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单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质粒载体的构建及LacZ基因的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
从单纯疱疹病毒Ⅰ型HSV-1基因组中分离出其包装信号序列,与含HSV-1复制起点及IE-68基因启动子的DNA序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架,构建了一种HSV-1扩增子质粒载体pHSL,其中LacZ基因置于IE-68基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了HSV-1温度敏感株tsK株的Vero细胞,pHSL可在HSV-1tsK的辅助下包装成假病毒颗粒,这样就可得到同时含有假病毒和HSV-1tsK的混合毒株dvHSL。将此混合毒株感染传代细胞和神经细胞,可在其中表达LacZ基因,而在生理温度(37℃)下,混合毒株的复制受到抑制。提示这种缺陷型疱疹病毒载体有用于向神经系统基因转移的可能性。 相似文献
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从单纯疱疹病毒I型HSV-1基因组中分离出其包装信号序列,与含HSV-1复制起点及IE-68基因启动子的DNA序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架,构建了一种HSV-1扩增子质粒载体pHSL,其中LacZ基因置于IE-68基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了HSV-1温度敏感株tsK株的Vero细胞,pHSL可在HSV-1tsK的辅助下包装成假病毒颗粒,这样就可得到同时含有假病毒和HSV-1 相似文献
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以粘粒为基础产生重组单纯疱疹病毒HSV1-lacZ的研究 总被引:1,自引:1,他引:1
将总长度为152kb的单纯疱疹病毒1型(HSV-1)(17株)基因组分成5个相互间有部分重叠的大片段(约35-40kb),分别克隆到粘粒SuperCosMW中,依次称为cos48、cos28、cos6、cos14和cos56(DavisonAJetal,1993)。此5个粘粒用PacⅠ切去粘粒骨架后共转染细胞,可发生同源重组而产生野生型HSV-1。以此为基础,利用粘粒cos56的HSV-1UL44基因中含有一个XbaⅠ单一酶切位点的特点,将一个两端加有XbaⅠ位点的CMV-lacZ-polyA片段插入其中,构建成cos56-lacZ。将cos56-lacZ与其它4个粘粒经PacⅠ酶切后,用lipofectamine转染试剂共转染BHK-21细胞,37℃培养2-3天,开始出现细胞病变及噬斑。5天后将病变细胞连同培养液一起冻融3次,取上清0.1ml感染新鲜的BHK-21细胞,37℃培养24小时,用X-gal染色30-60分钟,镜下观察可见大量蓝色噬斑。蓝色噬斑数占噬斑总数的50%以上。经空斑纯化的蓝斑病毒可稳定传代。这种方法同将外源基因表达盒插入HSVtk基因中构建成重组质粒,再与HSV-1基因组DNA共转染细 相似文献
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由含有BHBV-1(BovineHerpesVirus-1)前早期基因的基因组片段亚克隆BICPO(BHV-1InfectedCellProteinO)的DNA序列至表达载体pSVK3,构建质粒pSV2.9。将该质粒与pBLTR-Luc共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,BICPO的表达产物可以显著地激活BIVLTR启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据pSV2.9与含有BIVLTR不同区段缺失的质粒pD-319-Luc、pD-115-Luc、pD-52-Luc共转染小牛肺细胞的实验结果,推测BIVLTR-319位上游区的DNA序列影响BICPO基因产物对BIVLTR表达的激活作用。 相似文献
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应用PCR技术定向克隆了细小病毒H-1的非结构蛋白(NS)部分基因片段。自行设计并合成了PCR引物△P3和△P4,在两个引物中分别引入两个突变碱基,使扩增后的DNA片段的两端含有限制性核酸内切酶HindⅢ或BamHI的酶切位点,经双酿切法把该DNA片段重组到pUC118质粒中。对插入片段的DNA序列测定和分析结果证实该片段为H-1NS-1基因序列。以此重组质粒为探针,采用分子杂交的方法,分别测定了H-1及MVMDNA在细胞内的复制水平。这一基因的克隆为制备H-1的质量监测、H-1及MVMNS-1蛋白抑瘤作用机理及其在肿瘤细胞及正常组织中的转录表达等研究奠定了基础。 相似文献
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牛疱疹病毒I型前早期基因BICPO的表达对牛免疫缺陷病毒LTR的反式激活… 总被引:2,自引:0,他引:2
由含有BHV-1(Bovine Herpes Virus-1)前早期基因的基因组片段亚克隆ICPO(BHV-1Infected Cell Protein O)的DNA序列至表达载体pSVD3,构建质粒pSV2.9。将该质粒与PBLTR-Luc共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,BICPO的表达产物可以显著地激活BIV LTR启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据PSV2.9与含有B 相似文献
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本文报告利用pWR590质粒为载体,构建了含lac启动子,β-半乳糖苷酶(1-590)基因,Xa因子的四肽识别位点和HBV preS1,preS2编码序列的表达质粒,并成功地大肠杆菌中获得稳定表达。融合蛋白经Xa因子消化和高效液相层析,得到了preS1(1-91)纯肽。此肽特异性地与人肝细胞质膜结合,从而为肝细胞上存在preS1受体提供了直接的实验依据,也为分离和鉴定肝细胞上preS1受体打下良好 相似文献
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PARP酶抑制剂未引起整合的外源LacZ基因的丢失 总被引:2,自引:0,他引:2
使用聚ADP核糖聚合酶(PARP)NAD位点抑制剂苯甲酰胺(BA)研究了降低PARP酶活性对外源LacZ基因整合稳定性的影响,利用DNA体外重组技术将LacZ基因全序列插入到真核表达载体载体PSV2neo的HindⅢ位点,构建了一个具有真核细胞neo基因筛选标记和LacZ基因的真核表达重组体PSV2neo-beta-gal将该重组体导入HeLa细胞,经G418筛选获得了能稳定表达β-半乳糖苷酶的H 相似文献
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由于lacZ基因在白色念珠菌中不能工作。将克氏酵母的β-半乳糖苷酶基因Kl LAC4构建了能在白色念珠菌中工作的报告基因。Kl LAC4基因融合到白色念珠菌乙醇脱氢酶基因(ADH1)的启动子后面,在ADH1终止子的共同控制下构建Kl LAC4的表达质粒pYPB1-LAC4。PYOB1-LAC4转化白色念珠菌并测定了在固体培养基中的β-半乳糖苷酶活性以及在液体增减基的β-半乳糖苷酶活力。结果表明Kl 相似文献
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沙门菌CWDMs脂代谢检测 总被引:9,自引:2,他引:7
采用毛地黄皂苷敏感试验和菌细胞胆固醇、甘油三脂及胆碱酯酶定性与定量分析法,检测伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌经L 型变异后形成的细胞壁缺陷突变株(CW DM )的脂类代谢活性,了解这些CW DM 变异的性质和探讨细菌细胞壁缺陷突变与细菌演变的关系。结果表明,沙门菌CW DM s 具有显著的胆固醇和甘油三脂代谢活性、对毛地黄皂苷高度敏感并且还具有与白色念珠菌相似的胆固醇和甘油三脂的含量,但未能检出胆碱酯酶活性。CW DM s返祖菌丧失了脂类代谢酶类和胞浆膜不含胆固醇,恢复了与其亲代细菌型相似的代谢特征。提示在沙门菌天然即存在有与脂类及胆固醇代谢相关的基因,细胞壁的缺陷导致这些脂类及胆固醇代谢基因活化,以致 CW DM s 能够表达固醇和甘油三脂代谢活性和胞浆膜含有胆固醇 相似文献
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沙门菌CWDMs氨基酸代谢的检测 总被引:3,自引:0,他引:3
采用氨基氨利用生长试验和谷丙转氨酶(GPT)、谷草转酶(GOT)、乳酸脱氨酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、α-闳丁酸脱氢酶(α-HBD)、γ-谷志肽酶(γ-GT),酸性磷酸酶(ACP)定性与定量分析法,检测伤CWDMs变异的特点及其机制,探讨CWDMs变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌CWDMs变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌CWDMs在仅含蛋氨酸或脯氨 相似文献
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采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的CWDMs及其宁代细菌型和伤寒杆菌粗糙型的乳酸脱氢酶(LDH)同功酶,以了解沙门菌CWDMs生物氧化的特点和机制,探讨CWDMs变异的性质。结果表明,伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的细菌型及伤寒杆粗糙型在聚丙烯酰胺凝胶电泳后显示出相同的4种具有不同泳动速率的LDH同功酶,但CWDMs仅显示2种LDH。CWDMs的2种LDH同功酶与其亲代细菌型及伤寒杆 相似文献
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光照对蕨类植物配子体假根向重力性的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
对8种蕨类植物配子体假根向重力性反应的研究结果表明,除卷柏Selaginella tamariscina Spring配子体假根无向重力性反应并且其生长方向与光照方向无关外,其它7种的配子体假根均有向重力性反应,并且假根的向重力性反应在配子体发育初期,因光照的方向不同而异,表现为负向光性。随着配子体发育至片状体阶段,光对其向重力性反应的影响逐渐减弱,而重力的影响增强。在蕨类植物配子体发育初期,光对 相似文献
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省沽油科叶解剖结构的分类学意义 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对国产省沽油科 Staphyleaceae 4属植物叶的解剖结构进行了详细的比较研究。结果表明, 叶解剖结构特征在属间的区别较明显, 特别是瘿椒树属 Tapiscia 有着几乎与其他三属截然不同的独特性状。根据已有的孢粉学, 花、节及木材的解剖等方面的资料, 我们支持Тахтаджян(1987)将瘿椒树亚科分出而建立瘿椒树科 Tapisciaceae 的观点。瘿椒树属为我国特有属, 根据我们对采自不同产地的材料观察, 居群间的差异很小, 其可能仍为一单种属。 相似文献
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目的:了解沙门菌细菌壁缺陷突变株(CWDMs)的生物氧化及遗传特点和探讨细菌壁缺陷变异的性质与机制。方法:采用PAGE电泳法和分光光度法检测伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌及其CWDMs和伤寒沙门菌粗糙型和苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶的活性与类型。结果:伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的细菌型和伤寒沙门菌粗糙型经PAGE电泳可见一条MDH同工酶带,CWDMs电泳后可见两条MDH同Ⅰ酶带,在CWDMs的MDH中有一条泳动速率与细菌型及粗糙型的相同,另一条则较快。分光光度法检测证实。细菌型与粗糙型的MDH活性相似,CWDMs的MDH活性则明显较低。结论:CWDMs保留了与亲代细菌型一致的MDH和形成了一种新的MDH,并且其MDH的活性已显著降低,此特性可能与CWDMs生物氧化特性的改变有关。 相似文献