小鼠睾丸注射不同转染试剂和注射方法对外源基因表达的影响

为探讨不同转染试剂(LipofectamineTM LTXPLUSTM、Lipofectamine2000和纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D))和睾丸注射方法 (睾丸网注射、曲精细管注射和间质注射)对转基因小鼠生产效率的影响,将pEGFP-C1质粒分别与不同转染试剂混合后,按照不同的注射方法注入小鼠睾丸内,30 d后检测小鼠精子密度、活力、精子阳性率以及配种后仔鼠转基因阳性率。结果 3种转染试剂对小鼠繁殖性能影响由小到大依次为LipofectamineTM LTXPLUSTM、Lipofectamine 2000和PAMAM-D。转染后LipofectamineTM LTXPLUSTM、Lipofectamine 2000和PAMAM-D组精子的GFP阳性率分别为35.65%±0.69%、12.86%±0.35%和10.04%±0.20%。配种后仔鼠的PCR阳性率分别为29.17%、13.70%和5.88%。3种不同注射方法对小鼠睾丸都造成损伤,由小到大依次为睾丸网注射、曲精细管注射和睾丸间质注射,三者的阳性精子比例分别为35.13%±1.727%、15.13%±1.457%和0%,配种后仔鼠的PCR阳性率分别为33.3%、12.5%和0%。结果表明,LipofectamineTM LTXPLUSTM和睾丸网注射对小鼠睾丸的损伤最小,并能获得较高的转染效率。     

广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒冻干粉的鉴别及质量控制的研究 V．广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸分析

本文采用日立８３５－５０型氨基酸自动分析仪测定了广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸成分,结果表明两种蛇毒的氨基酸组成基本相同,但多种氨基酸的含量存在明显差异,为蛇毒鉴别和质控提供实验依据。     

不同活化方法对小鼠卵母细胞孤雌发育的影响(简报)

随着动物克隆技术的不断发展,核移植胚胎的活化成为一个很重要的研究领域,活化的效率直接影响到克隆的成功率。小鼠体细胞克隆研究大多采用卵胞质直接注射供体细胞核的方法构建重构胚,再经SrCl_2活化处理进行体外发育。也有经电融合,SrCl_2活化产仔的报道。已有研究表明单独SrCl_2处理或电刺激均能很好地活化小鼠卵母细胞,那么在小鼠核移植过程中采用的电融合条件是否能激活卵母细胞,电脉冲刺激后再经SrCl_2处理是否能     

致死中量(LD_(50))等的简易图解法

我们在毒力测定中间,常用致死中量来比较两种药剂的相对毒力。目前求致死中量的方法,主要根据Bliss或Finney两人的机值分析法。用这方法需要计算的内容有:(1)致死中量;(2)卡方测定;(3)致死中量的置信界限(confidence limits);(4)毒力回归线;(5)比较两种药剂的致死中量相差是否显著;(6)比较两种药剂的毒力回归线是否平行等。用机值分析方法来演算这许多内容,要耗费很多的时间;这样使做药效测定的同志感觉到苦恼。最近虽然有人用其他方法,如Logistic函数法,流动平均(moving-average)法,流动平均-角换法(moving average-angle method)来演算致死中量,但至今还没有普遍应用。1949年Litchfield及Wilcoxon,根据机值分析方法的原理,用图解方法来求致死中量,这样省去了很多的繁复计算方法,化半小时的时间就可以全部计算出。这个方法虽精确度稍差一些,但一般讲还是合乎科学研究的要求,最近Reynolds(1962)介绍农业害虫抗性     

中华眼镜蛇蛇毒因子(CVF)对补体系统的作用及与人补作C_3和其他蛇毒抗原性关系

中华眼镜蛇蛇毒经DEAE-Sepharose CL-6B。HPLC等多次柱层析分离出有抗补体及溶血活性的眼镜蛇蛇毒因子(Cobra venom factor,CVF),纯化后的CVF在聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈单一区带,分子量为225000—230000,等电点为6.20。用二硫苏糖醇还原经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得三类亚基,其分子量总和为237,000。 体外抗补体及溶血试验表明,CVF的作用是通过补体旁路途经使总补体活力下降。双向免疫电泳鉴定,发现CVF与人血清作用后,其中补体成分C_3分子的抗原性发生改变,则表明CVF的作用是通过激活补体成分C_3而发挥的。给豚鼠腹腔注射CVF(0.15ug/g体重)后,其血清总补体水平下降到正常值的3％以下,7天后回升,13天后恢复到正常水平。 单相免疫电泳表明,CVF与人补体C_3抗血清间无任何交叉免疫反应,但人血清与CVF抗血清间有微弱的免疫沉淀反应。另外,CVF的氨基酸组成与人补体C_3也较为相似。鉴定还表明眼镜蛇科中四种蛇毒与CVF抗血清有强烈的免疫沉淀反应,蝰蛇毒及海蛇毒也有免疫沉淀反应,但只有眼镜蛇毒具有抗补体活性。     

云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒因子在灵长类动物内应用的免疫原性研究

眼镜蛇蛇毒因子（CVF）能特异性清除机体循环中的补体C3,从而可能在防治补体介导的损伤或疾病中发挥重要的治疗作用。云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒因子（Y-CVF）较文献报道的其他各种CVF具有更高的活性和较少的用药量。为探讨Y-CVF静脉使用是否诱导灵长类动物体内产生特异性中和抗体和异种天然抗体,给2只正常食蟹猴每两周静脉注射一次治疗剂量（0.05 mg/kg）的Y-CVF,共4次,检测注射前后不同时间点血清内补体C3水平、总补体活性（CH50）、抗Y-CVF抗体和抗猪内皮细胞异种抗体的变化。结果显示,前2次注射Y-CVF后均有良好的清除补体效果,第3次注射Y-CVF后补体仅被部分灭活,第4次注射Y-CVF后则基本无效。免疫印迹和酶联免疫吸附试验均证实特异性抗Y-CVF抗体产生,且其滴度随着Y-CVF注射次数增加而递增。多次注射Y-CVF后,并没有在血清内检测到明显的抗猪内皮细胞抗体的变化。因此,多次静脉注射Y-CVF能诱导灵长类动物产生特异性抗体,从而导致Y-CVF失效,但未发现抗α-Gal异种天然抗体明显增加     

中华眼镜蛇蛇毒因子(CVF)对补体系统的作用及与人补体C[3]和其他蛇毒抗原性关系

中华眼镜蛇蛇毒经DEAE-Sepharose CL-6B、HPLC等多次柱层析分离出有抗补体及溶血活性的眼镜蛇蛇毒因子（Cobra venon factor,CVF)，纯化后的CVF在聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈单一区带，分子量为225000—230000，等电点为6.20。用二硫苏糖醇还原经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得三类亚基，其分子量总和为237000。体外抗补体及溶血试验表明，CVF的作用是通过补体旁路途经使总补体活力下降。双向免疫电沪鉴定，发现CVF与人血清作用后，其中补体成分C[3]分子的抗原性发生改变，则表明CVF的作用是通过激活补体成分C[3]而发挥的。给豚鼠腹腔注射CVF（0.15 μg/g体重）后，其血清总补本水平下降到正常值的3%以下，7天后回升，13天后恢复到正常水平。单相免疫电泳表明，CVF与人补体C[3]抗血清间无任何交叉免疫反应，但人血清与CVF抗血清间有微弱的免疫沉淀反应。另外，CVF的氨基酸组成与人补体C[3]也较为相似。鉴定还表明眼镜蛇科中四种蛇毒与CVF抗血清有强烈的免疫沉淀反应，蝰蛇毒及海蛇毒也有免疫沉淀反应，但只有眼镜蛇毒具有抗补体活性。     

云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒因子在灵长类动物内应用的免疫原性研究

眼镜蛇蛇毒因子(CVF)能特异性清除机体循环中的补体C3,从而可能在防治补体介导的损伤或疾病中发挥重要的治疗作用.云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒因子(Y-CVF)较文献报道的其他各种CVF具有更高的活性和较少的用药量.为探讨Y-CVF静脉使用是否诱导灵长类动物体内产生特异性中和抗体和异种天然抗体,给2只正常食蟹猴每两周静脉注射一次治疗剂量(0.05mg/kg)的Y-CVF,共4次,检测注射前后不同时间点血清内补体C3水平、总补体活性(CH50)、抗Y-CVF抗体和抗猪内皮细胞异种抗体的变化.结果显示,前2次注射Y-CVF后均有良好的清除补体效果,第3次注射Y-CVF后补体仪被部分灭活,第4次注射Y-CVF后则基本无效.免疫印迹和酶联免疫吸附试验均证实特异性抗Y-CVF抗体产生,且其滴度随着Y-CVF注射次数增加而递增.多次注射Y-CVF后,并没有在血清内榆测到明显的抗猪内皮细胞抗体的变化.因此,多次静脉注射Y-CVF能诱导灵长类动物产生特异性抗体,从而导致Y-CVF失效,但未发现抗α-Gal异种天然抗体明显增加.     

不同地区舟山种和孟加拉种眼镜蛇的神经毒素

先前的工作发现 ,眼镜蛇孟加拉种的神经毒分布存在明显的地理差异 ,但是导致这种现象的原因还不是很清楚。该工作首先采集夏季的眼镜蛇种 ,进行分类学的鉴定 ,以排除因为种属分类、季节和年龄而导致的不确定因素对蛇毒成分产生影响。再从鉴定好的成年浙江舟山种和云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒中分离获得短链神经毒素 ;同时采用RT PCR方法得到相应的基因。结果从浙江舟山种眼镜蛇蛇毒中分离到两个神经毒素 ;从云南孟加拉种蛇毒中得到三个神经毒素。这些神经毒素都是短链神经毒素。说明该两个蛇种与已经报道的台湾及浙江的舟山种眼镜蛇很相似 ,蛇毒中都以短链神经毒素为主。另外泰国孟加拉种眼镜蛇蛇毒中则以长链神经毒素为主。这种现象很难用种群发生的前后或者地理距离的长短来解释 ,而可能与地区间的气候、地理环境或者眼镜蛇的食物差别相关。实验统计表明在云南、浙江和台湾这些条件基本相似 ,而泰国就有很大的不同。     

不同注药方法对丙泊酚注射痛的影响

目的:比较不同注射部位对丙泊酚注射痛的影响.方法:选择ASA Ⅰ-Ⅱ自愿接受无痛人工流产手术患者200例,随机分为4组,(n=50).Ⅰ组手背静脉推注丙泊酚;Ⅱ组肘部静脉推注丙泊酚;Ⅲ组肘部推注20mg 2%利多卡因后即刻静脉推注丙泊酚;Ⅳ组手背推注20mg 2%利多卡因后即刻静脉推注丙泊酚.记录各组患者的疼痛分级评分.结果:Ⅱ组与Ⅳ组比较丙泊酚注射痛无差异;Ⅱ组与Ⅲ组比较丙泊酚注射痛无差异;Ⅱ组与Ⅳ组比较发生丙泊酚注射痛的程度轻.结论:选择肘部静脉静推丙泊酚且无需预推利多卡因注射痛最轻.     

不同基质对四种沉水植物生长的影响

通过模拟试验,研究了太湖五里湖主要3种基质类型(沙石、生土、湖泥)对4种沉水植物(苦草、马来眼子菜、金鱼藻、轮叶黑藻)生长的影响. 结果表明,生长于沙石、生土、湖泥上的苦草和马来眼子菜平均生物量分别为72.37、126.25、134.10 g和40.0、72.10、90.70 g,而金鱼藻和轮叶黑藻平均生物量分别为0.27、6.58、73.64 g和0.17、3.26、84.42 g,说明湖泥较适合这四种沉水植物生长. 苦草和马来眼子菜对相对贫瘠的生土有较强的适应性,而金鱼藻和轮叶黑藻不适宜在生土中生长. 生长在沙石上的4种沉水植物的生物量和株高最低,其中金鱼藻和轮叶黑藻于试验期间死亡.苦草的根系活力(TTC)低于马来眼子菜,生长在沙石、生土、湖泥中苦草的根系活力分别为0、(0.16±0.05) mg·g^-1·h^-1和(0.36±0.33) mg·g^-1·h^-1,而马来眼子菜则分别为(2.68±0.34) mg·g^-1·h^-1、(2.30±0.77) mg·g^-1·h^-1、(5.24±0.67) mg·g^-1·h^-1. 叶绿素、质膜透性和丙二醛(MDA)的测定结果进一步证明了以上结论.此外,苦草、马来眼子菜和轮叶黑藻对基质有较强的沁氧能力,其大小顺序为苦草＞马来眼子菜＞轮叶黑藻.     

四种苏丹红染料对小鼠体内血液的影响

目的探讨苏丹红对小白鼠血液和组织器官的影响。方法取小鼠连续12 d腹腔注射不同剂量苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ（0、40、80、160 mg/kg）,末次给药24 h后采集血样,用血细胞分析仪检测血常规指标,毛细血管法测定凝血时间,剖腹取主要器官称重,计算脏器系数。结果苏丹红Ⅰ和Ⅱ组血液红细胞数明显减少,而苏丹红Ⅲ和Ⅳ组不明显,苏丹红不同剂量之间比较,低剂量苏丹红Ⅰ和高剂量苏丹红Ⅱ组比苏丹红Ⅲ和Ⅳ组血液红细胞数变化明显;苏丹红Ⅰ和Ⅱ组血液血红蛋白含量明显降低,而苏丹红Ⅲ和Ⅳ组血红蛋白含量变化不明显。四种不同剂量苏丹红组小鼠血液中血小板数量减少,随着剂量增加小鼠血液凝固时间延长。随着苏丹红剂量增加,苏丹红I和II组小鼠血液白细胞数比对照组明显增加,苏丹红Ⅲ和Ⅳ组白细胞数有增加趋势但差异不显著。与对照组比较,苏丹红组小鼠血液白细胞数明显增加、而淋巴细胞和单核细胞显著减少。随着苏丹红注射剂量增加,肾脏和脾脏脏器系数较对照组明显增大,肝脏脏器系数变化不明显。结论苏丹红对小鼠血液细胞、血红蛋白、血小板和凝血时间以及组织器官都有不同程度影响。     

不同类型的蛇毒对B_(16)F_(10)黑色素瘤和软骨肉瘤的细胞毒性

本文研究各种眼镜蛇科、响尾蛇科和蝰蛇科蛇素在体外.体内对 B16F10黑色素瘤和体内对软骨肉瘤的细胞毒性。细胞毒性的测定在体外采用瘤细胞培养法:把含10~5黑色素瘤细胞的悬液1ml 置于3厘米的佩特里细菌培养皿中,每个培养皿加含6微克天然蛇毒的磷酸缓冲液(0.01M,PH7.0)10微升,培养24小时。用倒置相差显微镜连续观察瘤细胞,通过计数受损细胞(失去突起和与基质分离)的数量来决定细胞毒性的大小。体内试验通过在 C_(57)黑小鼠皮下或尾静脉注射瘤细胞与蛇毒的混悬液来进行,对照组只注射瘤细胞,2——3周后观察注射部位及肺部的肿瘤。     

眼镜蛇毒组分C对小鼠实验性肝癌细胞生长影响的探讨

ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹水型肝癌细胞与眼镜蛇毒组分Ｃ在无菌条件下混合后接种于昆明种小鼠右前肢腋下,在２５℃条件下饲养１２天。结果表明,组分Ｃ能明显抑制小鼠肝癌细胞的生长（ＩＣ５０为５９．０８μｇ／ｍｌ）,当肝癌细胞膜被人为造成损伤时,组分Ｃ对其生长的抑制作用则显著增强（ＩＣ５０为６．７２μｇ／ｍｌ）。此外,组分Ｃ能显著延长荷瘤小鼠的生存时间。对体外培养的小鼠肝癌细胞,组分Ｃ也具有很强的杀伤作用,且这种杀伤作用受组分Ｃ的浓度、组分Ｃ与肝癌细胞孵育的时间及孵育的温度的影响。病理组织检查发现,给组分Ｃ后,镜下可见肝癌细胞生长受到明显抑制,肝癌细胞未向皮肤及附件浸润。表明组分Ｃ对肝癌细胞生长具有较强的抑制作用     

四种小鼠便秘模型建立方法的比较

目的i初步探讨四种小鼠便秘模型建模方法的效果。方法：40只小鼠随机分为正常对照组（8只）和实验组（32只）,实验组分别采用经口灌胃止泻剂复方地芬诺酯、禁水不禁食、经口灌胃胃粘膜保护剂硫糖铝及经口灌胃冰水四种方法建立小鼠便秘模型,处理后观察四种不同方法建立的小鼠便秘模型首粒黑便排便时间、2小时内排便粒数及排便重量的差异。结果：与正常对照组比较,灌胃复方地芬诺酯、禁水不禁食、硫糖铝及冰水法四种造模方法均可使小鼠首粒黑便排便时间显著延长、2小时内排便粒数及排便重量显著减少（P〈0．05）。但采用复方地芬诺酯、禁水不禁食法处理的小鼠较经口灌胃硫糖铝及经口灌胃冰水诱导的小鼠首粒黑便排便时间显著延长、2小时内排便粒数及排便重量亦显著减少（P〈0．01）。结论：采用复方地芬诺酯、禁水不禁食方法建立小鼠便秘模型更加简单、有效。     

四种重金属对中国鲎(Tachypleus tridentatus)胚胎发育的影响

分析了不同离子浓度的Zn、Pb、Cu、Cd对中国鲎胚胎发育的影响.结果表明①4种金属离子浓度≤渔业水域水质标准浓度4倍时,对中国鲎胚胎发育无明显毒性效应;≥渔业水域水质标准浓度8倍时,Cd离子和Cu离子对中国鲎胚胎发育无明显影响,而Zn离子组Pb离子组胚体发育随离子浓度提高而卵径变小,发育速度下降;②浓度为1.6mg/L时,Zn和Pb离子组胚胎致畸率分别为44%和58%,Pb离子组胚体孵化率仅2.67%;③4种重金属对中国鲎胚胎发育的毒性效应表现为Pb＞Zn＞Cu=Cd;④中国鲎胚胎对重金属有蓄积作用,蓄积效应随金属种类不同而异.     

丙二醛(MDA)对小鼠游泳能力的影响

MDA是脂质过氧化的重要中间产物之一,常用于表征氧化紧张.采用昆明小鼠(KMMice)研究MDA对整体动物的应激反应,考察一次性给药后小鼠的体重变化和游泳能力,结果发现:给药后10min,注射生理盐水(0.85%)能增加小鼠的体重,注射MDA(200mmol/L,0.01mL/g体重)能提高小鼠的游泳能力,二者均达到显著水平(P<0.05).这一结果对于了解氧应激疲劳和解释相关的体力恢复生化机制,具有一定的临床指导意义.     

四种不同方法提取沙枣花挥发物的成分分析

为了探究不同提取方法对沙枣花挥发物化学成分分析的影响,本文采用水蒸气蒸馏法、固相微萃取法、顶空采集法和气囊采集法提取沙枣(Elaeagnus angustifolia)花的挥发性物质,并利用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分别对4种方法提取的挥发物质进行化学成分分析鉴定。从4种方法提取的沙枣花挥发物质中共检测出51种化合物,其中酯类14种、烷类13种、酚类9种、酮类3种、醇类4种、其它物质8种。顶空收集法、水蒸气提取法、气囊采集法和固相微萃取法提取的挥发物质中分别检出化合物13种、19种、22种和18种,并且用2种(或2种以上)方法提取的沙枣花挥发物质中相同化合物有15种(即:酯类6种、烷类5种、酚类2种、醇类1种、其它物质1种),分别为:反式-肉桂酸乙酯、顺式-肉桂酸乙酯、反式-肉桂酸甲酯、邻苯二甲酸二甲酯、正癸烷、正十二烷、正十四烷、正十六烷、正二十烷、愈创木酚、4,4'-亚甲基双(2,6-二叔丁基苯酚)、2-苯基-1-丙烯、乙酸叶醇酯、肉桂酸异丙酯和苯乙醇。4种方法提取的沙枣花挥发物中均含反式-肉桂酸乙酯和邻苯二甲酸二甲酯2种化合物,且反式-肉桂酸乙酯的含量较高,分别为83.75%(水蒸气蒸馏法)、14.45%(固相微萃取法)、78.27%(顶空收集法)和56.65%(气囊采集法)。4种方法中气囊采集法提取的沙枣花挥发物质中所含化合物种类最多(22种),而且操作最简单,因此气囊采集法是提取沙枣花挥发物的较好方法。     

四种圆斑蝰蛇蛇毒对血小板聚集抑制作用的比较研究

对四种不同来源的RVV对ADP、Col和Ris诱导的血小板聚集抑制作用进行比较研究。RVV-B,RVVS和RVV-Styp对三种诱导剂的血小板聚集均有抑制作用,而RVV-T虽有ADP和Col抑制作用,但缺乏对Ris的抑制活性。预先与RVV孵育的血小板经洗涤后重新悬浮于自身PPP中,与RVV-StyP孵育的血小板完全恢复对Ris的凝集反应,而与RVV-B和RVV-S孵育的血小板仅部分恢复其反应。上述结果表明,在RVV中可能含有二种不同的血小板聚集抑制活性,而其抑制机理可能牵涉到血小板、血浆等因素。     

蛇毒对凝血系统的影响

人体止血系统是由多种成分参与调节的复杂的生理反应,蛇毒中的许多成分包括蛋白质、多肽等通过作用于此系统的不同环节而起抑制或激活作用［１］。本文主要介绍蛇毒对凝血系统的影响。１蛇毒组分的促凝机制蛇毒尤其是ｖｉｐｅｒ和ｐｉｔｖｉｐｅｒ蛇毒中,含有许多可影响...