烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶研究——Ⅱ.对纤维蛋白原及凝血酶的作用

烙铁头(T.mucrosquamatus)蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg能水解三肽底物Bz-Phe-Val-Arg-PNA,但对凝血酶的良好底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA却活性甚低。TMVFS显著延长血浆凝血酶时间。血浆复钙时间及纤维蛋白原溶液凝血酶时间。同时,TMVFg体外也能延长全血凝固时间,表明具有抗凝作用。纤维蛋白原-纤维蛋白转换实验表明:TMVFg水解纤维蛋白原产生的纤维蛋白原断片(FDP)除具有抗凝血酶,抑制纤维蛋白聚合活性外,还能促进纤维蛋白的聚合。 进一步用FPLC分离TMVFg水解人纤维蛋白原混合液,得两个FDP断片功能峰,FDP组分Ⅰ和FDP组分Ⅱ。其中FDP组分Ⅰ能抑制纤维蛋白凝块形成;FDP组分Ⅱ能促进纤维蛋白凝块形成,抑制TMVA(烙铁头蛇毒血小板活化素,它可不通过ADP、花生四烯酸途径而诱导血小板聚集),但对ADP诱导的家兔血小板聚集无影响。TMVFg对凝血酶水解三肽底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA及凝固纤维蛋白原的活性也有一定抑制作用。 实验证明,TMVFg抗凝的主要作用机理是其水解纤维蛋白原产生的断片对纤维蛋白原凝固的抑制作用、FDP断片抗凝血酶作用及TMVFg本身对凝血酶活性的抑制所引起的,但在二者之间,前者是主要的。 从研究结果发现:TMVFg水解纤维蛋白原所产生的断片有一类能加速凝血酶凝固纤维蛋白原的过程,这就发现了FDP断片的     

烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶研究 Ⅰ分离纯化及理化性质(英文)

通过DEAE-SephadexA-50,DEAE-SepharoseCL-6B,MonoQ （FPLC）三步离子交换柱层析,纯化得到一新的纤维蛋白原溶酶,在碱性聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上均呈单一的蛋白带。分子量为2600,等电点pl4.7;它是一个糖蛋白,含糖量6.4%,其中中性糖0.3%,已糖胺4.9%,唾液酸1.2%。烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg由187个氨基酸组成,含有较高的酸性氨基酸,此外甘氨酸含量也较高。TMVFg热稳定性强,而酸不稳定,在280 nm处具有典型的蛋白吸收峰,在无离子水中紫外消光系数E0.1%/280 nm=1.558。纯化的TMVFg具有较强的精氨酸酯酶活力,对苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）的Km值为1.4×10[-3]M。TMVFg的活性受苯甲基丹磺酰氟（PMSF）抑制;乙二胺四乙酸（EDTA）对活性无影响。TMVFg不能使纤维蛋白原凝固,但能水解纤维蛋白原α、β链。纤溶实验表明TMVFg具有激活纤溶作用。纯化的烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶对酪蛋白无作用,无出血活性,因而与凝血酶样酶、出血毒素及β-纤维蛋白原溶酶（OUYANG et al.,1977）明显不同。     

烙铁头蛇毒对体外血凝及纤溶的影响

行体外血凝及纤溶观察结果表明：①烙铁头蛇毒能明显延长凝血活酶时间（ＰＴＴ）、凝血酶原时间（ＰＴ）及蝰蛇毒磷脂时间（ＲＶＶＣＴ）,显示出较强的抗凝活性;②对人纤维蛋白原及纤维蛋白有较强的溶解作用,这种作用不完全是单一的活化素样作用,还有脆浆素样作用     

蕲蛇酶,凝血酶对人及牛纤维蛋白原的凝血反应比较

目的 研究蕲蛇酶、凝血酶与不同种 纤维蛋白原的凝血作用的差异,以选择检定蕲蛇酶活力的最适底物。方法 取不同的浓度人凝血酶与人纤维蛋白原（ＨＦｇ）、牛纤维蛋白原（ＢＦｇ）及人血小板血浆（ＰＰＰ）反应（试管法或用血液凝聚仪）,分别记录初凝时间并求反应曲线的回归方程。蕲蛇酶也稀释成不同深度 上法测定,并求回归方程。另以人凝血酶（１．２５ＩＵ／ｍｌ）、蕲蛇酶（１．２５ＡＵ／ｍｌ）与梯度浓度的ＨＦｇ反应并求     

蛇毒纤维蛋白（原）溶酶

在蝰亚科、蝮亚科和眼镜科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白 (原 )的酶 ,称为纤维蛋白 (原 )溶酶 (简称纤溶酶 ) [1] 。 1 976年 ,Ｏｕｙａｎｇ等第一次从尖吻蝮蛇毒中分离纯化得到纤溶酶[2 ] 。这些纤溶酶可用于溶解在心肌梗塞、中风、血栓等期间形成的血凝块[1] 。作为一种潜在的强有力的抗栓药物 ,纤溶酶已成为蛇毒蛋白酶领域的一个研究热点。1 .蛇毒纤溶酶的分类蛇毒纤溶酶的分类方法主要有 3种 :第一种根据纤溶酶对纤维蛋白原 (ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ ,Ｆｇ)的作用方式 ;第二种是根据纤溶酶的结构特点[3] ;第三种是根据纤溶酶的分…     

烙铁头蛇咬伤引起中毒的临床报告

烙铁头(Trimeresurus mucrosquamatus)是我国常见的毒蛇之一,也是蛇伤病例的主要病因蛇之一,主要分布于长江以南各省。据广西蛇伤流行病学抽样调查结果表明其发病率占蛇伤病例的11·6%[1]。我县位于广西南部六万大山,毒蛇种类较多,近年来我院诊治的12例烙铁头咬伤患者获得满意效果,现报告如下。1临床资料1·1一般资料1999年6月至2006年7月间在我院就诊的各种毒蛇咬伤中确诊为烙铁头咬伤12例,其中男10例,女2例,年龄最大62岁,最小16岁。患者多于天气闷热时入夜后,在树前屋后、柴草堆处被咬伤。1·2诊断依据患者被蛇咬伤时看清该蛇或将该蛇一…     

菜花烙铁头蛇毒中一种具有激肽释放酶与纤维蛋白原溶酶活性的Jerdonase

通过DEAESephadexA 5 0阴离子交换、超细SephadexG 10 0分子筛和反相高效液相C4 色谱层析 ,从菜花烙铁头蛇毒冻干粉中纯化出一种具有激肽释放酶活性和α纤维蛋白原溶酶活性的丝氨酸蛋白酶 ,命名为Jerdonase。在 12 .5 %胶浓度的SDS还原电泳条件下 ,该酶分子量大约为 5 5kD ,在非还原电泳条件下 ,分子量大约为 5 3kD。此酶是一种糖蛋白 ,含有约 35 .8%的中性糖。它的N末端氨基酸序列为IIGGDEENINEHPFLVALYDA ,其序列和蛇毒中其他丝氨酸蛋白酶具有非常高的序列相似性。Jerdonase能够催化BAEE、S 2 2 38和S 2 30 2的水解 ,其水解活性可被PMSF抑制 ,但是EDTA对此没有影响。Jerdonase能优先水解人纤维蛋白原的Aα链 ,同时伴随有微弱的Bβ链水解活性。另外 ,此酶能够水解牛低分子量的激肽原 ,释放舒缓激肽。总之 ,所有的结果表明Jerdonase是一个具有多功能活性的蛇毒丝氨酸蛋白酶     

莽山烙铁头蛇毒液蛋白质组学研究(英文)

目的收集一条中国特有品种莽山烙铁头蛇的新鲜毒液,对其蛇毒蛋白作生化分析。方法先以电泳胶片法分析比较莽山烙铁头蛇毒与中国大陆及台湾、日本琉球各地其它品种的烙铁头蛇和各地其他品种的烙铁头蛇的粗蛇毒,在凝胶电泳中展现之异同。然后利用高效液相色谱法(HPLC)将莽山烙铁头蛇毒中的磷脂酶分离,再以质谱仪等鉴定,并与以往相同方法分析莽山烙铁头蛇所得到的磷脂酶分析结果比较。结果我们的研究证实了莽山烙铁头蛇毒含唯一主要的磷脂酶,其含量大约占蛇毒总重量的58%,与中国其他烙铁头蛇品种及日本琉球烙铁头蛇的蛇毒某些碱性磷脂酶之氨基酸序列及蛋白结构特别相似。此碱性磷脂酶主要毒性是水肿、局部炎症及肌肉坏死。结论莽山烙铁头蛇咬伤的临床表现为抗凝与出血,局部炎症坏死等特点,亦可由其蛇毒成分得到印证与解释。     

湖南烙铁头蛇毒蛋白组分的双向电泳分析

烙铁头蛇是世界上剧毒的蛇种之一,其所携带的毒素能够导致严重的机体损伤。应用蛋白质双向电泳技术,对湖南烙铁头蛇蛇毒蛋白的蛋白质组分进行分析。通过等电聚焦和SDS-PAGE凝胶电泳分析获得完整的烙铁头蛇毒全蛋白质的图谱,经胶体考马斯亮蓝染色后,应用PDQuest软件对蛋白表达谱进行分析。通过等电聚焦和SDS-PAGE凝胶电泳有83个蛋白质组分被检测出来。其中大约90.00%的蛋白质的相对分子质量(Mr)分布在15～45 kDa之间,大约72.29%的蛋白质等电点(pI)在4.0～7.0之间。通过对烙铁头蛇毒的蛋白组学研究,获得其蛇毒蛋白质组分的表征特点,为后续进一步研究各组分的身份和潜在功能奠定基础,既可以提出新的治疗方案又可以为新的药理应用提供宝贵资源。     

莽山烙铁头蛇的养殖现状及存在问题

莽山烙铁头蛇分布范围狭窄,种群数量稀少,只在中国湘粤边界一带有分布,是中国特有的濒危蛇种。1994年列入《中国生物多样性保护行动计划》一级优先保护动物;1998年列入《中国濒危动物红皮书》极危等级的生物种;多次列入IUCN红色保护名录。开展对莽山烙铁头蛇的人工繁殖研究,扩大其种群数量,是保护好这一珍稀物种的唯一和关键的措施。我们从1994年起就开展了对莽山烙铁头蛇的人工繁殖和养殖研究,并成功繁殖100条莽山烙铁头幼蛇。在养殖莽山烙铁头蛇的过程中,我们发现有食物链狭窄、繁殖率低下、种群内亲杀、疾病与寄生虫等几种因素,严重影响莽山烙铁头蛇的成活率,这些因素的存在严重威胁着这个种群的生存。     

一种新的α—纤维蛋白原酶对血小板聚集的影响

ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）检测中国眼镜蛇毒蛋白酶水解纤维蛋白原的作用方式,发现该蛋白酶可迅速水解纤维蛋白原Ａα链,对γ链作用较弱,对Ｂβ链无作用,是一种新型的α－纤维蛋白原本科,用比浊法测定血小板聚集率,证实中国眼镜蛇毒蛋白酶低剂量（）０．０２５）ｍｇ／ｋｇ）、中剂量（０．０５ｍｇ／ｋｇ）以及高剂量（０．１ｍｇ／ｋｇ）体内给药浓度依赖性地抑制ＡＤＰ（１０μｍｏｌ／Ｌ）和胶原（１     

人凝血酶和浙江蝮蛇毒类凝血酶凝聚纤维蛋白原及释放血纤肽的不同机制

人纤维蛋白原经人凝血酶和浙江蝮蛇毒类凝血酶作用后,释放出血纤纤肽A和血纤肽B,二者可用高效液相色谱法分离鉴定。人凝血酶首先释放出血纤肽A,浙江蝮蛇毒类凝血酶则先释放出血纤肽B,甚至在纤维蛋白凝聚之前,血纤肽B的释放量早已达到极值,即使凝块形成后,血纤肽A与血纤肽B之比仍为1:3。人凝血酶在钙离子存在下,作用于纤维蛋白原时,其凝聚时间缩短,血纤肽A释放量不变,血纤肽B释放量则增高。在同样条件下,浙江蝮蛇毒类凝血酶作用时,血纤肽A释放量无明显变化,血纤肽B释放量却降低近1/3。无论是人凝血酶还是浙江蝮蛇毒类凝血酶,当与纤维蛋白原在2M尿素存在下反应时,均无可见凝块形成,但在37℃下用350nm光吸收监测其聚合过程仍可见光吸收上升,溶液呈乳白色。本文首次报道用电子显微镜观察比较了人凝血酶和浙江蝮蛇毒类凝血酶作用人纤维蛋白原后所形成的凝块结构。前者形成的结构致密,纤维长而细;后者形成的结构松散,较透明,纤维短而粗,这种结构更易为体内纤溶系统所降解。     

蛇毒中凝血酶样酶的研究

蛇毒中凝血酶样酶的研究韦世秀广西医科大学蛇毒研究所南宁５３００２１许多蝮亚科蛇毒中都含有一种氨基酸酯酶［１］,它催化纤维蛋白原分子特定部位Ａｒｇ－Ｇｌｙ肽键的裂解,释出血纤肽而转换为纤维蛋白。其作用与血浆凝血酶十分相似,因而称之为凝血酶样酶（Ｔｈｒｏ...     

山烙铁头蛇属在中国海南岛的发现(蛇亚目:蛙科:蝮亚科)

作者有幸在上海自然历史博物馆收藏中发现采于海南岛的山烙铁头蛇属(Ovophis Burgerin Hogeand Romano Hoge,1981)标本1号.该属广泛分布于中国、东亚和东南亚大部地区,但在海南岛尚无报道.本文对该标本详加描记.根据其鳞被特征,特别是尾下鳞成单,将其鉴定为过去仅知分布于越南山区的越南山烙铁头蛇Ovophis     

竹叶青Trimeresurus stejnegeri蛇毒凝血酶样酶的酶学性质研究

本文报道从竹叶青蛇毒中纯化的两个凝血酶样酶(组分Ⅰ和组分Ⅱ)的酶学性质研究。结果表明二者在体外都能使人纤维蛋白原转变为纤维蛋白,具有精氨酸酯酶活性,都能水解凝血酶专一性底物。纤维蛋白平板法证明组分Ⅰ具有激活纤溶作用;组分Ⅱ同时具有激活纤溶和直接纤溶作用;组分Ⅰ和组分Ⅱ能缓慢降解纤维蛋白原的α链,随着作用时间延长,组分Ⅰ还能进一步部分降解纤维蛋白原的β链,活性中心探讨表明,组分Ⅰ的活性中心由丝氨酸蛋白酶部位和糖基部位组成。组分Ⅰ水解BAEE的最适温度为50℃,最适pH为8.6。     

莽山烙铁头蛇的濒危现状与保护对策

目的探讨我国特有的珍稀蛇种──莽山烙铁头蛇的濒危现状与保护对策。方法基于文献资料,结合作者近年来的调查工作,对莽山烙铁头蛇的分布区、种群数量、濒危现状与威胁因素进行分析和探讨。结果近10年来,莽山烙铁头蛇的种群数量没有明显增加,基本保持稳定,但是仍遭受猎捕、贸易及栖息地破坏等因素的威胁。结论要保护好我国这一特有的珍稀蛇种,需要尽快将莽山烙铁头蛇列入国家重点保护野生动物名单,列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》,加强法律保护力度及国际贸易管控,积极开展生态生物学研究,实施人工繁殖和放归野外计划,以促进野生种群复壮。     

尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究Ⅱ.酶学与血液学活的研究

对四个凝血酶样成分（TLP）的酶学性质的比较研究表明，它们都具有凝结（血）活性和精氨酸酯酶活性。其凝结活力TLP[4]>TLP[3]>TLP[1]>TLP[2]，Ca[++]有激活作用，但不被肝素、EDTA所抑制；精氨酸酯酶活力以TLP[1]、TLP[2]较高，Ca[++]、EDTA无明显的激活或抑制作用；TLP[1]对热比较稳定，TLP[4]对于酸碱变化比较稳定。经动物体内试验表明，TLP[1]、TLP[2]具有较强的去纤抗凝作用，TLP[3]、TLP[4]不显示抗凝作用，而显示出较强的促凝血作用。结果表明，尖吻蝮蛇毒美洲矛头蝮蛇毒一样，同时含有去纤酶（Defibrase）和蛇毒凝血酶（Hemocoagulaes）。这一结果对该蛇毒的研究与应用是很意义的。     

蛇毒纤维蛋白（原）溶解酶的研究进展

蛇毒纤溶酶能直接溶解纤维蛋白（原）,具有作为强力溶栓剂的潜在价值。对蛇毒纤溶酶的深入研究,不仅有助于阐明蛇伤中毒患者的凝血病理机制,而且为其开发应用提供了理论基础。文章综述蛇毒纤溶酶的研究进展及应用前景,重点阐述其分子结构、酶学特性及其与出血活性的关系     

蛇毒类凝血酶calobin在毕赤酵母中的表达

蛇毒类凝血酶是临床上防治血栓栓塞性疾病的有效药物。参照朝鲜蝮蛇(Agkistrodon caliginosus,Korean Viper)类凝血酶calobin基因序列(GenBank AccessionNo.U32937.1),将人工合成的calobin基因克隆到酵母表达载体pPICZαA,于毕赤酵母中表达,得到了分子量约为32kD的重组calobin蛋白,经甲醇诱导培养,表达产物可获得3.5g/L的高表达量。重组蛋白经过阴离子交换柱Q-Sepharose Fast Flow和分子筛Sephacryl-S-100凝胶过滤层析等纯化步骤进行了初步纯化。纯化后的重组calobin可以在纤维蛋白原平板上形成水解圈,经SDS-PAGE实验显示,重组蛋白能水解纤维蛋白原的Aα链,产生一条约40kD左右的降解带。在实验中未能发现重组calobin对纤维蛋白原的凝固作用。