同位素与生物素标记的HCMV DNA探针检测婴儿肝炎综合症血和尿标本的比较

用~(32)P和生物素标记的克隆化的人巨细胞病毒(HCMV)AD169株DNA片段作探针,采用DNA-DNA斑点杂交法,对照检测了27例婴儿肝炎综合症患者(血清学检测为非甲非乙型肝炎者)临床血、尿标本的HCMV-DNA。其中16份血标本呈阳性,占59％;9份尿标本呈阳性,占33％。初步结果表明,血标本中HCMV DNA检出率比尿标本检出率高26％。标记的~(32)P探针可检测10pg同源DNA,生物素探针可检测50Pg同源DNA,均不与其它疱疹病毒及未感染的人胚肺细胞DNA杂交。将其中26份血标本的HCMV DNA杂交结果与抗HCMV IgM ELISA检测结果相比较,符合率为65％。     

9月在欧美销售诊断衣原体属用PCR药盒

瑞士Hoffmann-La Roche 公司从9月开始在欧洲、美国销售使用聚合酶链反应法(PCR 法)的检查衣原体属用的DNA 探针诊断药盒。使用PCR 法的DNA 诊断药盒的开发为世界首创。DNA 诊断药已到新阶段。估计在日本93年下半年以后销售。DNA 探针诊断药包括在日本销售的东雷、中外制药公司等的产品;即使不扩增也能检测出基因本身     

用核酸杂交法检查北京地区幼儿园正常儿童尿中人巨细胞病毒DNA

以克隆的人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,简称HCMV)DNA片段做探针,用核酸杂交方法检查了50例北京地区幼儿园正常儿童的尿标本。查出HCMV DMA阳性者24例,占48％。在两个群体和两个年龄组之间,阳性检出率有显著性差异。利用探针可查出同源DNA5～10pg,而不与其它病毒或细胞DNA杂交。标记不同的探针,使用不同的固定方法,其敏感性不同。此法可在分子水平上查出HCMV基因,比分离病毒更迅速敏感。     

卫生工业厂商协会(HIMA)DNA杂种探针会议要点

最近召开的名为“诊断试验的尖端:DNA探针”的专题会议,回顾了DNA杂交种探针的现状和将来的趋势。本文是卫生工业厂商协会医学科学部生物技术委员会发起的于1984年6月21日到22日在弗吉尼亚州的阿林顿召开的会议要点。在回顾DNA探针的基本技术时,Enzo Biochem公司研究部主任Dean Engelhardt提到,在双相测定中,杂交速率比靶DNA和探针都在溶液里慢2～10倍。双相测定中的靶DNA如同现在市售的探针一样,被固定在固体支持物上。所以,在做DNA杂交时,人们希望采用较现行双相法为快的单相测定法。在标记DNA探针方面,Enzo正在研制能将信息分子附     

日本宝酒造委托以色列Orgenics公司研制用于检测混入医药品中的核酸的 DNA探针

日本宝酒造(宝酿酒公司)委托以色列的 Orgenics 公司研制检测混入医药品中的 DNA的 DNA 探针。这种探针将用于检验药盒,以检测由基因重组所制造的医药品中是否混入了DNA。美国有规定,对由基因重组所制造的医药品须标明其中不含有多余的成分,他们利用DNA 探针检测混入的 DNA。但是,日本现在还没有这种规定,也还没有用干检测的制品。今后日本也将扩大研制基因重组的医药品,也将需要有检测 DNA 的检查。     

用DNA杂交技术检测临床分离株的四种耐四环素基因

采用DNA杂交技术对来自我国几个省的306株革兰氏阴性杆菌携带的耐四环素基因(Tet)的分布进行了研究。所有菌株均用15种生化反应数码分析法判定,绿脓杆菌用双歧法鉴定。用四种Tet探针检测结果如下：TetB占31．4％,TetD占25．2％TetA占1 2.5％,TetC占10．5％。与四种探针均不杂交者占36．6％。含1种基因的菌株占51．3％,含2种的占7．5％,含3种的占2．9％,含4种的占1．6％。不同地区的菌株的Tet种类不完全相同。还发现在严格控制的条件下杂交,TetA和Tetc有交叉反应。     

志贺氏菌属virG基因半抗原——Digoxigenin标记探针的制备及其同源性分析

用半抗原——Digoxigenin标记的福氏2a YSH6000的1．4kb virG DNA探针,检测73株痢疾杆菌(宋氏64株、福氏5株、志贺氏4株)、32株EIEC、17株耶氏菌属菌、5株伤寒杆菌和5株大肠杆菌的DNA同源性。前3种菌同时作Sereny试验,以进行比较。结果表明,痢疾杆菌及EIEC中均含virG同源区,其它被测菌则无此同源区。virG DNA仅与痢疾杆菌及EIEC的Sereny试验相关．而与耶氏菌属的Sereny试验无关。用virG DNA探针检测宋氏痢疾杆菌及EIEC的毒力,与Sereny试验结果比较。符合率分别为87．5％和90．9％。     

综合遗传学公司推出食品沙门氏菌快速诊断试验盒

综合遗传学(Integrated Genetics)公司最近推出它的第一个产品--检出食品沙门氏菌用的快速诊断试验盒。它被称为GENE-TRAK,是以DNA杂交技术为基础的。目前只能用于沙门氏菌的检出。该公司的科学家已分离出DNA探针,含有与沙门氏菌DNA互补的碱基序列模式。分离出可能存在于食品样品中的任何微生物的DNA链后,将沙门氏菌DNA探针加入样品中,若探针与存在于样品中的DNA单链杂交,则表明其中有沙门氏菌存在。     

光标生物素HBV-DNA探针及其临床应用

本文报告了应用生物素交联光敏补骨酯素(Bp,Biotin-Psoralen)标记HBV DNA探针的动力学研究和临床应用结果。表明化学合成Bp经366nm光照与DNA发生加成反应。能标记dsDNA,也能标记ssDNA。加热可使Bp-dsDNA变性,强碱则不能使Bp-dsDNA变性。临床DNA检测结果表明,应用Bp-HBV探针杂交,DNA检出率与HBeAg符合率达99.08％,与~(32)P-HBV符合率达98.8％,提示光标记Bp-HBV探针灵敏度接近同位素探针。     

DNA指纹技术的应用及局限性

DNA指纹图谱是一种在一单一实验中可检测出大量DNA位点差异性的分子生物学技术。自1985年Jeffeys et al,从人的肌红蛋白位点获得第一个多位点探针并用于检查人类基回的VNTRs以来,由于各种高水平探针如微卫星探针、寡聚核苷酸探针的相继问世,使DNA指纹技术在动植物科学研究、遗传疾病的诊断、基因图谱的绘制,遗传标记的寻找及法医学等方面得到广泛应用,充分表现了此技术的优越性。当然此技术还需进一步完善。     

酶标HBV DNA探针的研制与应用

本实验采用一种非放射性物质——碱性磷酸酶标记乙肝病毒HBV DNA制备分子探针。碱性磷酸酶在苯醌作用下与单链DNA联结,形成DNA和酶的共价复合物,即酶标探针。此探针通过分子杂交与待测DNA结合,与酶的底物作用显色,几小时内可观察结果,其最低检测量约为10pg。用此探针检测乙肝病人血清中的HBV DNA,与~(32)P标记的探针比较,酶标探针可检测出~(32)P标记探针检出率的95.7％。结果表明,所合成的酶标探针具有准确、简便、快速、安全而经济的优点,具有应用前景。     

人巨细胞病毒的生物素DNA探针的制备和应用

本研究用克隆的HCMV AD169株DNA片段,制备了生物素标记的DNA探针,建立了检测临床脐带血、尿标本中HCMV DNA的核酸探针杂交方法。该探针可测出100pg同源DNA,不与人胚肺细胞、Hep-2细胞DNA以及其他疱疹病毒的DNA发生反应。用核酸杂交方法检测了30份脐带血标本,有11例阳性,阳性率为33％。10例孕妇尿标本中,3例阳性,阳性率为30％。检测结果表明：我们建立的生物素标记的HCMV DNA探针的点杂交法,具有高度的特异性、敏感性,比分离病毒法更迅速,可用于HCMV感染的临床标本的病毒核酸检测。     

应用核酸斑点杂交法检查正常分娩期妇女尿中人巨细胞病毒DNA

用α-~(32)P-dcTP标记人巨细胞病毒(Cytomegalovirus Human type,简称HCMV)DNA片段做探针,用核酸杂交方法检测CMV DNA,其敏感性达Pg水平。并抽样检测了沈阳地区分娩期妇女尿标本。在25份标本中查出HCMV DNA阳性者占6份,排毒率24％,并对实验技术及实验结果进行了讨论。     

DNA探针改善子宫颈癌病毒的检测

由 Life Technologies 公司(马里兰州 Gaithersburg)和 Enzo Biochem 公司正在开发的 DNA 探针试验将比通常应用的检测人类乳头状瘤病毒(HPV)的巴氏涂片试验可靠得多。在过去的十年里,在美国,感染 HPV 病毒的人增加了十一倍。一些 HPV 病毒同子宫颈癌有关。去年,美国有52 000名妇女患此病,其中有7 000人已死于此病。在男子中,这一病毒也引起泌尿生殖器癌。该病毒的其它类型还可以引起生殖疣。传统的巴氏试验是不可靠的,因为它是利用显微镜检查受试细胞是否异常。这种试验的20%的结果查不出实际存在的病毒。Enzo Biochem 公司的新的试验是应用该公司专有的非放射性标记的系统。这个探针在     

用地高辛标记Y染色体特异探针检测人的性别

采用了一种新的DNA探针非同位素标记方法,即地高辛配基标记人Y染色体特异DNA探针,成功地用于人基因组中男性特异DNA的检测。同时,将此种方法与生物素标记探针方法作了比较。结果表明：地高辛配基标记探针方法优于生物素标记。     

分子生物学技术讲座（五）：放射性标记的DNA和RNA探针的制备

放射性标记的核酸探针（DNA和RNA探针）目前已被广泛地应用于分子生物学的各个领域,例如克隆的筛选,Southern杂交分析,基因表达水平的测定等等。放射性核酸分子探针是指特定的已知核酸分子片段,内含放射性核素（例：‘千、‘H和”S）,并能与被检测的核酸分子退火杂交（核酸序列互补）,因此可用于待测核酸样品中特定基因序列片段的探测。1探针的种类和选择根据核酸分子探针的来源及其性质可将其分成3大类,即：DNA探针、RNA探针和人工合成的寡聚核青酸探针。而DNA探针又可分为基因组DNA探针和。DNA探针。探针的选择是根据不…     

炭疽芽胞杆菌基因芯片探针文库的构建

为制备炭疽芽胞杆菌的基因芯片探针文库,以炭疽芽胞杆菌毒素质粒pX01和荚膜质粒pX02为原材料,用Sau3A I酶切pX01和pX02质粒DNA,Taq DNA聚合酶72℃补平加A,经AT克隆,PCR初步鉴定筛选出炭疽质粒片段的阳性克隆．DNA自动分析仪对克隆片段进行序列测定;用生物信息学方法对其片段进行同源性分析;并将克隆的探针打印于玻片上,制备成炭疽芽胞杆茵基因芯片,与炭疽杆茵质粒DNA样品进行初步芯片杂交的实验,杂交实验的阳性率达到了90％以上,证明大部分克隆探针属于炭疽芽胞杆菌．炭疽芽胞杆菌基因芯片探针文库的构建为基因芯片探针的制备摸索出一条简便、高效、可行的方法．     

~(125)Ⅱ标记病毒DNA探针制备方法的研究

本文报道以油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)DNA、单纯疤疹病毒(HSV)DNA、λDNA为材料,用国产~(125)I-碘化钠制备探针。探讨了离子强度,pH值、反应温度及时间诸因素对以三氯化铊为氧化剂核酸标记的影响。在pH值为4.8—4.9,离子强度(以Na~ 计)为0.1mol/L、反应温度为70℃、时间为30分钟条件下,可获得高比活性的产物。~(125)I的掺入率在10—30％之间,探针的比活性可超过10~6cpm/μgDNA。点杂交结果显示,探针最低可检测出1Pg同源DNA,探针的特异性强,存放于-20％冰箱的探针在两个月内最低检测量没有明显变化。     

乙型肝炎病毒DNA在患者血清及肝组织中存在状态的研究

对29例肝炎,1例尸检肝组织和血清中乙型肝炎病毒的DNA(HBV DNA)进行了研究,发现HBsAg( )/HBeAg( )患者中,有9/17(52.94％)血清HBV DNA阳性;HBsAg( )/抗-HBe( )患者中,2/6(33.33％)也为阳性。从30例肝组织中提取DNA经琼脂糖电泳,Southern吸印转移及分子杂交试验结果表明,27例HBV DNA阳性,全部有游离型HBV DNA。27例中有5例经用标记pBR322探针杂交排除非特异杂交带后,在高分子量区有HBV DNA特异的杂交带,提示有HBV DNA整合。     

正在开发猪呼吸器官病诊断药盒

日本制粉公司与全农共同开发猪慢性呼吸器官病的DNA探针诊断药,打算今年进入治疗试验。如果产品化,使用DNA探针的动物用诊断药将是首创产品。利用邻近夹层杂交法(AHM)检测病原菌的核酶RNA(rRNA)的诊断药仅用碱中和处理菌液,不需要进行特别处理,在2～3小时就能检测出10~4～10~5菌。特异性高,容易识别。