小鼠富集着丝粒DNA在小鼠减数分裂粗线期染色体上的原位杂交

本工作用Hoechst 33258及着丝粒特异抗体间接免疫荧光法显示的小鼠粗线期染色体主缢痕区,与以小鼠富集着丝粒(SFA)DNA为探针在粗线期染色体上的原位杂交主缢痕区作了比较。发现SFA DNA探针不仅杂交于全部常染色体联会复合体上的着丝粒区,并且杂交于着丝粒周围的异染色质区;而且,也杂交于X,Y染色体的着丝粒区。由此结论:此富集SFA DNA中含有全套常染色体及X,Y染色体的SFA DNA。     

在植物粗线期染色体和DNA纤维上的荧光原位杂交技术

介绍了两种荧光原位杂交技术的详细实验步骤。第一种技术是在减数分裂粗线期染色体上的荧光原位杂交,包括从花粉母细胞中制备粗线期染色体和在这种染色体上定位ＤＮＡ序列,其分辨率水平能够达到１００ｋｂ。第二种技术是从植物细胞核中制备ＤＮＡ纤维,并在上面进行原位杂交,能够直接分析ＤＮＡ序列的分子排列关系,其分辨率水平能达到几个ｋｂ。为了说明这两种原位杂交技术在研究基因组和染色体结构、构建高分辨率的ＤＮＡ物理图谱上的能力,将展示用该技术直接分析番茄染色体端粒重复序列和端粒联接重复序列的染色体定位和ＤＮＡ分子排列。     

利用粗线期染色体和DNA纤维的FISH分析水稻端粒序列

利用粗线期染色体和DNA纤维的荧光原位杂交(FISH)技术分析了水稻广陆矮四号(Oryzasativassp.indicacv.GuangluaiNo.4)的端粒序列。粗线期染色体荧光原位杂交结果表明,大多数染色体的末端都有端粒串联重复,但信号的强度在不同染色体上是不同的。伸展DNA纤维荧光原位杂交结果显示,端粒最长的线状信号长度为6.55μm,最短的为1.82μm,依据2.51kb/μm的标准,它们分别相当于16.44kb和4.56kb。端粒的平均信号长度为3.62±1.32μm,相当于9.09±3.31kb。由此可以估计,最长的、最短的和平均长度的端粒拷贝数约为2349、651和1298±473。     

小鼠细胞核富集着丝粒部分特性的研究

我们从分离核获得的颗粒状小鼠着丝粒富集部分的特性是用间接免疫荧光法,微管组织中心(MTOC)活性的测试,SDS-PAGE 及荧光标记原位杂交法进行研讨的。这部分中的多数颗粒是DNA 和动点蛋白质的复合物,并且显示具有MTOC 活性。从这部分提出的DNA 杂交于小鼠腹水癌细胞所有的染色体的初级缢痕处。从这部分的蛋白质中检出的动点蛋白质,其主要蛋白质的分子量是55及59 KD。以上事实说明,就如我们过去已报告过的,这一部分是核富含着丝粒的部分。     

小鼠的克隆着丝粒(SFA)DNA的鉴定

着丝粒是真核染色体上的重要细胞器,是真核染色体作为基因载体行使其遗传功能的关键结构.着丝粒DNA首先是从酵母中分离克隆并被用以构建酵母人工染色体.鉴于真核有丝分裂机制研究和构建高等动物人工染色体研究的需要,从分离和检定过的小鼠着丝粒DNA库中筛选出了6#着丝粒DNA(SFADNA),并用荧光原位杂交法(FISH)对其进行了在染色体上的定位检定.用缺口平移法和PCR法分别标记了SFA DNA和SFA DNA中的小鼠寡份卫星DNA作为探针,分别与小鼠腹水癌细胞和小鼠L929细胞进行原位杂交;并用荧光抗体显示杂交信号的位置.结果,SFA DNA在两种细胞的中期染色体上的杂交信号都位于亚末端的初级缢痕处,表现为单一粗大的斑块.寡份卫星DNA在两种细胞的中期染色体上的杂交信号亦都位于亚末端的初级缢痕处,但极大多数的斑点均表现为成对的细小斑点.初级缢痕正是染色体着丝粒所在的特征性部位.故以上结果说明定位于该部位的克隆的6#SFA DNA,和其中的小鼠寡份卫星DNA都来源于小鼠着丝粒DNA.     

着丝粒横裂和着丝粒并合及其在高等植物染色体进化中的意义

本文讨论了着丝粒横裂和并合及其在高等植物染色体进化中的意义。着丝粒横裂和着丝粒并合是两个矛盾又辩证统一的过程,是染色体的基本变异形式之一,它们同时影响着植物类群的染色体基数、核型对称性、连锁关系、交叉频率和位点等细胞遗传学的重要方面.从而在高等植物染色体进化中起着重要作用,着丝粒和端粒的复制模型为着丝粒的横裂与并合提供了可能的机理,但尚待直接的生物化学证据的证实,原始基数的确定是判别着丝粒横裂与并合的关键。     

玉米粗线期染色体的高分辨率染色粒图

经温和固定和展片的玉米小孢子母细胞减数分裂的粗线期染色体,在电镜下,着丝粒和大量的电子致密的染色粒清晰可辨。其数量和位置自减数分裂早偶线期至早双线期是稳定和可重复的。为此,我们对粗线期的10条双价体中各条分别进行详细的染色粒分析,构建了一个完整的染色体组的染色粒图。总共识别和定位了达430±12(根据7套染色体组计数平均)染色粒。染色粒图可用于确定原位杂交法定位基因的详细分布区域,染色体重排中断点的定位,识别外源单价体和由于不联会或脱联会而产生的单价体等。     

小鼠SFA DNA片段的克隆

本工作将富集小鼠着丝粒ＤＮＡ克隆于载体ＥＭＢＬ３,得到约２０００个克隆,建立了着丝粒基因文库。从中随机挑取２０个克隆,鉴定其克隆片段平均分子量大小约为１４ｋｂ。     

小鼠的克隆着丝粒（SFA）DNA的鉴定

着丝粒是真核染色体上的重要细胞器,是真核染色体作为基因载体行使其遗传功能的关键结构。着丝粒DNA首先是从酵母中分离克隆并被用以构建酵母人工染色体。鉴于真核有丝分裂机制研究和构建高等动物人工染色体研究的需要,从分离和检定过的小鼠着丝粒DNA库中筛选出6＃着丝粒DNA（SAF DNA）,并用荧光原位杂交法（FISH）对其进行了在染色体上的定位检定。用缺口平移法和PCR法分别标记了SFA DNA和SFA DNA中的小鼠寡份卫星DNA作为探针,分别与小鼠腹水癌细胞和小鼠929细胞进行原位杂交;并用荧光抗体显示杂交信号的位置。结果：SFA DNA在两种细胞的中期染色体上的杂交信号都位于亚末端的初级缢痕处,表现为单一粗大的斑块。寡份卫星DNA在两种细胞的中期染色体上的杂交信号亦都位于亚末端的初级缢痕处,但极大多数的斑点均表现为成对的细小斑点。初级缢痕正是染色体着丝粒所在的物征性部位。故以上结果说明定位于该部位的克隆的6＃SFA DNA,和其中的小鼠寡份卫星DNA都来源于小鼠着丝粒DNA。     

丽纹攀蜥粗线期染色体核型及微小染色体的分析

本文以精巢、四肢骨和脊椎骨为材料,利用直接制片法制备了丽纹攀蜥（Japalura splendida）染色体标本,首次对其精巢减数分裂粗线期染色体,特别是微小染色体的长度进行了测量,描述了染色体特征,并进行了核型分析.同时与二倍体细胞染色体的核型进行了比较,发现11对微小染色体类型中包括8对中着丝粒染色体、2对端着丝粒染色体和1对点状染色体.     

稻属不同染色体组着丝粒BAC克隆的分离和鉴定

着丝粒在真核生物有丝分裂和减数分裂染色体正常的分离和传递中起着重要的作用。通过构建5个稻属二倍体野生种的基因组BAC文库, 采用菌落杂交和FISH技术, 筛选和鉴定了各染色体组着丝粒克隆, 并且分析了这些克隆在不同基因组间的共杂交情况, 结果表明: (1) C染色体组的野生种O. officinalis 和F染色体组的野生种O. brachyantha具有各自着丝粒特异的卫星DNA序列, 并且O. brachyantha着丝粒还具有特异的逆转座子序列; (2) A、B和E染色体组的野生稻O. glaberrima、O. punctata和O. australiensis着丝粒区域都含有与栽培稻着丝粒重复序列CentO和CRR同源的序列; (3) C染色体组野生稻O. officinalis的2条体细胞染色体着丝粒具有CentO的同源序列, 同时也发现其所有着丝粒区域都包含栽培稻CRR的同源序列。这些结果对克隆稻属不同染色体组的着丝粒序列、研究不同染色体组间着丝粒的进化关系和稻属不同着丝粒DNA序列与功能之间的关系均具有重要意义。     

小鼠SFA DNA片段的克隆

本工作将富集小鼠着丝粒DNA克隆于载体EMBL3,得到约2000个克隆,建立了着丝粒基因文库。从中随机挑取20个克隆,鉴定其克隆片段平均分子量大小约为14kb。     

荧光原位杂交分析小麦-簇毛麦杂种减数分裂与染色体易位

利用基因组ＤＮＡ荧光原位杂交技术详细地研究了小麦－簇毛麦杂种染色体的减数分裂和配对行为,结果表明,在中期Ⅰ,小麦和簇毛麦染色体多呈两个单价体,在０．３％的ＰＭＣ中小麦与簇毛麦染色体发生配对;在后期Ⅰ时,单价体错分裂频率为３２．７％－３７．５％,另有０．７％的小麦－簇毛麦染色体重组易位出现;后期Ⅱ时,断列染色体的频率为２０．５％－２２．４％,还发现有０．８２％－１．７２％的自发易位染色体形成,此外,     

DNA纤维上的原位杂交技术

ＤＮＡ纤维上的荧光原位杂交（Ｆｉｂｅｒ－ＦＩＳＨ）技术是一种非重要的分子细胞遗传学技术。对于高分辨物理图的绘制、基因组和染色体结构的研究、致病基因的定位克隆等都有很大作用,本文介绍了该技术的基本操作和应用,以及与引物原位ＤＮＡ合成（ＰＲＩＮＳ）等技术相结合进行更精确基因定位的潜力。     

着丝粒区域DNA的研究进展

着丝粒是染色体的重要结构,在真核生物的细胞分裂中负责染色体的分裂分离。近年来对着丝粒的研究已经成为遗传学的一个热点。本文对着丝粒DNA的重复序列、着丝粒区域的基因及着丝粒的形成机制等作了简要的介绍。     

植物着丝粒结构和功能的研究进展

着丝粒是真核生物有丝分裂和减数分裂染色体正确分离和传递所必需的染色体区域。十多年来, 已对包括拟南芥、水稻、玉米在内的一些植物的着丝粒进行了较深入的分子生物学研究。在不同的植物间, 着丝粒DNA的保守性很低, 呈现快速进化, 但着丝粒的DNA序列类型和组织方式基本相似, 一般是由夹杂排列着的卫星DNA串联重复阵列和着丝粒专一的反转录转座子构成。与着丝粒DNA相反, 着丝粒/着丝点的结构性和瞬时蛋白质在包括植物在内的真核生物中保守。与其他真核生物的情况一样, 拥有含着丝粒组蛋白H3(CENH3)的核小体是植物功能着丝粒染色质最基本的特征, CENH3在着丝粒染色质的识别和保持中起着关键作用。     

染色体C-分带和原位杂交技术在遗传学上的应用

染色体Ｃ－分带和原位杂交技术在遗传学上的应用田①卢一凡邓继先刘广田（中国农业大学植物科技学院,北京１０００９４）（军事医学科学院生物工程研究所,北京,１０００７１）从分子水平研究作物优良性状基因的结构与功能,首先是如何获得这些优质基因。遗传育种...     

恶性血液病中着丝粒和着丝粒周染色体重排的研究进展

用染色体特异的卫星DNA探针染色体荧光原位杂交（FISH）分析恶性血液病,发现着丝粒和着丝粒周染色体的重排并非罕见。分子生物学技术和基因组计划的发展,促进了对异染色质分子本质的研究。本就着丝粒和着丝粒周异染色质的分子结构及其重排机制作一综述。     

莲藕染色体上荧光原位杂交方法的初探

用酶解滴片法制备莲的染色体标本片,在传统的荧光原位杂交(FISH)的方法上进行改进,得到了一种适合于莲的高效荧光原位杂交方法,为莲的分子细胞遗传学研究提供技术上的帮助。