清瘟败毒饮对脓毒症大鼠脾组织TNF信号通路相关基因表达的影响

目的基于TNF信号通路探讨清瘟败毒饮抗脓毒性脾功能损伤的可能机制。方法选择清洁级健康雄性Wistar大鼠45只,随机分为对照组、脓毒症组(A组)、清瘟败毒饮干预组(B组),每组15只。A组大鼠采用盲肠结扎穿孔术(CLP)进行复制脓毒症模型;B组大鼠除CLP外,于术前2天给予中药胃饲2次/d,术后继续中药灌胃;对照组实施除CLP外的开腹、关腹。3组术毕均予5 ml/kg平衡液肌肉注射。术后24 h取脾组织提取总RNA后行RNA-seq对mRNA表达量进行检测,并应用生物信息学方法分析清瘟败毒饮对脓毒症大鼠脾组织TNF信号通路相关基因的表达变化。结果相对于对照组, A、B组大鼠脾组织TNF信号通路相关基因中,同时上调的基因有19个,同时下调的基因有8个,下调转正常的基因1个,正常转上调的基因5个,由上调转为正常的基因7个(Ccl20、Cxcl10、IL-1b、IL6、Bcl3、Mmp9、Sele),正常转为下调的基因13个(ASK1、IKKα、CASP8、ITCH、p38、Drp1、IKKs、p38、Ccl5、Csf1、IL18R1、IL15、Ifi47)。结论清瘟败毒饮可通过调节TNF信号通路相关基因的过度表达,从而对脓毒症大鼠脾功能起到保护作用。     

犀角地黄汤对脓毒症大鼠脾脏组织基因表达的影响

目的采用RNA-seq技术检测犀角地黄汤干预后脓毒症大鼠脾脏组织基因的表达变化,从基因水平探究其可能的作用机制。方法将45只清洁级健康雄性Wistar大鼠采用随机数字表法等分为对照组、脓毒症组、犀角地黄汤干预组。脓毒症组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)进行建模。犀角地黄汤干预组大鼠除了CLP外,并于术前2天给予中药胃饲(胃饲量即浓煎剂总ml数/60×6.25×2),每天2次,于每天上、下午各给药1次;术后连续胃饲2天。对照组仅行开腹、关腹,不予盲肠结扎穿孔。3组术毕均肌肉注射平衡液5ml/kg;术后24h取脾组织提取RNA后采用RNA-seq进行基因检测,应用计算机软件分析比较3组大鼠脾组织基因表达的变化及涉及的相关通路。结果大鼠建模后24h,相对于对照组,脓毒症大鼠脾脏组织基因表达上调数为1030个,下调数为935个;犀角地黄汤干预组大鼠脾脏组织基因表达上调数为972个,下调数为1149个。犀角地黄汤干预组大鼠基因改变涉及的通路有Th17细胞分化相关通路、TNF信号传导相关通路、IL-17信号传导相关通路、细胞因子-细胞因子相互作用相关通路。结论犀角地黄汤可能主要通过调节Th17细胞分化相关通路、TNF信号传导相关通路、IL-17信号传导相关通路、细胞因子-细胞因子相互作用相关通路的信号表达,进而缓解脓毒症大鼠的炎症反应。     

脓毒症大鼠肺组织炎症反应相关基因表达变化

目的应用PCR Array技术检测脓毒症大鼠肺组织炎症相关基因的表达,从基因水平探讨其可能的作用机制。方法采用随机数字表法将30只清洁级健康雄性Wistar大鼠等分为对照组、脓毒症组。脓毒症组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)进行建模,对照组仅行开腹、关腹,不予盲肠结扎穿孔,两组术毕均肌肉注射平衡液5ml/kg,并于术后24h取肺组织提取RNA后采用RT2 ProfilerTM PCR Array进行基因检测,应用计算机软件分析比较两组大鼠肺组织炎症相关基因表达的变化。结果大鼠建模后24h,与对照组比较,脓毒症组大鼠肺组织炎症反应相关基因表达12条基因出现表达上调,18条基因出现表达下调,主要涉及趋化因子、生长因子、白介素家族、抗炎相关细胞因子、TNF家族、干扰素。结论肺部炎症反应相关基因失衡的表达可能是脓毒症相关性肺损伤的主要原因。     

和厚朴酚通过激活SIRT1/FOXO1信号通路抵抗小鼠脓毒症脑损伤

目的:探究和厚朴酚是否通过激活SIRT1/FOXO1信号通路抵抗小鼠脓毒症脑损伤。方法:通过C57BL/6小鼠盲肠结扎穿孔法建立脓毒症脑损伤模型。小鼠随机分为以下6组:假手术(Sham)组;和厚朴酚处理(HKL)组;盲肠结扎穿孔(CLP)组;盲肠结扎穿孔+和厚朴酚处理(CLP+HKL)组;EX527 (SIRT1特异性抑制剂)预处理+盲肠结扎穿孔+和厚朴酚处理(CLP+HKL+EX527)组;EX527预处理+盲肠结扎穿孔(CLP+EX527)组。盲肠结扎穿孔48 h后检测脑组织内水含量、凋亡率及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的表达情况、炎症相关分子IL-1β与TNF-α、SIRT1信号通路相关蛋白表达情况。结果:与CLP组相比,CLP+HKL组脑组织内SIRT1的表达量及活性、Bcl-2表达量明显增加,而脑组织水含量、凋亡率、Bax、cleaved Caspase-3、IL-1β与TNF-α的表达量明显降低(均P 0.05)。EX527可明显抑制HKL的上述脑保护作用(P 0.05)。结论:和厚朴酚主要通过激活SIRT1/FOXO1信号通路,抑制凋亡与炎症,从而缓解脓毒症脑损伤。     

脓毒症致大鼠急性肾损伤中炎症介质的变化及机制探讨

目的观察脓毒症致大鼠急性肾损伤(AKI)中血清和肾脏组织中炎症介质的变化及肾脏组织中核因子-κB(NF-κB)的表达,探讨脓毒症致大鼠急性肾损伤的可能机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和盲肠结扎穿孔组(CLP组)。CLP组大鼠采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症动物模型,Sham组除不结扎穿孔盲肠外,其余处理同脓毒症组。分别于造模后6h、12h和24h观察各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)水平,肾脏组织中Toll样受体4(TLR4)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达;免疫组化法检测肾小管中NF-κB p65的表达,分析NF-κB p65核阳性率。结果与相同时间点Sham组比较,CLP组6h~12h大鼠血清TNF-α和IL-6水平明显升高(P0.01),CLP组6h~24h大鼠肾脏组织中TLR4mRNA表达明显升高(P0.01),CLP组12h~24h大鼠肾脏组织中HMGB1mRNA表达明显升高(P0.01),CLP组6h~24h大鼠肾小管中NF-κB p65核阳性率升高(P0.05~P0.01)。结论随脓毒症致AKI病程的延长,大鼠肾脏组织中TLR4和HMGB1mRNA表达和NF-κB p65核阳性率明显升高,其机制可能与TLR4介导的炎症通路密切相关。     

复合感染脓毒症大鼠模型的构建和评价

目的 着力于解决盲肠穿刺结扎(CLP)模型因水肿肠道封堵结扎穿刺部位随机影响模型动物感染进程的问题,探索通过复合感染支架整合盲肠结扎穿刺法和植入带菌物法,建立感染可持续的脓毒症动物模型。方法 将54只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=18)、盲肠穿刺结扎组(CLP组,n=18)、复合感染脓毒症模型组(MIM组,n=18),其中每组10只用于考察各组动物一般生存状态、盲肠结扎部位封堵情况和生存率;每组另8只用于考察各组脓毒症损伤指标。采用HE染色观察大鼠心脏、肝、肺、肾组织病理形态改变;取腹主动脉血检测脂多糖(LPS)、白介素-6(IL-6)、心肌钙蛋白-Ⅰ(cTn-I)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、乳酸(Lac)和肌酐(Cr)含量;取肝组织检测丙二醛(MDA)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量。结果 造模96 h后,Sham组大鼠无死亡,CLP组大鼠生存率70%,MIM组生存率0%;MIM组心脏、肝、肺、肾组织损伤程度较CLP模型组更为严重;MIM组分别与Sham组和CLP组比,LPS、IL-6、cTn-I、ALT、AST、...     

右美托咪定对脓毒症大鼠血线粒体能量代谢相关基因表达的影响

目的基于PCR Assay芯片技术,分析右美托咪定对脓毒症大鼠血线粒体能量代谢相关基因表达变化并推论其可能的作用机制。方法将健康雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分成3组,即对照组、脓毒症组、右美托咪定预干预组,每组10只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症大鼠模型,假手术组仅开腹、关腹,不行CLP。其中右美托咪定预干预组则在造模前及造模后2h于腹腔注射右美托咪定40μg/kg,脓毒症组及假手术组肌注平衡液5ml/kg,3组均于术后24h留取血标本,并分离线粒体后提取RNA行PCR Assay基因芯片检测。结果脓毒症组大鼠血液线粒体能量代谢相关基因如Ndufa1、Ndufab1、Ndufb2、Ndufs8、Sdha、Uqcrb、Cox8a、Atp5a1、Atp5i的Fold值下调明显,右美托咪定干预后大鼠血液线粒体能量代谢相关基因如Ndufa1、Ndufab1、Ndufb2、Ndufs8、Sdha、Uqcrb、Cox8a、Atp5a1、Atp5i的Fold值有升高趋势。结论右美托咪定可能通过调节线粒体能量代谢相关基因的表达,从而起到对脓毒症大鼠的保护作用。     

氯化锂对脓毒症大鼠血清促炎细胞因子及氧化损伤的影响

目的:探讨氯化锂对脓毒症大鼠的促炎细胞因子及氧化损伤的影响。方法:将50只Wistar大鼠按随机数字表随机分为假手术组(S组,n=10)、模型组(CLP组,n=20)、氯化锂干预组(CLP+Li Cl组,n=20),每组又分为8 h、16 h、24 h 3个时间观察点亚组,CLP组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型。氯化锂干预组于CLP手术后立即给予腹腔注射Li Cl溶液(50 mg/Kg),假手术组和CLP组给予等量生理盐水腹腔注射。每组每只大鼠分别于术后8 h、16 h、24 h采集眼眶静脉血检测其中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)浓度,并记录术后24 h各组大鼠生存率。结果:与S组相比,CLP组及CLP+Li Cl组各时间点血清TNF-α、IL-6和MDA的浓度上升,SOD浓度降低,差异有统计学意义(P0.05);与CLP组同时间点比较,CLP+Li Cl组血清TNF-α、IL-6和MDA的浓度下降,SOD浓度升高;与CLP组术后24h生存率相比,CLP+Li Cl组生存率提高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:氯化锂可能通过抑制炎性细胞因子释放以及减轻氧化应激损伤的机制实现提高脓毒症大鼠生存率的作用。     

CLP脓毒血症模型肝组织损伤芯片中差异基因及潜在通路分析

本文主要对大鼠、小鼠盲肠结扎穿刺术(CLP)脓毒血症模型进行分析,从模式动物角度发现潜在的脓毒血症相关基因,为脓毒血症诊疗提供理论依据。从NCBI-Gene Expression Omnibus数据库下载原始微阵列数据集,然后纳入盲肠结扎穿刺术脓毒血症及假手术组模型数据。运用生物信息学方法将数据标准化处理后,筛选差异基因进行富集分析和通路分析,并构建蛋白质相互作用关系网络,筛选出具有重要生理调节功能的核心蛋白质和关键候选基因。通过大鼠盲肠穿刺脓毒血症诱导后肝组织的差异基因表达芯片筛选,共获得350个能上调1. 5倍及以上的差异基因,1 337个能下调2倍及以上的差异基因;通过小鼠盲肠穿刺脓毒血症诱导后肝组织的差异基因表达芯片筛选,获得3 532个上调1. 5倍及以上的差异基因,4 020个下调1. 5倍及以上的差异基因;对上述芯片结果的差异基因取交集,得到29个共同上调表达1. 5倍以上的差异基因和84个共同下调表达1. 5倍以上的差异基因。利用String数据库对上述基因进行蛋白质-蛋白质的相互作用(PPI)网络分析,并利用David数据库从生物过程(BP)、分子功能(MF)、细胞组分(CC)和KEGG (Kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路4个角度进行基因功能分析,发现共有10条通路与脓毒血症肝组织关系密切,其中最主要的通路为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路,其次,缺氧诱导因子1(HIF-1)、叉形头转录因子的O亚型(FoxO)、乙型肝炎、血小板激活及胆汁分泌等通路调控也与脓毒血症相关。本研究为进一步探讨脓毒血症相关病理生理机制及诊疗方法提供了理论基础。     

复方清下汤对脓毒症大鼠肺组织细胞因子白介素-1及白介素-6基因表达的影响

目的 探讨复方清下汤对脓毒症大鼠肺组织白介素-1(IL-1)及白介素-6(IL-6)基因表达的影响,进一步探讨其减轻肺损伤机制.方法 将健康SD大鼠随机分为4组,每组10只:假手术组(SHAM组),脓毒症肺损伤组(模型组),盲肠结扎穿孔+复方清下汤组,以及盲肠结扎穿孔+头孢哌酮舒巴坦(舒普深)组,造模24 h后收集标本.应用免疫组织化学和Westernblotting法检测肺组织中IL-1、IL-6的表达,RT-PCR检测肺组织上述蛋白mRNA表达.结果 与SHAM组比较,模型组IL-1、IL-6的mRNA转录水平和蛋白水平表达均显著升高(P＜0.01);抗生素及中药处理组与模型组比较,IL-1、IL-6的表达明显降低(P＜0.01),抗生素及中药处理组两组检测数据相近.结论 脓毒症大鼠肺损伤时细胞因子IL-1、IL-6过度表达可能是造成脓毒症肺损伤的重要原因;复方清下汤处理的动物模型肺损伤减轻的同时IL-1、IL-6表达变化,提示它可能通过调控IL-1、IL-6表达起作用.     

人参皂苷Rg5对脓毒血症大鼠急性肺损伤的保护作用

目的:观察人参皂苷Rg5对脓毒血症大鼠引起急性肺损伤(ALI)的作用.方法:30只大鼠建立盲肠结扎穿孔法(CLP)脓毒症模型,随机均分为以下3组(n=10):阴性对照组(Sham组)、CLP组及CLP+Rg5组.各组分别于手术后24 h时检测大鼠血清TNF-、IL-6、高迁移率族蛋白1(HMGB1)及IL-10含量;手术24 h后检测肺组织干湿重比(W/D)、髓过氧化物酶活性(MPO)及NF-кB活性;HE法进行肺组织学评分.结果:CLP+Rg5组血浆及肺组织HMGB1和TNF-水平明显低于CLP组(P＜0.05).CLP+Rg5组肺组织W/D、MPO活性、NF-кB活性及肺组织损伤评分均明显低于CLP组(P＜0.05).IL-10水平24h时在各组动物比较结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论:人参皂苷Rg5可以改善脓毒血症引起ALI时炎症反应从而发挥肺保护作用.     

电针对脓毒症大鼠肺炎症反应和高迁移率族蛋白B1的影响

摘要 目的：研究电针足三里对脓毒症大鼠肺脏炎症反应和病理损伤的调节,为脓毒症的临床治疗提供新的理论依据。方法：成年雄性SD大鼠40只,按照随机数字表法分为假手术组（sham组）、脓毒症（盲肠结扎穿刺术( Cecal ligation and puncture, CLP)组）、脓毒症+假电针组（非经非穴组）和脓毒症+电针足三里组（足三里组）,每组10只。除第一组外,其余大鼠均采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症大鼠模型;造模前,脓毒症+假电针组选择非经非穴处电针刺激,脓毒症+电针足三里组给予足三里穴位电针处理,电针参数为疏密波,2 Hz,1 mA,持续30 min,连续5天。术后24 h,先取支气管肺泡灌洗液, 再取右肺测湿干重比,取左肺下叶观察病理学改变,取左肺上叶检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor, TNF-α)、白介素-1(interleukin -1, IL-1β)、白介素-6(interleukin-6, IL-6)和HMGB1。结果：与sham组比较,CLP组大鼠肺组织出现明显病理损伤（均P＜0.05）,炎症因子明显升高（均P＜0.01）,高迁移率族蛋白1（High mobility group 1 protein, HMGB1）明显升高(P＜0.05);经过电针足三里处理,脓毒症大鼠肺组织病理损伤明显减轻（P＜0.05）,炎症因子明显降低（均P＜0.01）,HMGB1明显减少(P＜0.05)。CLP组与非经非穴组大鼠生存率、肺组织病理损伤、炎症因子和HMGB1无明显差异,差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论：电针足三里可以减轻脓毒症大鼠肺的炎症反应和组织损伤,降低其肺脏HMGB1水平。     

LPS诱导脓毒症小鼠脾组织microRNA表达的筛选研究

目的采用Small RNA测序技术检测脓毒症小鼠24 h脾组织microRNA(miRNA)的表达变化,并从非编码基因层面分析脓毒症脾功能损伤的可能机制。方法将30只SPF级健康BALB/C小鼠随机分为对照组和脓毒症组,每组15只。脓毒症组采用LPS 10 mg/kg腹腔注射进行建模,对照组仅予等量生理盐水腹腔注射。两组术毕均行肌肉注射平衡液5 ml/kg,并于术后24 h各组随机取5只小鼠的脾组织提取RNA,采用Small RNA测序技术进行miRNA检测,然后应用生物信息学软件分析脓毒症小鼠脾组织的miRNA表达差异及靶基因预测。结果小鼠建模后24 h,与对照组相比,脓毒症小鼠脾脏组织已知及未知miRNA表达上调数分别为39个、3个,下调数分别为16个、3个。其中已知miRNA表达上、下调倍数最大的前5个基因分别为Rno-miR-217-5p,rno-mir-216a-5p,rnomiR-216b-5p,rno-miR-375-3p,rno-mir-216b-3p。下调倍数前5的miRNA:Rno-miR-138-5p,rno-miR-451a-3p,rno-miR-138-1-3p,rno-miR-202-5p,rno-miR-592。结论LPS诱导脓毒症小鼠可出现miRNA表达量的改变,其上、下调倍数最显著的miRNA可能对预测LPS诱导的脓毒症脾功能损伤有一定指导意义。     

富氢液对大鼠脓毒血症引起急性肺损伤的影响

目的:探讨富氢液对大鼠脓毒血症引起急性肺损伤的影响。方法:24只大鼠建立盲肠结扎穿孔法(CLP)脓毒症模型,随机均分为以下3组(n=8):假手术组(Sham组)、CLP组及CLP+富氢液组。CLP+富氢液组于CLP后即时、6及18 h腹腔分别注射富氢液5 ml/kg,CLP组及假手术组于上述相应时间点腹腔注射富氢液5 ml/kg。CLP或假手术24 h后检测肺组织TNF-α、IL-6、HMGB1、IL-10、MDA、SOD、MPO活性及干湿重比(W/D)并采用HE染色法进行肺组织学评分。结果:与Sham组比较,CLP组及CLP+富氢液组肺组织TNF-α、IL-6、HMGB1、IL-10、MDA、SOD、MPO活性、W/D及肺组织学评分明显升高而SOD活性明显降低(P<0.05);与CLP组相比,CLP+富氢液组IL-6、HMGB1、MDA、MPO明显降低及肺组织学评分明显降低而SOD明显升高(P<0.05)。结论:富氢液降低脓毒血症的炎性反应和氧化应激,从而改善ALI时的肺功能。     

富氢液对脓毒症小鼠心肌细胞线粒体自噬的影响

为评价富氢液（hydrogen-rich saline,HRS）对脓毒症小鼠心肌细胞线粒体自噬的调节及其对心功能障碍的治疗作用,选取72只雄性C57BL/6J小鼠作为研究对象,采用随机数字表法分为假手术组（Sham组）、假手术+富氢液组（Sham+HRS组）、脓毒症组（CLP组）、CLP+富氢液组（CLP+HRS组）,每组18只。采用盲肠结扎穿孔法建立小鼠CLP模型。Sham+HRS组和CLP+HRS组分别于造模后1、6 h时腹腔注射富氢液10 mL·kg^-1。每组随机取6只小鼠,于造模后24 h时收集小鼠颈动脉血样,采用ELISA法测定血液肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（interleukin-1β,IL-1β）、肌钙蛋白I（cardiac troponin I,cTnI）和肌酸激酶同工酶（creatine kinase MB,CK-MB）水平;于造模后24 h时取心肌组织,采用荧光素-荧光酶发光法检测ATP,荧光分光光度法检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）。造模后24 h采用Western blot法测定心肌组织线粒体自噬相关蛋白微管关联蛋白轻链3Ⅱ/轻链3Ⅰ（microtubule-associated protein 1 light/protein 3 light,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）和蛋白62（protein 62,P62）的表达水平。结果显示,与Sham组比较,CLP组血清TNF-α、IL-1β、cTnI和CK-MB水平升高,心肌ATP、MMP水平下降,心肌LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平上调,P62表达水平下调,差异有统计学意义（P<0.05）;与CLP组比较,CLP+HRS组血清TNF-α、IL-1β、cTnI和CK-MB含量下降,心肌组织ATP、MMP水平升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平进一步上调,P62表达进一步下调（P<0.05）。结果表明,富氢液对脓毒症小鼠心功能障碍的治疗作用可能是通过调节心肌细胞线粒体自噬实现的。研究旨在探讨富氢液对脓毒症小鼠心功能障碍的治疗作用及机制,以期为富氢液的临床转化提供理论依据。     

HMGB1 在a2A- 肾上腺素受体介导脓毒血症大鼠急性肺损伤的作用

目的:探讨HMGB1在a2A-肾上腺素受体介导脓毒血症大鼠急性肺损伤(ALI)的作用。方法:64大鼠建立盲肠结扎穿孔法(CLP)脓毒症模型,随机均分为以下两组:CLP组及CLP+马来酸钠组。各组分别于模型建立后2(T1)、6(T2)、12(T3)、24 h(T4)时检测大鼠血清TNF-、高迁移率族蛋白1(HMGB1)及IL-10含量。CLP24 h后检测肺组织干湿重比(W/D)和髓过氧化物酶活性(MPO)及HMGB1表达;并采用HE法进行肺组织学评分。结果:CLP+马来酸钠组T2时的TNF-水平明显低于CLP组(P<0.05);而HMGB1在T2、T3及T4均明显低于CLP组(P<0.05);IL-10在各个时间点比较结果差异无统计学意义(P>0.05)。CLP+马来酸钠组肺组织W/D、MPO活性、肺组织损伤评分均明显低于CLP组(P<0.05)。CLP+马来酸钠组肺组织HMGB1表达明显低于CLP组(P<0.05)。结论:HMGB1参与了ALI的病理过程,a2A-肾上腺素受体阻断可以通过抑制HMGB1从而改善ALI时的肺功能。     

复方清下汤对脓毒症大鼠细胞因子白介素-1、白介素-6调控及肺损伤的作用

目的盲肠结扎穿孔导致大肠埃希菌腹膜炎进而建立脓毒症肺损伤大鼠模型,检测炎性反应时,细胞因子的调控变化,探讨肺水肿的形成机制。经复方清下汤处理后检测上述变化。方法将健康SD大鼠随机分为4组,每组10只:假手术组(SHAM组),只翻动盲肠,不做其他处理;脓毒血症肺损伤组(模型组),盲肠结扎穿孔诱发急性肺损伤(ALI)模型;盲肠结扎穿孔+复方清下汤组(造模后立即灌胃给药,造模后8 h再次灌胃1次,剂量:10 ml/kg);盲肠结扎穿孔+头孢哌酮舒巴坦组(抗生素舒普深)(造模后立即静脉注射1次,造模后8 h再次静脉注射1次,剂量:0.2 g/kg),造模24 h后收集标本。分别观察大鼠的一般状态,留取下腔静脉血清进行白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)的测定。镜下观察肺组织病理形态学改变,测量肺湿/干比值的变化。结果与SHAM组比较,模型组IL-1、IL-6水平明显升高(P0.01),肺间质和肺泡内水肿,伴大量红细胞渗出(出血)和纤维素沉积,肺泡间隔毛细血管内皮细胞高度肿胀。肺湿/干比值明显增加(P0.01),抗生素及中药处理组与模型组比较,IL-1、IL-6水平明显降低(P0.01),肺湿/干比值明显降低(P0.01),肺组织镜下表现:中药处理组及抗生素组组较模型组肺泡间隔变窄,毛细血管内皮细胞肿胀减轻,出血减轻,纤维素渗出明显减少。结论实验应用放免检测、显微镜观察以及称量肺湿/干比值等手段,进一步证实了脓毒血症大鼠肺损伤时血清中主要的炎性细胞因子IL-1、IL-6过度表达的情况,并从病理学角度,证实炎性介质的过度表达是造成脓毒症肺损伤的重要原因。经复方清下汤处理的动物模型得到相反结论,为治疗脓毒血症大鼠肺损伤提供一个可能的新的手段。     

MOTS-c通过TLR4对肠源性脓毒症的作用及其机制

目的:脓毒症是机体对感染产生的全身性炎症反应综合征,由于具体机制尚不明确,临床治疗效果不佳,死亡率一直居高不下。本实验通过研究线粒体来源多肽MOTS-c通过影响Toll样受体4在肠源性脓毒症小鼠模型中的作用及其相关机制,寻找新的临床治疗靶标,为感染性疾病的研究开拓新的思路。方法:在盲肠结扎穿孔(CLP)所致肠源性脓毒症小鼠给予MOTS-c处理后检测小肠组织中检测炎症相关因子TNF-α,IL-6,IL-1β水平,检测TLR4表达水平,并且在野生型和TLR4过表达小鼠中构建CLP模型并给予MOTS-c处理,将其与对照组进行比较,以明确TLR4在MOTS-c对脓毒症影响中的作用。结果:在MOTS-c组CLP小鼠模型中,小鼠体内促炎因子TNF-α,IL-6,IL-1β水平与对照组相比显著降低(P0.05),此外,TLR4与对照组相比表达下降,进一步在TLR4过表达小鼠CLP模型中对小鼠给予MOTS-c处理发现,MOTS-c对小鼠CLP的抗炎作用被抑制,小鼠体内促炎性因子TNF-α,IL-6,IL-1β水平与野生型小鼠比较均显著上升,差异具有统计学意义,说明过表达TLR4逆转了MOTS-c的抗炎作用,提示MOTS-c可以在肠源性脓毒症中发挥抗炎作用,并且此过程可能依赖于TLR4。结论:MOTS-c可以在脓毒症中抑制小肠上皮细胞中TLR4过度激活,最终抑制炎症,因此可能对脓毒症有治疗效果,有望用于临床治疗。     

小儿脓毒症休克相关基因的筛选及网络构建

为探究脓毒症休克与SIRS的差异表达基因及网络的构建,筛选潜在的核心基因,从GEO数据库下载相关基因表达谱GSE26378,数据分为脓毒症休克与SIRS各29个样本,通过在线软件GCBI对其进行标准化及差异基因筛选;对差异基因进行GO分析;基于KEGG进行功能通路分析以及基因信号网络分析;差异基因共表达网络分析。结果表明:两组中总共有1 456个基因被识别为差异基因(P0.05),与SIRS组相比,脓毒症休克组中有条859条下调基因,597条上调基因。GO功能富集分析显示差异基因主要参与了细胞周期、细胞免疫、细胞代谢。KEGG功能通路分析显示差异基因主要参与了MAPK信号通路、P53信号通路、wnt信号通路、细胞凋亡信号通路,细胞周期受体信号通路等。共表达分析发现基因CCNB1、NUSAP1、OIP5、SHCBP1、ZWINT、TOP2A、DLGAP5等位于网络中央部位,而基因信号网络分析发现基因PLCB1、PIK3CA、STAT3、CAMK2D、PRKCB、CREB1位于网络核心。基因芯片分析有助于发现脓毒症休克与SIRS患儿外周血单核细胞在转录组学上的改变,而生物信息学网络分析有助于发现潜在的靶点。     

大鼠脓毒症模型的凝血功能研究

目的探讨盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)所致脓毒症大鼠模型凝血功能的变化。方法采用CLP诱导SD大鼠脓毒症,术后8、16和48 h时检测相关的凝血功能指标,采用HE染色观察肺、肾、肝、脾的组织病理学变化。结果 CLP诱导的脓毒症大鼠12 d生存率为30%,发病急且死亡率较高。在疾病发展的急性期内,CLP大鼠8 h时出现APTT时间延长(P0.05),16 h时出现PT时间延长(P0.05),内源凝血途径的XII活性及外源性凝血途径的VII活性出现一过性抑制。TT在48 h出现延长(P0.01)。FIB的含量从16 h开始逐渐增多(P0.001)。与凝血和抗凝功能有关的其他重要指标中PLT数量从8 h逐渐下降(P0.01);v WF:Ag量从8 h逐渐增多(P0.001);D-D量从16 h逐渐升高(P0.05);PS:Ag量直到48 h出现明显下降(P0.001);而AT-III含量无明显变化。病理检查发现肺、肾、肝、脾组织存在不同程度的损伤,但未显示明显的静脉血栓和出血特征。结论大鼠脓毒症模型在急性期内存在凝血功能紊乱,但未观察到凝血功能引起的组织病理变化。