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钙调素(calmodulin,CaM)在Ca2+存在下能激活多种依赖CaM的靶酶.本研究对钙调素激活乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH.EC1.1.1.27)活性进行了探讨,其激活性质为非竞争性激活,并据此设计一种简便测定CaM的方法.1材料和方法1.1动物与制剂心肌和脑组织取自新生一周雄性小牛,NAD+(上海酵母综合厂),乳酸钠(北京化工厂),DEAE-Cellulose、QAE-CelluloseA-50(上海化学试剂采购供应站),NADH、氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ)(Sigma).1.2LDH的提取参照张龙翔[1]法略修改,将牛心肌粗提取液经DE… 相似文献
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用生物素标了己了花椰菜CaM。生物素标记的CaM具有与天然CaM相似的Ca2+依赖电泳特性,可激活CaM依赖性磷酸二酯酶,能够检测出50ng的磷酸二酯酶。利用它建立了检测植物CaM结合蛋白的生物素-覆盖法(Biotin-overlay)并证实酶标亲和素可与胡萝卜愈伤组织内64kD蛋白质非特异结合,因此将此法运用于植物材料时必需设置酶标亲和素处理的对照。用生物素-覆盖法检测胡萝卜愈伤组织形成过程中的CaM结合蛋白时可检出2,4-D诱导的CaM结合蛋白。 相似文献
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小麦黄化胚芽鞘经苯基琼脂糖亲和层析提取和纯化,其细胞壁CaM在有钙和缺钙时SDS电泳呈现不同的迁移率;依赖Ca~(2 )与苯基疏水结合;在紫外吸收光谱上具有五个特征峰;对PDE的激活剂量反应曲线和从非活性状态向活性状态转变时所需的Ca~(2 )浓度均和胞内CaM相同,说明细胞壁CaM和胞内CaM具有相同的基本理化特性。采用CaM琼脂糖亲和层析,发现在小麦细胞壁中存在CaM结合蛋白,其中以分子量为40.7 kD的 CaM结合多肽为主。细胞壁CaM结合蛋白不具有过氧化物酶、ATP酶或酸性磷酸酯酶的活性。 相似文献
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生物素标记钙调素用于植物钙调素结合蛋白的检测 总被引:4,自引:0,他引:4
用生物素标记了花椰菜CaM。生物素标记的CaM具有与天然CaM相似的Ca^2+依赖电泳特性,可激活CaM依赖性磷酸二酯酶,能够检测出50ng的磷酸二酯酶。利用它建立了检测植物CaM结合蛋白的生物素-覆盖法并证实酶标亲和素可与胡萝卜愈伤组织内64kD蛋白质非特异结合,因此将此法运用于植物材料时必要设置酶标亲和素处理的对照。用生物素-覆盖法检测胡萝卜愈伤组织形态过程中的CaM结合蛋白时可检出2,4-D 相似文献
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钙调素对细胞周期的调节 总被引:1,自引:0,他引:1
RC3细胞是一种用真核表达载体1~(CaM)转染NIH 3T3细胞建成的可调钙凋素(Calmodulin,CaM)高表达细胞模型。通过分子杂交及蛋白免疫印迹方法证实在地塞米松(Dexamethasome,DXM)作用下,RC3细胞可高表达CaM。CaM的过表达使G_1期细胞减少,S期细胞增加;CaM拮抗剂三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)则使G_1期细胞增加,S期细胞减少。高表达CaM使细胞分裂指数提高,G_2期细胞减少,有丝分裂前期细胞增加,M中期细胞比例下降。而TFP处理则使分裂指数下降,G_2期细胞增加,M前期细胞减少,M中期细胞增加。实验结果表明CaM在G_1/S、G_2/M和M中期/M后期3个位点上对细胞周期进行调控;通过加速G_1至S期,G_2至M期和M中期至M后期的进程,使细胞倍增时间缩短,促进细胞增殖。本工作表明,RC3细胞作为CaM表达可调细胞模型,是研究细胞周期调控的有力工具。 相似文献
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钙调素的结构生物学研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
介绍了Apo-CaM、Ca2+-CaM以及CaM与其靶肽及拮抗剂复合体的空间结构.钙调素(calmodulin, CaM)作为细胞多功能的Ca2+受体,在细胞信号转导过程中发挥重要作用.近几年对它的空间结构有了较清楚的了解,使人们能够更明确地认识CaM的Ca2+激活及CaM与其靶酶的作用机制. 相似文献
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用发光物质N-氨基丁基N-乙基异鲁米诺(ABEI),采用碳二亚胺缩合法,成功地标记了动物及植物钙调素(CaM),标记率为[ABEI]/[CaM]≈0.8-0.9.对ABEI标记CaM的反应条件、结合物的质量和保存时间进行了观察.此标记物稳定,-20℃可保存10个月以上,适用于化学发光免疫法测定生物样品中CaM含量. 相似文献