影响链霉菌原生质体形成、再生的因素

本文报道生长培养基成份,菌丝生育期,溶菌温度及再生培养基成份等对庆丰链霉菌,吸水链霉菌井冈变种原生质体形成和再生的影响,结果表明: 1.生长培养基中添加适量甘氨酸,和/或蔗糖,能增加菌丝细胞壁被溶菌酶消化的敏感性。2.对数生长期菌丝比静止期菌丝原生质体的再生活性高得多。3.菌丝溶解温度庆丰链霉菌以28℃为宜,吸水链霉菌井冈变种则以32℃为最适。4.再生培养基中高渗稳定剂的浓度对原生质体再生影响很大,对吸水链霉菌井冈变种来说,再生培养基R_2YE中的蔗糖以0.3M为宜,R_3中的琥珀酸钠以0.2M为宜。文中并对甘氨酸,蔗糖的作用机理及不同链霉菌原生质体制剂中含有不同比例的渗透敏感单位(即真正原生质体)的可能原因进行了讨论。     

皮壳青霉原生质体制备及其形成方式研究

通过对溶壁酶液浓度、酶解时间、酶解温度、菌体预处理方法等因素的实验研究,获得了一种制备皮壳青霉原生质体的有效方法。最佳条件为超声法预处理(300 W,28℃,20 min)的菌体材料,采用10 mg/mL的酶解液34℃酶解作用4 h,此条件下原生质体的形成量达到4.71×106个/mL。同时对原生质体的形成释放方式进行了跟踪观察,发现了包括顶端释放、侧位释放、菌丝段端位释放和原位释放以外的另一种全新的类似酵母"出芽"的释放形式。     

灰绿拟青霉U—2原生质体形成和再生条件研究

发绿拟青霉U－2原生质体形成和再生的较为适宜的条件为：YD培养48～52h,用0．15％流基乙醇预处理0．5h,以pH650．6MKCl作为渗透压稳定剂,用1％真菌治壁酶于28℃酶解4h;在合1％琼脂的再生培养基上再生。     

斜卧青霉原生质体制备和再生的研究

研究了斜卧青霉原生质体制备和再生的条件,确定了培养方式、菌龄、渗透压稳定剂、酶的配比、酶解时间等因素对原生质体制备和再生的影响。最佳条件：菌丝体培养12h,用1％溶壁酶＋1％纤维素酶＋1％蜗牛酶的混合酶液酶解,将NaCl作为渗透压稳定剂,酶解时间为1．5h。在此条件下原生质体的形成量达到5．3×10^5个／mL,再生率为19．4％。     

酿酒酵母RasseⅫ原生质体的形成与再生

研究了菌龄、酶系统、脱壁促进剂、渗透压稳定剂对酿酒酵母ＲａｓｓｅⅦ（ＳａｃｃｈａｒｏｎｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＲａｃｅⅫ）原生质体形成与再生的影响。结果表明,对数生长早期的菌体最适于制备原生质体;酶浓度是影响原生质体产量的主要因子,其次为时间,再次是温度;而就再生率而言,温度则是决定因子,酶浓度为第二,时间则几乎不起作用;脱壁促进剂能够加速细胞壁的溶解,尤以巯基乙醇效果较好,然而也有降低再生率之弊,综合考虑原生质体形成与再生的情况,本研究中以选用２％的酶浓度３０℃下酶解１－１．５ｈ于１７％蔗糖高渗培养基上再生为获得ＲａｓｓｅⅫ原生质体形成率和再生率的最佳条件。     

姬松茸原生质体形成和再生的研究

报道了溶壁酶系统、酶浓度、不同菌龄、脱壁促进剂、渗透压稳定剂和酶解温度对姬松茸原生质体释放率及不同再生培养基、渗稳剂种类、菌丝酶解时间和单双层平板对原生质体再生的影响。结果表明 ,菌龄为3～ 5d的菌丝以 1.5 %溶壁酶、0 .5 %蜗牛酶和 0 .5 %纤维素酶组成的酶系统在 30℃以KCl为渗透压稳定剂时 ,形成率为 1.4～ 1.5ⅹ 10 7/mL酶液 ;以蔗糖为渗透压稳定剂 ,菌丝酶解 1.5～ 3h ,以SMY和MYP为再生培养基 ,姬松茸原生质体再生率为 1.1‰～ 1.3‰。     

龟裂链霉菌原生质体的形成和再生

微生物原生质体形成、再生和融合技术已 广泛用于遗传学研究和工业微生物杂交育种。 1978年,BatlzF51进行了弗氏链霉菌和灰褐链霉 菌的原生质体融合,得到了稳定的重组体;1982 年Thoms pon等^[10]通过原生质体转化,将载有 抗性及营养基因的重组DNA片段在链霉菌 中进行了克隆。近年来,我国在这方面的研究 也取得了一些进展[^{1,2]相似文献}   

冬虫夏草原生质体形成和再生的初步研究

研究冬虫夏草菌丝体的菌龄、酶种类、酶解温度、酶解时间、pH、稳渗剂和几种再生培养基对原生质体形成和再生的影响。最佳条件为 :生长 6d的菌丝体 ,组合酶 (1%蜗牛酶 +1%纤维素酶 ) ,酶解温度 36℃ ,酶解时间 2 .5h,pH6 .4 ,稳渗剂 0 .4M甘露醇溶液 ,RM3再生培养基。在此条件下原生质体的形成为 2 .0 4× 10 9个 ml,再生率为 0 .0 91%。     

几种丝状真菌原生质体的形成与再生

本文报道从黑曲霉、米曲霉、酱油曲霉、康宁木霉、拟青零等工业上有重要用途的7种丝状真菌菌丝制备原生质体,以及对这些真菌原生质再生过程中形态学变化进行观察的结果。实验表明用商品纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶配成的混合酶液,可成功地对上述丝状真菌制备出原生质体。在所有供试菌株中均观察到由原生质体直接长出菌丝,及原生质体先形成酵母状物再长出菌丝这两类再生方式。     

棒状杆菌原生质体的形成、再生以及融合的初步探讨

Corynebacterium 属中的一些种是生产氨基酸的重要菌株。它们对蛋清I容菌酶和其他几种酶均不敏感。作者用0.4—0.8u／ml青霉素G处理对数期菌令菌体,可明显增加对蛋清溶菌酶的敏感性。继而用0.5—1.0mg／ml的蛋清溶菌酶,于37℃,12—15小时保温,渗透压敏感细胞可达99％以上。在丁二酸钠高渗完全培养平皿上,原生质体再生率可达20％。C. pekinenseAS 1.563与C. crenutum 82原生质体融合率为3×10-4 每对原生质体。融合菌株不稳定呈现出不同程度的分离现象。对融合菌株发酵产物——氨基酸进行了纸层析,70％的融合株同时产生两亲株所产的氨基酸,10％菌株不产生两亲株所产的氨基酸。通过光学显微镜和电镜技术,观察了原生质体的形成、再生和原生质体聚集现象。     

不同因素对金针菇原生质体制备和再生的影响

比较了不同浓度裂解酶及组合、渗透压稳定剂、酶解时间等因素对金针菇原生质体得率的影响以及不同渗透压稳定剂、培养基、接种方法等因素对金针菇原生质体再生的影响。试验结果表明:固体培养10d的金针菇菌丝,以0.5mol/L KCl作渗透压稳定剂,加入1%纤维素酶和1%溶菌酶在25℃下酶解1.5h,分离原生质体效果最佳,原生质体产量可达27.8×105个/ml以上;以0.5mol/L KCl作渗透压稳定剂,在25℃条件下,金针菇原生质体采用直接涂布法接种在RCM培养基上培养,再生率最高为0.5%。     

无花果曲霉原生质体形成与再生条件的探讨

根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件,用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞,原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１,渗透压稳定剂为０．６ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＯ３＋４（ｐＨ５．８）中,酶解时间和酶解温度分别为３．０ｈ、３０℃．比较不同酶解时间、再生稳定剂和碳源等因素对原生质体再生的影响,可确定最佳再生条件,再生率达３０％以上．     

红色酵母原生质体形成和再生条件的研究

了不同渗透压稳定剂、酶浓度、酶解时间,温度等对红色酵母原生质体的形成与再生的影响。实验结果表明：使用对数生长期早期的细胞,蜗牛酶浓度１％,３０℃处理５０－６ｍｉｎ,山梨醇为渗透压稳定剂,有利于原生质体制备和再生。     

松茸菌丝原生质体形成与再生条件的研究

采用多因素实验正交优选法比较不同酶、渗透压稳定剂、菌丝生理状况、菌丝培养基、预处理液和酶解时间等因素对松茸原生质体形成的影响和再生培养基、明胶、酪蛋白对松茸原生质体再生的影响.以0.6MMgSO4作为渗透压稳定剂,2-硫基苏糖醇为预处理液,用2%蜗牛酶在30℃酶解6h,每克菌丝可以得到1×106个原生质体.再生最优条件0.6MMgSO4,PDY再生培养基,2.5%明胶,松茸菌丝再生率最高4.97%.     

假丝酵母原生质体形成与再生的研究

本文研究了菌龄、酶系统、脱壁促进剂、渗透压稳定剂对假丝酵母Y002 原生质体形成与再生的影响。综合考虑形成率与再生率后,选用对数生长中期的菌体于1%蜗牛酶、 35℃下作用60分钟制备原生质体,并于以17%蔗糖作渗透压稳定剂的再生培养基中再生效果为好。