一步法纯化乌骨鸡皮肤酪氨酸酶

酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是黑素细胞内形成黑色素一个关键的酶。它做为一个含铜酶广泛地存在于自然界中。酪氨酸酶既能催化L-酪氨酸的羟化形成L-多巴(羟化酶的活性)又能催化L-多巴的氧化形成多巴醌(氧化酶的活性)。多巴醌进一步自动氧化形成黑色素。     

白化病的遗传

白化病(albinism)是一种遗传性皮肤及其附属器色素缺乏的疾患,是由于黑色素的代谢障碍或缺陷所引起的遗传性疾病。它使皮肤、毛发、眼的色素减少或消失,呈现出白化性状。正常时,体内黑色素由黑素细胞合成,黑素细胞中含有一种特殊的细胞器,称为黑素小体(melansome),它且有含铜的酚氧化酶(即酪氨酸酶)。这种酶能催化酪氨酸羟化为多巴。多巴脱氢变成多巴醌。经一系列非酶促反应,最终生成吲哚醌。细胞内的多巴醌、吲哚     

酪氨酸酶的应用研究进展

酪氨酸酶具有重要的生理生化特性,在医药、环境、食品、精细化工等领域具有广泛的用 途。酪氨酸酶可以氧化L-酪氨酸合成L-多巴和黑色素,L-多巴用于帕金森症的治疗,黑色素能够 杀死HIV病毒。酪氨酸酶可用于环境工程领域处理含苯酚及胺类废水,用于精细化工领域催化 有机合成反应。综述了酪氨酸酶在各个领域的应用概况,阐明了其在工业生产领域的应用前景。     

酪氨酸酶催化氧化对丝素蛋白结构与性能的影响

采用酪氨酸酶对丝素蛋白催化氧化,考察了酶促氧化反应对丝素蛋白结构及丝素膜性能的影响。研究结果表明,酪氨酸酶可催化氧化丝素蛋白中酪氨酸残基生成多巴和多巴醌结构衍生物,并且两者含量随催化反应时间延长呈波动性变化;酶促反应后丝素蛋白中游离氨基含量下降,丝素风干膜断裂强度增加,表明酶促氧化中丝素大分子间发生自交联。XRD结果表明酪氨酸酶催化氧化对丝素蛋白二级结构有一定影响;SEM显示酶促改性可能影响丝素蛋白冷冻干燥膜多孔形态结构。     

白来亨鸡皮肤中存在酪氨酸酶

酪氨酸酶(tyrosinase,EC.1.14.18.1)又称单酚单加氧酶,广泛存在于微生物,动植物及人体中。它是生物体黑素细胞合成黑色素的关键酶,可以催化酪氨酸转变成L-多巴(邻位二     

45味中药乙醇提取物中对酪氨酸酶的激活作用

从中医治疗白癜风方剂中筛选出中药45味,观察这些中药50%乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.结果显示有21味中药乙醇提取物在3个不同浓度对蘑菇酪氨酸酶活性、黑素生成具有激活作用,其中女贞子、梅花和八角茴香对酪氨酸酶的激活作用较明显;同时分析了其中有激活作用的中药的功用等分类情况,以探...     

氨基葡萄糖对酪氨酸酶的抑制作用

通过对酪氨酸酶催化底物L-DOPA反应速率的观察测定,研究了氨基葡萄糖（G-NH2）对酪氨酸酶的抑制作用。在反应液中加入50μL浓度为2.2 mg/mL G-NH2时（体系中G-NH2终浓度为36μg/mL）,酶抑制率为50%。GNH2对酪氨酸酶的抑制作用是个复杂的过程,酶反应呈先促进后抑制。分析酶抑制曲线Lineweaver-Burk双倒数图,得出G-NH2为混合抑制剂,进一步研究发现多巴醌生产量会减少,抑制类型是不可逆抑制。     

人与大猩猩,黑猩猩和猩猩亲缘关系的探讨

有关人锆超科的系统发育仍然存在刍议。争论焦点在与大猩猩和黑猩猩哪 个关系更近一点。酪氨酸酶是黑色素合成中的关键酶,酪氨酶基因的突变将导致白化病。测定了人猿科中大猩猩,黑猩猩、猩猩和长臂锆产基因全部５个外显子的ＤＮＡ序列。     

他卡西醇对人黑素细胞生物学性状的影响

目的:观察他卡西醇对体外培养的正常人黑素细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶(TYR)mRNA表达、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)mRNA表达的影响,探讨他卡西醇治疗白癜风的机制.方法:体外黑素细胞培养,给予不同浓度他卡西醇(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)处理,用MTT法测定细胞增殖,碱裂解法测定黑素合成,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,半定量RT-PCR法检测TYR、TRP-1 mRNA的表达.结果:10-8 mol/L他卡西醇能刺激黑素细胞增殖,10-8、10-9 mol/L能促进黑素合成,10-9～10-6 mol/L的他卡西醇能显著增强正常人黑素细胞酪氨酸酶活性并上调TYR、TRP-1mRNA的表达.结论:他卡西醇可促进黑素细胞增殖,并提示该药物可能通过上调酪氨酸酶家族中关键基因TYR、TRP-1mRNA的表达来提高酪氨酸酶活性,最终增加黑素合成.     

酪氨酸酶活性的微量分析

本文介绍了两种灵敏、精确和较简便的酪氨酸酶活性的微量分析技术。其中之一是[³H]-酪氨酸分析,直接测羟基化的酪氨酸量。根据测得的“总dpm”、“酶样品dpm”和“空白dpm”计算出微量样品中酪氨酸酶的活性。另一种方法是将各个含酶样品通过SDS-PAGE分离和适当处理,放入含多巴的磷酸缓冲液中染色,待深棕色的酶带完全显现后,再经过固定等,直接将凝胶进行光密度扫描,根据各酶带吸收峰的高度即可测出酶活性的相对变化。     

双孢蘑菇酪氨酸酶基因在酿酒酵母中的异源表达及其酶学特性

【目的】在酿酒酵母中异源表达双孢蘑菇来源的酪氨酸酶基因PPO2,并研究酪氨酸酶在酿酒酵母胞内及胞外的酶学特性。【方法】提取双孢蘑菇总RNA,通过RT-PCR克隆酪氨酸酶基因PPO2,构建表达载体pSP-G1-PPO2,并转化至酿酒酵母进行表达,采用镍亲和层析纯化蛋白并研究其酶学性质。【结果】在酿酒酵母中正确表达了大小为65 kDa的酪氨酸酶蛋白。重组酶能催化底物酪氨酸产生黑色素。体外活性测定表明,酪氨酸酶催化最适温度为45°C,以酪氨酸和多巴为底物时最适pH分别为7.0和8.0。在酿酒酵母中测得底物酪氨酸浓度低于2.5 mg/mL时,黑色素的产量与底物浓度呈现正相关性。【结论】来源于双孢蘑菇的酪氨酸酶基因PPO2在酿酒酵母中成功表达,重组酶具有良好的酶学特性。利用酪氨酸酶产物黑色素的产量与底物浓度呈现正相关性这一特性,可将其作为细胞酪氨酸产量的传感器,为高通量筛选酪氨酸高产菌株提供了思路。     

乌骨鸡皮肤酪氨酸酶的荧光特性研究

酪氨酸酶是生物体合成黑素的关键酶,广泛存在于动植物及人体黑素细胞中.我们曾用一步柱层析方法纯化了乌骨鸡皮肤酪氨酸酶.本文报道用荧光光谱学研究乌骨鸡酪氨酸酶物化性质的一些实验结果. 酪氨酸酶在聚丙烯酰胺疑胶上仅呈一条带. 乌骨鸡酪氨酸酶和许多既含色氨酸又含酪     

八种蜂花粉醇提物对酪氨酸酶的二酚氧化活性的抑制作用

本文研究了杏花花粉、茶花花粉、油菜花粉、向日葵花粉、荷花花粉、荞麦花粉、玫瑰花粉、五味子花粉等八种花粉醇提物对酪氨酸酶的二酚氧化活性的抑制作用.结果表明这八种花粉醇提物对以L-多巴为底物的酪氨酸酶抑制作用,存在显著性差异.其中向日葵花粉醇提物表现出最好的抑制作用,IC50为(0.303±0.003)mg/mL,五味子花粉醇提物的抑制作用相对较弱,IC50为(1.946±0.045)mg/mL.     

杨梅黄素及蛇葡萄素对酪氨酸酶的抑制作用

杨梅黄素及蛇葡萄素对酪氨酸酶有显著的抑制作用;在２ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｌ－多巴浓度下,５０％抑制的药物浓度分别为０．０８２ｍｍｏｌ／Ｌ及０．２０８ｍｍｏｌ／Ｌ,用Ｌ－多巴作底物,蛇葡萄素对酪氨酸酶是竞争性抑制,其Ｋ＿ｉ是０．０８５ｍｍｏｌ／Ｌ;而杨梅黄素对酪氨酸酶则是混合性抑制,其Ｋ＿ｉ与Ｋ′＿ｉ分别是０．０２６ｍｍｏｌ／Ｌ与０．０７２ｍｍｏｌ／Ｌ。     

制何首乌提取物及主要单体成分体外对酪氨酸酶活性的影响

采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法,体外评价制何首乌水提取物、乙醇提取物各分离组分及大黄素,大黄素甲醚,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷等制何首乌主要单体成分对体外酪氨酸酶活性的影响。结果未在制何首乌中发现能够体外有效激活酪氨酸酶活性的成分,制何首乌水提物,制何首乌乙醇提取物的50%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷皆有浓度依赖的酪氨酸酶抑制活性,其中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在48μg/mL的浓度下即可达到46.72%的抑制率,具有美白产品研发价值。     

杨梅黄素及蛇葡萄素对酪氨酸酶的抑制作用

杨梅黄素及蛇葡萄素对酪氨酸有显著的抑制作用,２ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｌ－多巴浓度下,５０％抑制的药物浓度分别为０．０８２ｍｍｏｌ／Ｌ及０．２０８ｍｍｏｌ／Ｌ,用Ｌ－多巴作底物,蛇葡萄素对酪氨酸酶是竞争性抑制,其Ｋ是０．０８５ｍｍｏｌ／Ｌ;而杨梅黄素对酪氨酸酶则是混合性抑制,其Ｋｉ与Ｋｆｉ分别是０．０２６ｍｍｏｌ／Ｌ与０．０７２ｍｍｏｌ／Ｌ。     

驱虫斑鸠菊对B-16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成影响

目的 :探讨驱虫斑鸠菊体外对酪氨酸酶活性影响 ,以及对小鼠B - 16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶的作用。方法 :利用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定药物对细胞增殖的影响 ;采用酶学方法研究药物对酪氨酸酶活性的影响 ;470nm比色法测定黑素含量。结果驱虫斑鸠菊体外可激活酪氨酸酶活性 ,增强B - 16鼠黑素瘤细胞增殖 ,提高酪氨酸酶和黑色素合成能力 ;对整体动物黑素细胞具有促进合成和分泌作用。结论在白癜风的治疗中 ,驱虫斑鸠菊可增强酪氨酸酶活性 ,进而促进黑素合成     

低氘水对皮肤成纤维细胞及黑色素瘤细胞的影响

研究不同浓度的低氘水对正常皮肤成纤维细胞CCD-1095sk增殖和乳酸代谢的影响,及对B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑色素生成量的影响。同时,观察低氘水对紫外损伤细胞修复的作用。用MTT法检测25、50和105 ppm三种不同浓度的低氘水对CCD-1095sk细胞增殖的影响,并测定培养液中的乳酸含量;取对数生长期小鼠B16黑素瘤细胞,分别加入不同浓度的低氘水作用72 h后,测定黑素含量和酪氨酸酶活性;体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性;用不同浓度的低氘水作用经紫外辐射的皮肤成纤维细胞,测定细胞增殖率。在细胞培养初期,50 ppm和105 ppm低氘水可促进CCD-1095sk细胞生长,同时抑制乳酸代谢。体外生化实验表明,三种不同浓度的低氘水均能不同程度地抑制酪氨酸酶活性。细胞实验表明,作用72 h后,50 ppm和105 ppm低氘水能显著抑制酪氨酸酶活性,减少B16黑色素瘤细胞黑色素的生成量,差异具有统计学意义,P<0.05。紫外损伤实验表明,50 ppm低氘水能减轻紫外辐射对细胞增殖的抑制作用,差异具有统计学意义,P<0.05。低氘水在化妆品应用方面具有潜在的价值。     

一株罗布泊盐湖链霉菌的鉴定及其代谢产物对酪氨酸酶活性、黑色素生成的抑制效应CSCD

本研究采用多相分类法对一株分离自新疆罗布泊盐湖链霉菌89-2-2进行鉴定,通过CCK-8法、L-多巴氧化法和NaOH溶解法检测该菌株乙酸乙酯提取物对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、细胞内酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响。以抑制酪氨酸酶活性为指标,应用LC-MS代谢组学方法检测链霉菌89-2-2发酵条件优化前后所产生的差异代谢物,分析可能具有抑制活性的代谢产物类型。结果初步鉴定该菌株为西唐氏链霉菌(Streptomyces setonii)89-2-2。S.setonii 89-2-2乙酸乙酯提取物在100~1000μg/mL浓度范围内几乎无细胞毒性,但能有效抑制B16细胞内酪氨酸酶活性和黑色素生成,与空白组相比均具有显著性差异(P<0.05)。代谢组学实验的结果显示S.setonii 89-2-2产生的差异代谢物主要为维生素类化合物、芳香类化合物和羧酸类化合物。本研究为从新疆罗布泊链霉菌中开发酪氨酸酶抑制剂和黑色素合成抑制剂提供重要的科学依据。     

香水莲花提取物抑制酪氨酸酶活性的研究

本实验以L-酪氨酸为底物,从马铃薯中提取酪氨酸酶,以熊果苷为阳性对照,采用比色法测定了香水莲花醇提物、水提物及总黄酮提取物对酪氨酸酶的抑制率,以探讨香水莲花醇提物、水提物及总黄酮提取物对酪氨酸酶的活性的抑制作用。结果表明,三种提取物对酪氨酸酶活性的抑制效果从高到低依次为总黄酮提取物、醇提物、水提物,说明其有效成分为醇溶性物质;总黄酮提取物对酪氨酸酶活性的抑制效果明显高于醇提物和水提物对酪氨酸酶活性的抑制效果,可以考虑将其作为一种新型的植物源美白剂,应用于化妆品行业。