应用r－GT酶活性评价PA－MSHA菌苗抗瘤疗效研究

应用ｒ－ＧＴ酶活性评价ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗抗瘤疗效研究大连医科大学大连１１６０２３于丽华,于芒以往的研究表明,肿瘤组织中和血清中ｒ－ＧＴ酶活性与肿瘤发展进程有关,即ｒ－ＧＴ活性上升与肿瘤的进展和死亡有关。ｒ－ＧＴ活性下降表明治疗效果良好,据此,本研究以...     

乳酸脱氢酶C4的精子免疫荧光定位特性

用１４个抗小鼠ＬＤＨ－Ｃ４的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的ＬＤＨ－Ｃ４进行了间接免疫荧光定位。结果显示：不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置，其中ＰＡ１（Ｋ０２１）在尾部，ＰＡ２（Ｋ０２２）、ＰＡ４和ＰＡ５（Ｋ０２３）在中段和尾部，ＳＭ１、ＳＭ２和ＰＧ２的中段，ＳＭ３和ＳＭ４在顶体，ＳＭ５在顶体和赤道板。人和树鼯精子表面的ＬＤＨ－Ｃ４也呈现类似的情况。这些研究表明精子表面的ＬＤＨ－Ｃ４呈现     

hBMP－2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达

研究了骨形态发生蛋白ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ在ＣＯＳ细胞和小鼠肌肉中的表达的情况,从ｐＳＰＳ６５ＢＭＰ－２质粒中回收ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ,删除５＇端的非翻译序列,插入ｐＳＶＬ载体中,构建了含有ＢＭＰ－２全长编码序列的重组表达质粒ｐＳＶＬＢＭＰ－２。将表达质粒导入ＣＯＳ－７细胞中,细胞ＲＮＡ点杂交结果表明,转染ＢＭＰ－２基因的细胞内ＢＭＰ－２的ｍＲＮＡ水平明显升高;细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ显示,转染ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ后,细胞分泌产生的ＢＭＰ－２显著增加。小鼠实验发现,在肌肉内用注射法导入ＢＭＰ－２重组质粒后,局部组织内ＢＭＰ－２的ｍＲＮＡ转录水平也明显提高。     

hBMP—2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达

研究了骨形态发生蛋白ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ在ＣＯＳ细胞和小鼠肌肉中的表达的情况,从ｐＳＰＳ６５ＢＭＰ－２质粒中回收ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ,删除５端的非翻译序列,插入ｐＳＶＬ载体中,构建了含有ＢＭＰ－２全长编码序列的重组表达质粒ｐＳＶＬＢＭＰ－２将表达质粒导入ＣＯＳ－７细胞中,细胞ＲＮＡ点杂交结果表明,转染ＢＭＰ－２基因的细胞内ＢＭＰ－２的ｍＲＮＡ水平明显升高,细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ显示,转染ＢＭＰ－２ｃ     

α-黑色素细胞刺激素对白细胞介素-1β发热的解热机理研究

本研究观察了α－黑色素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）对家兔白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）发热效应及下丘脑组织腺苷环－磷酸（ｃＡＭＰ）含量的影响;同时观察了下丘本外培养过程中,α－ＭＳＨ对ＩＬ－１β刺激下丘脑释放ｃＡＭＰ的影响。结果显示：α－ＭＳＨ能显著降低ＩＬ－１β引起的体温升高（Ｐ〈０．０５）;同时抑制下丘脑组织ｃＡＭＰ含量的增高（Ｐ〈０．０１）。ＩＬ－１β与下丘脑组织培养,其上清液的ｃＡＭＰ含量明显     

志贺氏Ⅰ型痢疾杆菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗 …

从志贺氏１型痢疾村菌ＬＰＳ中分离纯化出料捩的,以ＡＤＨ为连接剂将其与ＴＴ结合形成Ｏ－ＳＰ－ＴＴ结合疫苗,并用此结合疫苗免疫ＮＩＨ小鼠,结果显示使用Ｏ－ＳＰ免疫后,小鼠血清中没有抗ＬＰＳ抗体产生,而用Ｌ－ＳＰ－ＴＴ免疫后鼠血清中生了抗ＬＰＳＩｇＧ和ＩｇＭ抗体,且ＩｇＧ抗体水平高于ＩｇＭ抗体;Ｏ－ＳＰ－ＴＴ免疫组等二次和第三次免疫后ＩｇＧ我有显著的升高（Ｐ〈０．０１）,但第二次和第三次免疫后血清ＩｇＭ     

用单克隆抗体作芜菁花叶病毒不同分离物外壳蛋白抗原结构的比较研究

用芜菁花叶病毒辽宁分离物（ＴｕＭＶ－ＬＮ）,山东分离物（ＴｕＭＶ－ＳＤ）和榨菜分离物（ＴｕＭＶ－ＺＣ）作抗原,分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经脾细胞与ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４骨髓细胞融合,共获得７个单克隆抗体分泌细胞株,为研究３个分离物的抗原差异,用胰蛋白酶消化ＴｕＭＶ的外壳蛋白（ＣＰ）。分别形成４、２和１条降解带,经ＳＤＳ－１５％ＰＡＧＥ后,转移至硝酸纤维薄膜上,用３个分离物的抗血清和７种单隆抗体分别做     

补体激活第三途径——凝集素途径

ＭＢＬ与Ｃ１ｑ,ＭＡＳＰ－１和ＭＡＳＰ－２与Ｃｌｒ与Ｃｌｓ具有同源结构和功能,ＭＢＬ与ＭＡＳＰ－１,ＭＡＳＰ－２组成类似Ｃ１的复合物,ＭＢＬ识别相应糖结构后,ＭＡＳＰ－１和ＭＡＳＰ－２相继激活,裂解Ｃ４和Ｃ２生成Ｃ３转化酶Ｃ４ｂ２ｂ,活化ＭＡＳＰ－１还直接裂解Ｃ３由此形成补体激活第三途径即凝集素途径,作为第一线天然免疫防御系统,该途径在种系进化,个体发育及病原体感染的早期均具有十分重要的生物学意义     

显微注射法制备转基因小鼠模型的研究

将外源基因ＭＴ０ＬＭＰ,ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（Ｘ１）－ＬＭＰ及ＨＬＡ－ＤＲα分别注入昆明小鼠受精卵雄原核中,结果得到有这三种外源基因整合的三个转基因小鼠系,导入基因的整合率分别为８％,８０％骸６６．７％,它们的子一代及子二代（Ｆ２）基因中也均有外源基因整合,并且导入ｐＺｉｐ－ＮｅｏＳＶ９Ｘ１）－ＬＭＰ基因后经反转录聚合酶链反应,检测ｍＲＮＡ发现有该基因的表达,说明本法制备转基因小鼠是可行的。应用荧光     

ET—1,NO和缺氧对肺动脉平滑肌细胞钙内流及胶原合成的影响

肺血管平滑肌细胞是肺血管收缩反应的主要执行者,也是肺血管结构重建的重要参与者。本研究观察了内皮素－１（ＥＴ－１）一氧化氮（ＮＯ）和缺氧对培养的新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）钙内流以及胶原合成的影响,结果表明ＥＴ－１和缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的钙内流;ＮＯ供应剂硝普钠（ＳＭＰ）可抑制ＥＴ－１诱导的钙内流,其作用呈剂量依赖性,ＳＮＰ还可以剂量依赖地抑制了ＰＡＳＭＣ的胶原合成,而缺氧可促进ＰＡＳＭＣ     

骤冷与饥饿对小鼠肝脏影响的实验研究

为探讨饥饿及饥饿与骤冷对动物肝脏的影响,本实验用健康昆明种小鼠２５只,随机分成正常组５只,饥饿组１０只,饥饿后再予冷刺激组１０只（下称骤冷组）。采用组织化学及酶组织化学方法观察糖原（ＰＡＳ反应）、ＳＤＨ（琥珀酸脱氢酶）,ＬＤＨ（乳酸脱氢酶）,ＣｈＥ（胆碱酯酶）、Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ（镁激活三磷酸腺苷酶）,ＡＣＰ（酸性磷酸酶）。结果提示：饥饿时肝脏ＰＡＳ反应,ＳＤＨ,Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ、ＣｈＥ活性显著下降,而ＡＣＰ活性明显增强;饥饿后骤冷时ＰＡＳ（反应）、ＳＤＨ、ＣｈＥ更显著下降,而ＡＣＰ及Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性反而增强。     

三种钠尿肽抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖效应的比较

本文比较了心房钠尿肽（ＡＮＰ）、Ｃ－型钠尿肽（ＣＮＰ）、血管钠肽（ＶＮＰ）抑制肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ）增殖的效应。用蛋白激酶Ｃ激动剂佛波酯（ＰＭＡ）刺激体外培养大鼠ＰＡＳＭＣｓ的增殖,以总蛋白含量和ＭＴＴ比色ＯＤ值为指标,观察三种钠尿肽对ＰＭＡ刺激大鼠ＰＡＳＭＣｓ增殖的影响。结果表明,ＰＭＡ（１０＾－９－１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ）显著升高（Ｐ＜０．０５）ＰＡＳＭＣｓ的总蛋白含量和ＭＴＴＯＤ值,     

缺氧促进热休克蛋白70在肺动脉平滑肌细胞中的表达

缺氧性肺动脉高压中肺动脉结构重组,中膜平滑肌细胞增殖并迁移,但机制不明。本研究观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）细胞周期、ＤＮＡ合成及细胞增殖的影响,并通过观察缺氧对ＰＡＳＭＣ热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）表达的影响,初步探讨缺氧的作用是如何介导的。结果表明缺氧可直接或协同内皮质－１促进ＰＡＳＭＣ ＤＮＡ合成及细胞增殖,并可增加ＨＳＰ７０在ＰＡＳＭＣ中的表达。     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互影响

血管内皮细胞和血管平滑细胞在结构和功能上关系密切,两者的相互在与血管舒缩笔血和壁结构。本文观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣｓ）和肺动平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣＳ）缺氧时在细胞增殖方面的相互影响。ＰＡＳＭＣＳ常氧条件培养基（ＣＭ）可使ＰＡＥＣＳ的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入降低约５８％,缺氧ＣＭ对ＰＡＥＣＳ的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入无明显的抑制作用;ＰＡＥＣＳ的常氧ＣＭ使ＰＡＳＭＳ的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入升高约６０     

PAF对肺内小动脉平滑肌细胞TXA_2，PGI_2乃Ca~（2＋）－ATPase的影响

本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ），观察了外源性血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）、ＢＮ５２０２１（ＰＡＦ受体拮抗剂）、吲哚美辛、维拉帕米对ＰＡＳＭＣｓ产生血栓素Ａ_２（ＴｘＡ_２）、前列环素（ＰＧＩ_２）及对细胞膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的影响。结果表明：（１）基础状态下ＰＡＳＭＣｓ存在花生四烯酸（ＡＡ）代谢。（２）外源性ＰＡＦ通过受体后途径激活环加氧酶促进ＡＡ代谢致ＴＸＡ_２及ＰＧＩ－２增加，ＴＸＡ_２／ＰＧＩ_２比值无明显变化。（３）外源性ＰＡＦ能直接抑制Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力。（４）维拉帕米可逆转ＰＡＦ抑制ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的效应。     

内皮素－1对缺氧肺动脉平滑肌细胞的增殖作用

内皮素（ＥＴ）是至今所发现的最强的内源性血管收缩肽,近年来发现ＥＴ－１能促进血管平滑肌细胞增殖。本研究表明ＥＴ－１对缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）有剂量依赖的增殖作用,缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成且增加ＥＴ－１的丝裂原作用。ＥＴ－１的丝裂原作用主要由其Ａ型受体（ＥＴＲ＿Ａ）所介导,ＥＴＲ＿Ａ的特异拮抗剂ＢＱ１２３可显著抑制缺氧以及缺氧与ＥＴ－１协同所产生的增殖作用,而且发现ＥＴＲ＿Ａ在缺氧培养的ＰＡＳＭＣ中的表达显著高于常氧对照组ＰＡＳＭＣ。本研究表明ＥＴ－１参与了缺氧性肺动脉结构重组,而缺氧可增强ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应性。     

低氧对肺动脉内皮细胞PDGF—B链释放及平滑肌细胞生长的影响

应用蛋白ｄｏｔｂｌｏｔ技术检测了低氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）和常氧内皮细胞条件培养液（ＮＥＣＣＭ）内ＰＤＧＦ相对含量,并利用［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法和流式细胞术观察了ＨＥＣＣＭ和ＮＥＣＣＭ及加入特异ＰＤＧＦ抗体对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）生长的影响。结果表明,ＨＥＣＣＭ中的ＰＤＧＦ含量明显高于ＮＥＣＣＭ;ＨＥＣＣＭ能明显增强ＰＡＳＭＣ内ＤＮＡ合成,促进ＰＡＳＭＣ从Ｇｏ／Ｇ１期进入Ｓ期;当预先加入ＰＤＧＦ－Ｂ链抗体时,则会明显地抑制ＨＥＣＣＭ对ＰＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成,阻止ＰＡＳＭＣ从Ｇｏ／Ｇ１期进入Ｓ期。结果提示,低氧时ＰＡＳＭＣ增殖与肺动脉内皮细胞分泌释放ＰＤＧＦ增加有关     

脂多糖增加小鼠巨噬细胞多磷酸肌醇脂代谢转换

多磷酸肌醇脂（这里指ＰＩＰ和ＰＩＰ２）的代谢在细胞信息传递和膜运转中起着重要的作用．脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）于激活小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍφ）初期（０．５～１ｈ）和后期（１６ｈ）明显增加来自［γ－３２Ｐ］ＡＴＰ的３２Ｐ参入Ｍφ的ＰＩＰ和ＰＩＰ２,３２Ｐ参入ＰＩＰ２的显著性大于ＰＩＰ．ＬＰＳ的这种作用在其激活Ｍφ的初期不受酪氨酸蛋白激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ、蛋白激酶Ａ激动剂（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）及百日咳毒素的影响;但佛波酯（ＰＭＡ）长时间预处理的Ｍφ（其ＰＫＣ活性被耗竭）再受ＬＰＳ刺激,［３２Ｐ］ＰＩＰ２水平较ＬＰＳ刺激未受ＰＭＡ预处理的Ｍφ明显降低．结果表明,ＬＰＳ于激活Ｍφ的初期和后期更显著增加ＰＩ４Ｐ－５激酶的活性,导致ＰＩＰ２合成增加,ＰＩＰ２合成的增加可能与Ｍφ激活时不同时期所表达的功能相关．     

肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节

血管内皮细胞和血管平滑肌细胞在结构和功能上关系密切,二者的相互关系在血管舒缩和血管壁结构的调节中起重要作用。本文观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）在细胞增殖方面的相互调节作用。混合培养的ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ细胞的３Ｈ－ＴｄＲ参入明显降低（Ｐ＜０．００１,与对照组相比）。无论向培养的ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ中分别加入ＰＡＳＭ和ＰＡＥＣ的条件培养基还是二者共培养时,均发现ＰＡＥＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入明显降低,而ＰＡＳＭ的３Ｈ－ＴｄＲ明显升高（Ｐ＜０．０５,与对照组相比）。流式细胞测定也发现共培养时ＰＡＥＣ的Ｇ１期细胞增多,Ｇ２／Ｍ期细胞减少;而ＰＡＳＭ的Ｇ１期细胞减少,Ｇ２／Ｍ期细胞增多。共培养的ＰＡＳＭ细胞内ｃＡＭＰ增加,ｃＧＭＰ含量降低;而ＰＡＥＣ细胞的ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ含量均降低（Ｐ＜０．０１,与对照组相比）。上述结果提示,ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ相互作用可能通过第二信使而调节它们本身的增殖     

甲型副伤寒菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备 …

以脱毒后去除类脂Ａ的甲型副伤寒杆菌高分子量Ｏ－ＳＰ１和低分子量Ｏ－ＳＰ２为特异笥抗原,以破伤风类毒素（ＴＴ）为蛋白质载体,用已二酸二肼（ＡＤＨ）作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫ＮＩＨ小鼠,结果显示单独注射Ｏ＿ＳＰ１或Ｏ－ＳＰ２免疫小鼠后,均不能刺激小鼠产生抗ＬＰＳ抗体;而用Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ和Ｏ－ＳＰ２－ＴＴ结合物免疫后,小鼠血甭中均产生了特异性抗－ＬＰＳ－ＩｇＧ抗体,且Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ免疫组