst染色、高内涵细胞成像分析技术和RT-PCR技术分别检测海马神经元凋亡情况及检测凋亡相关ELK-1、JNK和c-Fos蛋白和基因的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞凋亡明显,其海马神经元凋亡数量明显增多,ELK-1、JNK和c-Fos的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,左归降糖解郁方含药血清组和阳性药含药血清组大鼠海马神经元可见局部亮点明显减少,凋亡细胞数显著减少,ELK-1、JNK和c-Fos蛋白及mRNA表达均明显下调(P<0.05),且神经网络及树突连接情况得到明显改善。结论:左归降糖解郁方可以减低DD环境下海马神经元中Elk-1、JNK、c-fos表达而起到抗凋亡的效果。     

芋螺毒素SO3对大鼠海马神经元缺氧后胞内游离钙离子浓度的影响

目的:研究芋螺毒素SO3对培养大鼠海马神经元缺氧后胞内游离钙离子浓度的影响.方法:运用激光共聚焦显微镜(CLSM)测定缺氧后大鼠海马神经元胞内游离钙离子浓度的变化.结果与结论:芋螺毒素SO3可以明显抑制因缺氧所致原代培养大鼠海马神经元胞内游离钙离子浓度的上升.     

低氧预适应大鼠脑脊液减轻氧糖剥夺对培养新生鼠海马神经元的损伤及可能的机制

本文旨在观察低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC) Wistar大鼠脑脊液对新生鼠海马神经元氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)损伤的影响及机制.原代培养大鼠新生鼠(出生12 h)海马神经元,随机分为正常对照组、OGD组(OGD培养1.5 h)、正常脑脊...     

SO2代谢衍生物对大鼠海马CA1区神经元瞬间外向钾电流和延迟整流钾电流的影响

本文利用全细胞膜片钳技术研究了SO2 代谢衍生物———NaHSO3 和Na2 SO3 (二者分子比为 1∶3)对大鼠海马CA1区神经元瞬间外向钾电流 (IA)和延迟整流钾电流 (IK)的影响。结果表明 ,SO2 代谢衍生物可显著增大IA 和IK,且呈剂量依赖性关系 ,使IA 和IK 增大 5 0 %的剂量分别为 2 6 19μmol/L和 14 5 0 μmol/L。此外还与电压呈依赖性关系 ,但不具有频率依赖性。结果还表明 ,10 μmol/LSO2 代谢衍生物不影响IA 的激活过程 ,而对IK 的激活过程有非常显著的影响 ,给药前后IK 的半数激活电压分别为 17 6 4± 7 31mV和 13 43± 2 0 0mV (n=10 ,P <0 0 1) ,但不改变其斜率因子。另外 ,10 μmol/LSO2 代谢衍生物还非常显著地影响IA 的失活过程 ,给药前后其半数失活电压分别为 - 6 5 93± 1 97mV和 - 5 9 2 2± 3 83mV (n =10 ,P <0 0 1) ,但不改变其斜率因子。由此推断 ,SO2 代谢衍生物增大大鼠海马CA1区神经元的IA 和IK,促进IK 的激活过程 ,并抑制IA 的失活过程 ,可导致胞内K 通过K 通道的外流增加 ,胞内K 浓度降低 ,造成中枢神经元功能紊乱 ,诱导神经细胞凋亡。这意味着SO2 代谢衍生物对中枢神经系统具有损伤作用 ,从而提示大气SO2 污染可能与一些中枢神经系统疾病的发生以及衰老有关 [动物学报 49(1) :73     

海马齿状回内beta肾上腺素能受体对睡眠剥夺大鼠空间学习记忆的作用及其机制*

目的: 探究海马齿状回(DG)内beta肾上腺素能受体(beta-AR)对睡眠剥夺(SD)大鼠空间学习记忆的作用及其机制。方法: 本研究应用剥夺杆式睡眠剥夺仪建立21 d(18 h/d)慢性SD模型。动物分为4组(n=6):对照组,ISO组(异丙肾上腺素组),SD组和SD+ISO组。每天训练前30 min,以0.5 ml/min速度向DG区微量注入ISO (2 mg/μl) 或盐水1 ml。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力。免疫组织化学和免疫印迹法检测海马DG区c-Fos和脑源性神经营养因子(BDNF)表达。结果: 与对照组相比, SD组大鼠前4 d逃逸时间显著增加(P＜0.01),且第5日目标象限时间比和穿台次数明显减少(P＜0.05),与SD组相比SD+ISO组上述行为学指标显著改善(P均＜0.05)。与对照组比较,SD组大鼠海马DG区c-Fos和BDNF蛋白表达水平均显著降低(P均＜0.05),然而与SD组比较,SD+ISO组两蛋白表达水平明显增加(P均＜0.05)。结论: 海马DG区beta-AR激活可改善SD诱发的空间学习和记忆障碍,其机制可能与上调DG区c-Fos和BDNF蛋白表达有关。     

Comparison between low-level 50 Hz and 900 MHz electromagnetic stimulation on single channel ionic currents and on firing frequency in dorsal root ganglion isolated neurons

Alteration of membrane surface charges represents one of the most interesting effects of the electromagnetic exposure on biological structures. Some evidence exists in the case of extremely low frequency whereas the same effect in the radiofrequency range has not been detected. Changes in transmembrane voltages are probably responsible for the mobilization of intracellular calcium described in some previous studies but not confirmed in others. These controversial results may be due to the cell type under examination and/or to the permeability properties of the membranes. According to such a hypothesis, calcium oscillations would be a secondary effect due to the induced change in the membrane voltage and thus dependent on the characteristics of ionic channels present in a particular preparation. Calcium increases could suggest more than one mechanism to explain the biological effects of exposure due to the fact that all the cellular pathways using calcium ions as a second messenger could be, in theory, disturbed by the electromagnetic field exposure. In the present work, we investigate the early phase of the signal transmission in the peripheral nervous system. We present evidence that the firing rate of rat sensory neurons can be modified by 50/60 Hz magnetic field but not by low level 900 MHz fields. The action of the 50/60 Hz magnetic field is biphasic. At first, the number of action potentials increases in time. Following this early phase, the firing rate decreases more rapidly than in control conditions. The explanation can be found at the single-channel level. Dynamic action current recordings in dorsal root ganglion neurons acutely exposed to the electromagnetic field show increased functionality of calcium channels. In parallel, a calcium-activated potassium channel is able to increase its mean open time.     

Synthesis of (+)-(R)- and (−)-(S)-5-hydroxy-2-methyl-2-dipropylaminotetralin: Effects on rat hippocampal output of 5-HT, 5-HIAA,and DOPAC as determined by in vivo microdialysis

Racemic 5-methoxy-2-methyl-2-dipropylaminotetralin ( 3 ) has been prepared by a short synthetic route, in which the N,N-dipropyliminium perchlorate of 5-methoxy-2-tetralone ( 4 ) is a key intermediate. Racemic 3 was resolved by crystallization of the corresponding diastereomeric di-p-toluoyltartrates. The enantiomeric excess (%ee) of the phenolic derivatives of (+)-(R)- and (?)-(S)-3 [(+)-(R)- and (?)-(S)-2] was determined by ¹HNMR spectroscopic analysis of the corresponding diastereomeric (?)-(R)-1,1′-binaphthyl-2,2′-diylphosphoric acid salts utilizing ¹³C satellites. X-ray crystallography established the absolute configuration of (?)-(S)-2 · HCl. The enantiomers of 2 were tested for hippocampal output of 5-hydroxytryptamine, 5-hydroxyindoleacetic acid, and dihydroxyphenylacetic acid in rats by use of in vivo microdialysis. The (?)-(S)-enantiomer appeared to affect 5-HT-turnover, whereas (+)-(R)- 2 was inactive. Results obtained provide support for the previously reported hypothesis that the inactivity of (?)-(S)- 2 at central DA receptors is caused by the steric bulk of the C(2)-methyl group. This makes it possible to define a “DA D2 receptor essential volume.” © 1993 Wiley-Liss, Inc.