小麦赤霉病菌细胞壁提取物(HCW)的生物活性*

从小麦赤霉病菌一禾谷镰孢 Fusarium gramtnearum Schw．强致病力(F15)和弱致病力(H28)菌株的菌丝细胞壁制备获得提取物(HCW),分别在抗病和感病小麦品种上对其生物括性进行了测定。结果表明,HCW可显著提高小麦黄化芽鞘、愈伤组织和穗组织等的苯丙氨酸解氨酶(PAL)和黄化芽鞘组织的脂氧合酶(LOX)的活力,但不影响小麦黄化芽鞘的生长。强、弱致病力菌株的Hcw的生物活性无明显差异,抗、感病品种对}删的反应也基本一致。禾谷镰孢产生的一种单端孢霉烯族毒素一脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)也具有类似的生物活性。HCW和DON均可抑制病菌的生长,但这种抑制作用又可部分互相抵消。     

小麦赤霉病菌细胞壁提取物(HCW)的生物活性

从小麦赤霉病菌－禾谷镰孢ＦｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍＳｃｈｗ．强致病力（Ｆ15）和弱致病力（Ｈ２８）菌株的菌丝细胞壁制备获得提取物（ＨＣＷ）,分别在抗病和感病小麦品种上对其生物活性进行了测定。结果表明,ＨＣＷ可显著提高小麦黄化芽鞘、愈伤组织和穗组织等的苯丙氨酸解氨酶（ＰＡＬ）和黄化芽鞘组织的脂氧合酶（ＬＯＸ）的活力,但不影响小麦黄化芽鞘的生长。强、弱致病力菌株的ＨＣＷ的生物活性无明显差异,抗、感病品种对ＨＣＷ的反应也基本一致。禾谷镰孢产生的一种单端孢霉烯族毒素－脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ＤＯＮ）也具有类似的生物活性．ＨＣＷ和ＤＯＮ均可抑制病菌的生长,但这种抑制作用又可部分互相抵消．     

抗病小麦对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的脱毒及产物的生物活性

抗赤霉病小麦品种苏麦３号、繁９能转化镰刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ＤＯＮ）成产物Ｘ,而感病小麦品种宁麦６号、徐州２１无转化能力。产物Ｘ对小麦黄花芽鞘的伸长生长无抑制作用,而对禾谷镰刀菌分生孢子的萌发有明显抑制。说明抗性小麦品种对赤霉病菌毒素的脱毒是小麦重要的抗赤霉病机制。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对体外培养的两株胃癌细胞（SGC-7901和BGC-823）增殖及细胞周期的影响。采用细胞培养、噻唑蓝（MTF）比色法、流式细胞定量检测（FCM）、蛋白质免疫印迹（Western印迹）以及免疫细胞化学染色（ICH）等方法,研究不同浓度DON处理72h对体外培养胃癌细胞的增殖、细胞周期及细胞周期相关蛋白—细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（CKIs）P21WAF/CIP1和细胞周期蛋白E（cyclin E）表达的影响。MTT法检测结果显示DON可明显抑制两株胃癌细胞的增殖,SGC．7901和BGC．823细胞100、500、1000ug／L DON处理组的增殖抑制率分别为4．28％、36．20％、45．35％和14．89％、32．30％、51．61％。FCM检测结果显示,给予1000ug／LDON处理72h可使两株细胞周期阻滞在GffM期。在100～1000u扎浓度范围内,两株细胞P21WAF／CIP1表达量均高于对照组,P21WAF／CIP1的表达与DON浓度呈显著正相关关系（SGC-7901细胞：r=0．886,P〈0．01;BGC-823细胞：r=0．943,P〈0．01）;两株细胞的细胞周期蛋白E表达量均低于对照组,与DON浓度有明显剂量依赖关系（SGC．7901细胞：r=-0．923,P〈0．01;BGC-823细胞：r=-0．854,P〈0．01）。Western印迹及免疫细胞化学检测进一步证实了DON处理对蛋白质表达的影响。综合结果表明,DON可抑制体外培养胃癌细胞的增殖活性,G2／M期阻滞、P21WAF/CIP1表达增高及细胞周期蛋白E表达下降可能是DON抑制胃癌细胞增殖的可能机制,DON对分化程度不同的胃癌细胞的影响没有明显差别。     

仓储小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测技术的优化

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）是小麦仓储过程中的重要危害因子，其污染水平是仓储公司定期检测的重要指标。为提高DON检测的平行性和准确度，文章对仓储小麦DON检测过程中样品制备和酶联免疫吸附法（ELISA）检测关键技术进行优化。结果表明：样品制备过程中，将扦样后的样品先粉碎再分样的处理方法（方法 2）明显优于先分样再粉碎的方法（方法 1），测定样品的相对标准偏差由25.28%降至7.42%。另外，将ELISA检测过程中两种不同的移液枪使用方法（前进移液法和反向移液法）进行比较，发现前进移液法在10次测定中结果相对标准偏差较小，平行性较好；且加样过程中，采用不贴壁加样方式会使检测值更加准确，平行性也较好。优化后的仓储小麦中DON毒素ELISA快速检测技术具有较好的平行性和准确度，可用于实际仓储小麦中DON毒素的准确、快速检测。     

饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的薄层层析测定法

确立了一个适于测定饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivslenol,简称DON)的薄层层析法。该方法可排除样品中成分复杂、干扰物质多的不利条件,提取和净化效率高,操作较简便,具有较好的实用性和可靠性。标准点最低检出量为10ng,样品的最低检出限是40ppb。该方法对100、300和500ppb水平的回收率分别是85.9、88.9和79.2%。     

赤霉病麦中毒研究Ⅲ．赤霉病麦粗毒素的生殖毒理学研究

赤霉病麦粗毒素为赤霉病麦的乙醇提取物,其中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮含量分别为11100 ppm和605ppm。家猫和鸽子的致吐剂量分别为300和400 mg粗毒素/kg体重。成年雌雄大鼠经口LD_(50)分别为8150和10550mg粗毒素/kg体重。1000mg粗毒素/kg体重经口给予未成年雌性大鼠,未见有雌激素亢进反应。将粗毒素含量0.01,0.1和0.5％的饲料喂养断奶Wistar大鼠210—301天,在此期间大鼠繁殖F1a和F1b两代仔鼠,并观察至断奶。在所有剂量组均观察到对生长、发育或生殖的程度不同地损害。本文讨论了赤霉病麦对大鼠生殖力的影响及其作用机制。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人外周血单个核细胞 HLA-I分子表达的影响

研究探讨了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞HLA-I(human leucocyte cyte antigen I)分子表达影响.采用流式细胞术(FCM)和免疫印迹方法研究了不同剂量DON对体外培养人外周血单个核细胞表面HLA-I分子表达的影响及其量效关系.FCM定量检测结果表明,不同浓度DON处理均可一定程度降低人外周血单个核细胞表面HLA-I分子的表达,DON 50ng/mL、100ng/mL、1000 ng/mL和2000 ng/mL组HLA-I类分子的平均表达量分别为6.92±0.68、6.64±0.69、5.95±0.48和5.48±0.77,在50～2000ng/mL范围内随着DON浓度增加,外周血单个核细胞HLA-I分子表达降低,两者呈显著负相关(r=0.737,P＜0.01).Western印迹结果显示,大剂量DON(1000ng/mL和2000ng/mL)组人外周血单个核细胞HLA-I分子表达明显减弱.研究结果表明脱氧雪腐镰刀菌烯醇可剂量依赖地抑制体外培养的人外周血单个核细胞HLA-I分子的表达.     

快速同时检测玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

目的：利用稀土离子作为示踪剂,建立DON/ZEN双标记间接竞争时间分辨荧光免疫分析方法同时检测DON、ZEN。 方法：以DON BSA、ZEN-BSA共包被于固相微孔板,与DON/ZEN标准或样品中的DON、ZEN竞争结合抗DON多抗、抗ZEN单抗,然后分别用稀土离子Eu3+-羊抗兔IgG及Sm3+ 羊抗鼠IgG进行示踪检测,并对建立DON/ZEN-双标记TRFIA进行方法学的考核。结果：DON/ZEN-双标记TRFIA检测灵敏度,DON为0.2 ng/ml、ZEN为0.7 ng/ml,检测范围为：DON 0.2~100 ng/ml,ZEN 0.7~50 ng/ml,批内、批间变异率均小于10%。不同样品添加回收实验表明玉米、小麦样品中DON平均回收率分别为102.8%、98.8%,ZEN平均回收率分别为94.2%、95.7%。DON/ZEN-双标TRFIA检测时,DON与ZEN不相互干扰,该方法特异性好。玉米样品检测结果表明,DON/ZEN双标记TRFIA与单标记DON -TRFIA、ZEN-TRFIA试剂盒结果高度相关,具有较好的一致性,两者检测DON的结果相关系数为0.9760,检测ZEN结果的相关系数为0.9695,结论：DON/ZEN-双标记TRFIA灵敏度高,检测范围宽,重复性、稳定性好,一次检测可同时得到DON、ZEN两个结果,是一种简便、快速、经济、稳定、可进行大批量样品筛查的检测方法。     

安徽省居民家庭内即食状态谷类食物脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染调查和暴露评估

目的：调查安徽省居民家庭内即食状态谷类食物脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）污染情况并评估调查人群膳食DON暴露水平。方法：在安徽省阜阳市选择2个村庄作为调查点,通过称重法获得305名调查对象在整个调查日内食用的所有即食状态谷类食物克数,并分别采样检测其中DON、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3-Ac-DON)、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（15-Ac-DON)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-3-葡萄糖苷（DON-3-G）含量。基于调查对象主要谷类食物个体消费量和各类食物DON平均含量,采用简单分布模型,计算每个个体膳食DON暴露量。结果：调查人群主要食用的谷类食物包括大米粥、馒头/花卷、面条、米饭、粑粑子。馒头/花卷和粑粑子中DON和DON-3-G均100%检出,总DON平均含量分别为454.9、457.7 μg/kg,最高污染水平来自馒头/花卷样品,总DON含量为2 067.8μg/kg。面条中DON和DON-3-G检出率分别为100%、71.6%,总DON平均含量为75.5μg/kg。米饭和大米粥中两种物质检出率和含量均相对较低。调查人群膳食DON平均暴露量为2.6μg/（kg·d）,高于每日耐受摄入量（TDI）（1μg/kg体重）,高端暴露水平（P90~P99）为4.0~6.2μg/（kg·d）,是TDI的4倍以上,调查人群中93.8%的个体DON暴露量超过TDI。各年龄组DON暴露量无显著差异（P=0.381）。以小麦为主要原料的食物对DON平均暴露量的总贡献率达94.1%,其中馒头/花卷贡献率最高,为65.4%。结论：安徽省调查人群膳食DON暴露量较高,存在一定的健康风险,馒头/花卷和面条等小麦制品是主要暴露来源。     

戊唑醇对小麦纹枯菌超微结构的影响

用光镜和电镜技术研究了新型三唑类杀菌剂戊唑醇对小麦纹枯病菌发育的组织学和超微结构的影响.光镜和电镜观察发现戊唑醇处理导致病菌发生一系列变化菌丝呈现念珠状异常膨大和缢缩,菌丝原生质体内液泡和电子致密体增多,菌丝细胞壁不规则加厚,部分菌丝的隔膜发育受阻成畸形,不能形成正常的桶孔隔膜和桶孔覆垫.有些菌丝原生质体内出现菌丝内套菌丝的现象.这些变化最终导致菌丝细胞解体死亡.     

血清及BSA对牛体外受精胚胎发育过程超微结构影响的研究

本研究将牛IVF胚胎分别在SOF FCS、SOF BSA和SOF PVA三种培养系统内进行培养,然后分别取三个系统中发育到原核期、2细胞、4细胞、8细胞、桑椹胚和囊胚阶段的胚胎进行透射电镜的观察,了解培养系统中血清和BSA的添加与否对胚胎发育过程中细胞内脂滴、细胞连接、细胞凋亡和微绒毛发育的影响。观察结果表明：各培养系统胚胎的细胞质中均存在大量的脂滴,表明外培养系统是造成脂滴积累的主要原因;血清的添加不会进一步促进脂滴的大量积累,反而可以避免多个脂滴聚合成更大的脂滴。三种培养系统条件下胚胎细胞连接无显著差异。培养系统中添加FCS或BSA时,桑椹胚期以后的胚胎细胞中存在凋亡小体,表明血清成分是引起细胞凋亡的重要原因。培养系统中血清成分的缺乏会影响胚胎表面微绒毛的发育。     

小麦雪霉叶枯病菌侵染过程的细胞学研究

采用电镜技术研究了小麦雪霉叶枯病菌(Gerlachia nivalis)侵染过程的细胞学特征。电镜观察发现,分生孢子萌发产生的芽管由孢子细胞壁内层延伸而成;病菌侵入寄主体内后,胞间菌丝先在寄主细胞间扩展,随后胞间菌丝侵入坏死的寄主细胞,形成胞内菌丝;胞间菌丝和胞内菌丝在形态结构上无明显差异。在病菌扩展过程中,寄主细胞发生了一系列的病理变化,并最终坏死消解,寄主细胞的变化可能与病菌分泌的毒素有关。     

猪精子体外获能与顶体反应的超微结构研究

用４种方法,检测了猪精子体外获得的效果。结果证明：高离子浓度的前培养液和猪镦泡液,具有促进获能过程的作用,实验还获得了获能后顶体反尖的一些重要的形态学变化资料,包括质膜的膨胀、断裂、顶体膨胀、顶体外膜内陷或原位局部囊泡化,质膜再全部丢失。顶体内膜直到与卵母细胞质膜融合,才发生可见的变化。受精过程无论体内或体外,都容易发生多精入卵,体外受精则更甚。在精子穿过卵丘细胞之间时,一方面开始进行顶体反应,另     

中国小麦雪霉叶枯病菌种的鉴定

系统研究和鉴定了产自中国陕西、青海、宁夏、四川、贵州、西藏、湖北、新疆等8个省区的31个小麦雪霉叶枯病菌菌系和1个产自捷克的菌系。结果表明,各菌系的培养性状和形态特征、尤其是环痕状的产孢细胞和具淀粉质顶环的子囊等均符合 Gerlachia nivalis (Ces.Ex Sate．)W．Gares & E．Mdll．[有性态：Monographella nivalis (Schaffn·)E·Mfill·]的鉴别特征。小麦雪霉叶桔病菌对三唑酮等8种药物比镰刀菌敏感,各菌系人工接种小麦幼苗均引起相同症状,人工接种可侵染22属55种禾本科植物。确认了该菌与欧洲、北美发生的红色雪霉病病菌为同种。因此,将中国小麦雪霉叶枯病菌定名为雪腐格氏霉[Gerlaehia nivalis(Ces．Ex Saee．)W．Gams ＆ E. Miill.]。     

木霉对辣椒疫霉菌抑制作用的超微结构与细胞化学

哈茨木霉菌株NF9和TC3对辣椒疫霉病菌具有强烈的抑制作用。超微结构与细胞化学研究表明,木霉菌丝能够缠绕并寄生疫霉菌菌丝,且重寄生作用主要发生在培养基内的菌丝上。但在绝大多数情况下,木霉菌可直接水解和破坏疫霉菌菌丝,说明木霉抑菌作用的主要机制是直接向外分泌水解酶分解疫霉的细胞壁及细胞质,而不是重寄生作用。不同培养基对木霉的重寄生作用有重要影响,减少培养基中葡萄糖含量可以增强木霉的重寄生作用和抑菌效果。此外,在菌落生长后期,疫霉的新生菌丝均可侵染自身的老菌丝。     

斑点热群新疆立克次体对宿主细胞感染过程的形态学研究

对新疆立克次体(精河株,下同)感染体外培养的人胚肾传代细胞(简写MERN)和体内鸡胚卵黄囊膜细胞的标本进行了电镜观察。发现立克次体以宿主细胞膜内翻形式进入宿主细胞,在胞浆和胞核内寄生,以二分裂方式增殖;并能察见多个立克次体的链状结构;胞浆内的菌体以核膜内翻方式进入核内,以密集成丛或散在方式生长;在感染后第5—8天的MERN中,立克次体以出芽方式释放,在第8天后通过宿主细胞解体方式释放。文中讨论了新疆立克次体感染宿主细胞过程中的有关机制。我们还发现在宿主细胞内立克次体的附近有直径为20—23nm的微管结构,其功能待深入研究。     

小麦体细胞胚发生的超微结构研究

对小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．）幼胚培养中体细胞胚发生过程的超微结构变化进行了研究,结果如下：（１）原体细胞中大液泡消失,存在大量小液泡,细胞质的电子密度加强,核大,核仁明显,出现多核仁;（２）细胞器数量和种类,如质体、核糖体和线粒体增加;（３）细胞壁加厚,胞间连丝逐渐消失,细胞器数量丰富,胚性细胞中积累淀粉;（４）细胞壁加厚的胚性细胞中存在核仁液泡、自体吞噬泡和分泌泡;（５）多细胞原胚、球形胚和梨形胚被一层外壁包围,但胚体内细胞间广泛存在胞间连丝;（６）成熟胚生长点部位的细胞内质体中出现膜系结构,已向叶绿体转变,类囊体已形成     

样本对小麦遗传距离与杂种优势关系的影响

本文以10个小麦品种和按双列杂交配制的45个组合为材料,研究了样本容量和样本的数据结构对遗传距离与杂种优势关系的影响．结果表明：（1）当样本容量较小时,遗传距离与产量杂种优势的关系为不相关;随着样本容量的增加,遗传距离与产量杂种优势的关系有由不相关,到Y=axe～bx(a＞0,b＜0）,Y=ax～be～cx（a、b＞0,c＜0）相关的变化趋势．（2）当样本的数据结构较差时,需较大样本容量,才能真实反映遗传距离与产量杂种优势的关系．