周期型马来丝虫感染期幼虫在人卵巢癌细胞系中的体外培养

周期型马来丝虫感染期幼虫(L_3)在三种含人卵巢粘液性囊腺癌细胞系(OMC_(685))的RPMI1640培养系统中均能蜕皮发育为L_4,幼虫最长存活66天,蜕皮率和完成蜕皮率可分别达57.1％和89.3％。在不含细胞系的培养液中,幼虫最长存活14天,基本上不蜕皮。本实验结果提示OMC_(685)细胞系可能产生某些有利于周期型马来丝虫L_3体外生存和发育的物质。     

RAPD在周期型马来丝虫种下分析的应用

本文用２０个随机引物对贵州荔波株（Ｌ株）、四川乐山株（Ｓ株）二个地理株周期型马来丝虫成虫基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析。结果每个虫株都扩增出三条带,其中１５４、２２０ｂｐ处二条带为Ｌ株、Ｓ株所共有。Ｌ株在１６３６ｂｐ,Ｓ株在８００ｂｐ处各有一个特有亮带,表明不同地理株马来丝虫都有同源性,但确实存在明显差异,通过本实验可以确定我国周期型马来丝虫已出现种内分化。     

周期型马来丝虫实验感染小白鼠体内发育的观察

本实验用长爪沙鼠体内周期型马来丝虫微丝蚴,感染东乡伊蚊收集感染期幼虫,经腹腔内注射５５只小白鼠（昆明种）后,定期抽查小白鼠腹腔液和解剖小白鼠观察丝虫发育情况。在１４天、３０天、６０天、１４０天和１６０天时,分别检获了Ⅲ期、Ⅳ期幼虫、童虫和成虫。成虫感染率为３４．６％（９／２６）。９１天还查出微丝蚴。实验结果表明：周期型马来丝虫可以在昆明种小白鼠体内发育到成虫并产生微丝蚴。     

两株近交小鼠对周期型马来丝虫的易感性

于长爪沙鼠体保种的周期型马来丝虫,其感染性幼虫(100条/只)接种于BALB/cCR和BALB/cJ两株小鼠腹腔内,都获得感染成功。在95只BALB/cCR株鼠(45,50)中,显性感染者8只(4,4),占8.42％;隐性感染者34只(17,17),占35.79％。共检获成虫110条,每鼠检获1—11条,平均2.62条。在30只BALB/cJ株鼠(18,12)中,12只雌鼠全部阴性;18只雄鼠中,2只为显性感染,4只为隐性感染,共检获成虫18条,每鼠检获1—5条,平均3.0条。两株小鼠中的10只显性感染鼠,有2只腹腔液内首次发现微丝蚴是在感染后80天,其最短潜隐期约为75天。     

周期型马来丝虫成虫和第三期幼虫扫描电镜的观察

近年来,不少学者应用扫描电镜观察恶丝虫(Wong和Brummer,1978)、盘尾丝虫(Franz,1980;Franz和Renz,1980)、彭亨丝虫(Aoki et al., 1980)、成虫和/或童虫、幼虫、亚周期型马来丝虫(Franz,1982)和周期型马来丝虫(程富川等,1982)成虫的形态。我们在1978年成功地用周期型马来丝虫感染长爪沙鼠之后,应用扫描电镜观察马来丝虫成虫和第三期幼虫的形态。现将结果报告如后。     

大鼠肝癌细胞系的体外培养、纯化及辐照效应

用二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌,取肝癌白色结节,０．２５％胰酶消化,ＲＰＭＩ—１６４０培养基建系成功,共获１３系肝癌细胞系,经反复传代（１０代以上）,细胞系均以肝实质瘤细胞和胆管上皮癌细胞为主,另外夹杂少量成纤维细胞。用ＰＨ７．２的ＰＢＳ冲洗、７５％酒精消毒流式细胞仪（ＦＣＭ）后,纯化该细胞来．收集肝实质癌细胞系,用６０Ｃｏγ射线辐照,剂量为８００Ｒａｄ和１０００Ｒａｄ,结果８００Ｒａｄ剂量使肝实质癌细胞生长受到明显抑制,细胞传代时间延长一倍,１０００Ｒａｄ剂量使细胞生长停止,不能再行传代。     

长爪沙鼠实验感染周期型马来丝虫

丝虫病为我国农村的常见病多发病之一。建立我国人体寄生丝虫比较理想的动物模型是丝虫病防治研究工作急待解决的课题之一。国内外已成功地将马来丝虫实验感染家猫及恒河猴等(Edeson等,1957、1958;连柱国等,1973)。因猫、猴等均系较大动物,尚不够理想。自本世纪60年代以来,许多工作者试将马来丝虫人工感染多种小型啮齿动物,但或感染不成或仅获得有限的成功率。迄今较广泛应用的丝虫小型动物模型仅有棉鼠(Sigmodon hispidus)——棉鼠丝虫(Litomosoides curinii)和利比亚沙鼠(Meriones libycus)——魏氏盖头丝虫(Dipetalonema viteae)二组(Ash,1974)。这两种丝虫均非人体寄生。1970—1974年国外陆续报道(Ash等,1970a、b;Ash,1971、1973a、b,1974;El Bihari等,1971、1973;Gwadz等,1973;McCall等,1973;Ah等,1973、1974;Butts等,1974)     

周期型马来丝虫微丝蚴寿命的观察

将实验感染周期型马来丝虫的长爪沙鼠的微丝蚴蚴阳性腹腔稀释液,移注于正常沙鼠腹腔内,微丝蚴除能在腹腔内长期生存外,还可出现于外周血液中,其在外周血液内末次阳性检出时间最长可超过32周,在腹腔液内末次阳性检出时间最长为77周,故马来微丝蚴在沙鼠外周血液中的最长寿命不短于7.5月,而在腹腔液内的最长寿命可超过1.5年以上。     

周期型马来丝虫成虫体外培养及雌虫释出虫卵和微丝蚴的初步观察

丝虫体外培养的研究对丝虫和丝虫病的实验研究有重要意义。尽管此项工作早在1912年(Bahr;Full(?)born;Wellmen和Johns)即已开始,但Weinstein(1970)认为这方面的研究仍处于创始阶段,数十年来进展很少,且多数均采用动物寄生丝虫的微丝蚴。五、六十年代开始才有动物丝虫成虫体外培养的报道(Hanking,1954;Earl,1959;Tavlor,1960;Weinstein和Sawyer,1961;Wong,1964)。Wenk等(1978)用Tc 199加灭活或未灭活正常棉鼠血清培养棉鼠丝虫雌虫,其存活期可达17—23天。近十余年来,由于新的丝虫小型啮齿动物模型不断建成,为丝虫体外培养的研究提供了大量虫源,从而促进了这项工作的开展;但有关人体寄生丝虫成虫的体外培养研究的报道仍然极为少见。国内     

牛成纤维细胞的分离与体外培养

研究了牛胎儿和成年牛皮肤组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特征。通过组织块贴壁培养和分离单细胞接种培养均能获得原代牛皮肤细胞。用2.5 g/L胰蛋白酶+1mmol/L EDTA和5 g/L胶原酶I联合消化牛皮肤组织较2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化,得到更多的单个细胞,两者之间差异极显著(P<0.01),但其死细胞比率却有较大升高;2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化牛胎儿组织得到的单细胞数显著高于皮肤组织消化后得到的细胞数(P<0.01),死细胞比率也高于同种酶消化的皮肤组织。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化贴壁细胞后死细胞率明显高于用0.5g/L胰蛋白酶+0.53 mmol/L EDTA消化的细胞(P<0.05);培养24 h后细胞贴壁率前者要明显低于后者(P<0.05)。用0.5 g/L胰蛋白酶轻度消化混杂生长的成纤维细胞和上皮样细胞,经过反复贴壁传代2～3代,可得到较纯的成纤维细胞。     

人胚与鼠胚神经干细胞体外培养的差异

为比较人胚与鼠胚神经干细胞体外培养的差异。实验采用具有丝裂原作用的细胞生长因子。结合无血清细胞培养技术从人胚和鼠胚皮层分离神经干细胞。在连续传代过程中观察其体外培养特性,免疫荧光染色检测Nestin抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达,并用流式细胞仪检测神经干细胞分化情况。结果表明：（1）使用单一生长因子即可从鼠胚皮层分离神经干细胞,但在人胚却需同时使用多种生长因子,协同使用bFGF,EGF和LIF是人胚神经干细胞体外培养的较佳条件;（2）鼠胚皮层神经干细胞在连续传代过程中增殖速度快于人胚,其Nestin阳性率和BrdU标记的阳性率亦高于人胚,表明其增殖能力明显高于人胚,（3）人胚神经干细胞较鼠胚更易分化为神经元。     

外周血树突状细胞的体外培养

本文用塑料贴壁的外周血单个核细胞(PBMNCs)在含自体血浆、rhGM-CSF、rhIL-4和TNFα的RPMI1640培养基,37℃,5%CO2湿化空气培养树突状细胞(DCs).经10天培养,可获得大量具DCs形态学特征的细胞,其有很强的刺激同种淋巴细胞增殖功能,约30%的细胞表达HLA-DR和CD1a.健康志愿者每1×107PBMNCs可收获细胞约5×105.本文培养方法产率高,培养体系简单,用自体血浆代替小牛血清,培养过程简便,这些均适应临床治疗要求.     

体外培养成骨细胞的影响因素

成骨细胞是骨形成和骨代谢的核心部分,成骨细胞体外培养是研究骨代谢和成骨机制的重要手段。本从物理因素,微量元素,生长因子和激素等四个方面综述了体外培养成骨细胞的影响因素,以期有助于研究有效的体外培养成骨细胞的方法应用于组织工程学的研究。     

长爪沙鼠人工感染周期型马来丝虫实验观察

建立我国人体寄生丝虫的动物模型,无论在丝虫生物学特性的认识、抗丝虫病药物的筛选、丝虫病免疫和免疫学诊断方法的研究以及丝虫病发病机制和病理学的探讨等方面,都是急待解决的基本课题。为此我组从1973年开始进行长爪沙鼠(Meriones unguiculatus)人工感染周期型马来丝虫的实验观察。     

大白鼠全胚胎体外培养的研究

作者分别取出孕9.5天和孕11.5天大白鼠全胚胎于体外培养各48小时,重点观察9.5天至11.5天胚胎生长发育的形态学变化。     

血吸虫体外培养的生殖生理学研究

一、前言 血吸虫的生殖与对人体的致病有着密切关系;虫卵是主要的致病因素。然而,血吸虫的一些生殖生理现象如合抱的机制及产卵必需的营养要素至今仍未阐明。在宿主内对这些问题难     

体外培养的小鼠骨髓肥大细胞的初步研究

肥大细胞是一种广泛存在于哺乳类动物体内的细胞。它分布于机体各个系统而非局限于某个组织,同时胞浆中又含有可合成、贮存和释放多种活性介质的颗粒,因而在功能上具有相当的重要性。肥大细胞在变态反应、寄生虫感染等过程中的作用已得到了较充分的认识。近10年来肥大细胞的研究更取得了显著的     

鼠疟原虫动合子体外培养及其生物学活性的研究

体外形成的动合子能否感染蚊媒并继续在蚊体内发育是评价体外形成动合子发育成熟的重要指标。它关系到动合子-卵囊阶段的体外培养和整个蚊期疟原虫的培养。由于体外形成动合子的培养物中含有大量各阶段的疟原虫,对检验体外形成动合子的生物活性造成一定的困难。为此我们对约氏疟原虫动合子进行培养和分离,并检测了体外形成动合子的生物活性。     

鸡胚胎原始生殖细胞体外培养

以14-15期鸡胚血液为材料,采用Ficoll密度梯度离心方法,提取鸡胚胎原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),在无基质细胞和基质细胞上分别进行体外培养。从实验结果可以看出：在含有胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、鸡血清(chicken serum,CS)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人胰岛素样生长因子(hIGF-1)、小鼠白血病抑制因子(mLIF)和青,链霉素双抗的M199培养液中培养时,鸡PGCs最多能够存活4天：当采用细胞因子和5天鸡胚胎性腺基质细胞共培养时能存活23代且每代细胞增殖可达近10倍。提纯后的PGCs细胞冻存复苏后,经台盼蓝染色鉴定存活率可达80％左右。