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反胶团是表面活性剂溶解在非极性溶剂中形成的、围绕一个“水核”的纳米级聚集体。液液反胶团萃取蛋白质技术,因对目标物质选择性好、容量大和能保持其活性而得到广泛研究[1-9].在反胶团萃取蛋白质的研究中,多数作者采用单一表面活性剂AOT[2]或季胺盐[3]的反胶团体系。两种体系的共同弱点是:体系受离子强度、pH值等静电因素的影响大,直接影响萃取率,为了克服它们的不足,有人在AOT体系中加亲和试剂增强反胶团对蛋白质的亲和性[4],加磷酸类阴离子表面活性剂[5]、天然表面活性剂磷脂[6]等以增强体系的萃取性能e人在季胺盐的反胶团体系中加非离子表面活性剂作助剂提高蛋白质的萃取率[7],有人则反阴、阳和非离子表面活性剂混合形成反胶团提高某种酶的萃取容量[8],本文用中性磷氧萃取剂三烷基氧膦(TRPO)与阴离子表面活性剂琥珀二辛酯磺酸钠(AOT)混合溶解在异辛烷中形成反胶团萃取牛血红蛋白(BHb),比较AOT、TRPO及AOT三体系对牛血红蛋白(BHb)的萃取性能。 相似文献
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乳酸克鲁维酵母β-半乳糖苷酶的分离纯化及性质研究 总被引:6,自引:0,他引:6
乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)经高压破壁后的粗提液,其β-半乳糖苷酶(E.C.3.2.1.23)比活力为5.56u/mg。经硫酸铵沉淀,丙酮沉淀,PAPMA—Sepharose 4B柱层析后,乳糖酶比活力达370u/mg,纯化了66.2倍,SDS—PAGE鉴定为一条带,分子量85000Da。酶作用的最适pH在6.4—6.8之间,最适温度40℃,50℃保温15min酶活丧失90%。以邻硝基苯一β一半乳糖苷(ONPG)为底物的米氏常数为2.78mmoI/L。酶的正常水解产物半乳糖对酶活力有一定的抑制作用,核糖强烈抑制酶活力,Fe2+、Zn2+、Cu2+、Ag+、PCMB和NBS都能使酶活丧失。Mg2+、Mn2+和还原剂巯基乙醇的存在能提高酶活力。 相似文献
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嗜碱细菌环状糊精葡糖基转移酶的纯化和性质 总被引:3,自引:0,他引:3
嗜碱细菌52—2除去菌体的培养液经硫酸铵沉淀和DEAE-纤维素离子交换柱层析,得到凝胶电泳均一的环状糊精葡糖基转移酶,纯化了11.5倍,酶活力回收为5.7%。用浓度梯度PAGE测分子量为151700。酶反应最适温度为65℃,50℃以下比较稳定。酶反应最适pH为7.0,在6.0~9.0范围内稳定。Zn2+、Hg2+、Pb2+、Al3+、Cu2+、Ag+和Fe2+强烈抑制酶活力。紫外光谱在270nm和244nm处分别有最大和最小吸收。荧光光谱的最大激发波长和发射波长分别为283nm和335nm。用NBS、NEM、NAI、DEP和EDC对酶进行了化学修饰,初步推测组氨酸和色氨酸残基可能为酶活力必需基因,羧基与酶活力有一定关系。 相似文献
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巨大芽孢杆菌BP931胞外青霉素G酰化酶的产生条件 总被引:3,自引:2,他引:1
研究了巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)BP 931胞外青霉素G酰化酶的产生条件。菌在由葡萄糖0.7%,氮源1号0.5%,酵母膏1.0%和苯乙酸0.8%组成的液体培养基(灭菌前pH9.0,灭菌后pH8.0)中,28℃振荡培养44h。以6-硝基-3-苯乙酰胺基苯甲酸为底物,培养滤液酶活力为9.0IU/ml。诱导物苯乙酸于培养6h后加入,酶活力可以提高到11.0IU/ml。Ca2+、Al3+、Sn3+、Mn2+和Fe2+离子降低酶的形成;Cu+和C02+离子显著抑制菌生长,降低酶的形成;Zn2+,Cd2+和Hg2+离子完全抑制菌生长和酶形成。 相似文献
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亲和层析纯化肌质网Ca2+-ATP酶 总被引:1,自引:1,他引:0
建立了一种亲和层析纯化肌质网Ca2+-ATP酶的方法.用非离子型去污剂C12E8 溶解肌质网,再通过反应红-120琼脂糖亲和层析柱使肌质网Ca2+-ATP酶纯度从粗品中的65%提高到99%,并具有较高ATP水解活性.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,为电泳纯. 相似文献
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利用硫酸铵沉淀、羟基磷灰石柱层析、Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE-52离子交换柱层析的方法,将枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶纯化了30.75倍,同时,该酶比活达到3478056 u/mg,收率达到23.43%。利用SDS-PAGE凝胶电泳和Sephadex G-75凝胶过滤的方法测得枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶的分子量分别为38 kD和34 kD。实验发现该酶的最适pH为6.5,在pH 5~10的范围内稳定;该酶最适温度为70℃,在50℃保温4h后其活力不变,在60℃保温4 h后剩余酶活为74.2%,70℃的酶活半衰期为3h。实验还发现Hg2+对酶活力有明显抑制作用。该酶对槐豆胶和魔芋胶的Km和Vmax值分别为11.30mg/mL, 4.76mg/mL和188.68(μmol·mL-1·min-1), 114.94(μmol·mL-1·min-1)。 相似文献
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pH-比色法测定CaATPase活力 总被引:1,自引:0,他引:1
陈兰英 《生物化学与生物物理进展》1988,15(2):150-153
基于ATP被酶水解后H+生成的速度作为酶活力的指标,在560um波长和pH7.4,以酚红作指示剂,建立了pH-比色测定肌浆网CaATPase(Ca2+,Mg2+-ATPase)活力的分光光度法。方法简易,可观察反应进行的过程。SR CaATPase对底物ATP的Km=97.4μmol/L;在22—42℃间求得活化能(ECa)=20.40千卡。用本法初步观察了汉防己甲素(简称汉甲)对酶的抑制作用。 相似文献
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氧化铝为载体的固定化葡萄糖异构酶某些性质的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本文报道了以廉价的大孔氧化铝作为葡萄糖异构酶的固定化载体。该固定化酶的热稳定性是60—70℃,如高于70℃就开始失活。最适Ph和温度分别为7.2—8.0和70℃。Gu2+、Fe2+、Zn2+、Mn2+和Ba2+等金属离子对它的酶活有抑制作用,Co2+和Mg2+金属离子却有明显的激活作用。该固定化酶酶活是6000—7000μ/g。通过柱运转,它的半衰期为40天以上,转化率是葡萄糖异构为果糖理论值的80一85%。 相似文献
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以羊草幼苗为研究对象,通过调整全营养培养基(CK,0.05 mmol/L Fe2+、0.015 mmol/L Zn2+)中铁或者锌含量设置0、10倍、20倍Fe2+(Zn2+)浓度处理Fe0(Zn0)、Fe10(Zn10)、Fe20(Zn20),以及在高铁培养基中单独添加0.15 mmol/L Zn2+或同时添加10 mmol/L Ca2+、5 mmol/L Mg2+、20 mmol/L K+处理,测定培养6 d后幼苗生长指标和矿质元素含量、以及高铁(Fe20)处理下幼苗根中抗氧化指标和相关基因表达量,探究不同浓度Fe2+、Zn2+对羊草幼苗生长、矿质元素吸收积累及抗氧化指标、基因表达的影响。结果表明:(1)缺锌(Zn0)显著抑制羊草幼苗鲜重的增加和Zn元素的积累,但促进Fe、Mg元素的积累;高浓度锌(Zn10、Zn20)显著促进幼苗叶片生长和Zn元素的积累;缺铁(Fe0)显著抑制幼苗的根长、鲜重和Fe元素的积累,促进Mg、Zn元素的积累;高浓度铁(Fe10、Fe20)显著抑制羊草幼苗根叶生长、根毛发育和Ca、Zn、Mg、K元素的积累。(2)增加Zn2+和Ca2+、Mg2+、K+浓度无法恢复高铁胁迫对幼苗生长的抑制作用。(3)高浓度铁(Fe20)处理羊草幼苗48 h后,根部过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶活性和丙二醛、抗坏血酸、还原型谷胱甘肽含量显著升高;烟酰胺合成酶基因、过氧化物酶基因表达量显著下调,植物类萌发素蛋白基因表达量显著上调。研究发现,羊草幼苗生长发育和矿质元素积累对环境中Zn2+浓度变化不敏感,却受到环境中高浓度Fe2+的显著抑制,并造成严重的氧化胁迫伤害,这种伤害无法在添加Zn2+或同时添加Ca2+、Mg2+、K+的条件下恢复。 相似文献
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芽孢杆菌M_(50)产生β甘露聚糖酶的条件研究 总被引:3,自引:0,他引:3
从土壤中分离到9 株产生β甘露聚糖酶的芽孢杆菌( Bacillus sp .) 。Bacillussp . M50250m L三角瓶摇瓶培养试验,以4 % 的魔芋粉为碳源,1-0 % ( NH4)2SO4 为氮源,0-35 %Na2CO3 ,30 ~34 ℃培养60h 产酶达到高峰。酶活力为180 ~200u/m L。100L 罐发酵,在30 ~32 ℃,1∶0 .75vvm 通气量,200r/min 条件下,发酵液酶活力高达330u/m L。酶的最适反应温度和pH 分别为50 ℃和6-0 ,低于50 ℃,pH5 .0 ~7 .0 酶稳定。Fe3+ 、Al3+ 、EDTA、Hg2+ 对酶有抑制作用,而Ba2+ 、Mn2+ 对酶有激活作用。发酵粗酶液对苎麻精干麻精练,显示对精干麻的半纤维素残胶具有降解作用。 相似文献
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抑胃酶剂是福东链霉菌(Streptomyces ludongUs n.Sp.Liu)的次级代谢产物,该菌株是采用平板透明圈法筛选得到。抑胃酶剂对胃蛋白酶有强的抑制作用,其抑制活力随着抑制剂的浓度的增加而增大,ID50为0.0095μg/ml。它对胃蛋白酶呈竞争性抑制,当以酪蛋白为底物并按Dixon作图法求得的抑制常数Ki值为6.0×10-9M。 相似文献
14.
为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37 ℃下在pH8~10的缓冲液中保温1 h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75 ℃,酶活稳定的温度范围为25~55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h,75℃时为2.5h。重组酶的KmKG为7.559mmol/L,VmaxKG为0.086mmol/(L·min),KmAsp为2.031mmol/L,VmaxAsp为0.024mmol/(L·min)。Ca2+、Fe3+、Mn2+等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。 相似文献
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[目的] 为探究重金属对淡水绿藻生长的影响。[方法] 选取对水质检测具有明显指示作用的普通小球藻(Chlorella vulgaris)为实验材料,CdCl2·2H2O和CrCl3·7H2O提供重金属离子,探究不同浓度Cr3+和Cd2+在单一和复合胁迫下对藻细胞浓度、叶绿素a及相关抗氧化酶活性的影响。[结果] 随着Cr3+和Cd2+浓度不断增加,藻细胞浓度呈先增长后下降趋势;叶绿素a含量呈现先下降后升高再下降的现象,浓度为1 mg/L的单一和复合胁迫下有最大值,且毒性作用表现为Cr3+ < Cd2+ < Cr3++Cd2+;与藻细胞膜相关的丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量随着重金属离子浓度的增大而增长;重金属离子浓度低于10 mg/L时对藻细胞内抗氧化酶系统中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)表现为促进作用,而大于10 mg/L时具有抑制作用。[结论] 结果表明在单一或复合重金属胁迫下,普通小球藻会充分调动与抗逆性相关的酶来维持自身的正常生长。 相似文献
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为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37 ℃下在pH8~10的缓冲液中保温1 h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75 ℃,酶活稳定的温度范围为25~55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h,75℃时为2.5h。重组酶的KmKG为7.559mmol/L,VmaxKG为0.086mmol/(L·min),KmAsp为2.031mmol/L,VmaxAsp为0.024mmol/(L·min)。Ca2+、Fe3+、Mn2+等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。 相似文献
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P2-DNA即Phage 2型噬菌体的染色体DNA,是一条线状双股螺旋的DNA分子,分子量为2.2×107Da。有19个碱基的牯性末端.可以连接成环状[1].1970年Bertani L.E. 和 Bertani G分离纯化得到P2噬苗体并对其遗传学及理化特性进行了研究[2],发现它在DNA复制,溶源性的控制以及基因重组等方面与温和性λ菌体不同;1979年Saint R B 等和Westoo A等先后研究了P2-DNA的几种限制酶的切割图谱[3]。P2-DNA可望成为分子生物学研究的重要工具和实验材料。目前国内尚无这种材料.我们试图将少量的P2-DNA转染获得P2噬菌体,加以扩增纯化.抽提得到大量的P2-DNA。为分子克隆和限制酶的研究提供有实用价值的材料和研究工具。 相似文献
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白腐菌Phanerochaeta chrysosporium MIG. 383降解桉木时具有显著的选择性,30天内降解37.23%Klason木素,7.29%综纤维素。该菌株产胞外锰过氧化物酶,并在高碳低氧培养基中显示较高酶活。静置液体培养的优化培养条件是(L-1):10g葡萄糖,2mmol酒石酸铵,10mmol pH4.5醋酸钠缓冲液,1g吐温80,2gK2PO4,0.5g MgSO4·7H2O,0.1g CaCl2·2H2O,lmg VB1,70ml微量元素混合液:最适产酶温度是37℃。上述条件下,该菌接种后静置培养4天,产锰过氧化物酶活达1840U/L,酶作用最适温度是37℃,最适DH是3.5。 相似文献
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Mg2+对阿霉素引起心肌线粒体F1F0变化的保护 总被引:4,自引:0,他引:4
抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对心肌线粒体F1F0-复合体呈现抑制而对F1-ATPase无抑制,这表明ADM可能是通过膜脂起作用的,适当浓度Mg2+能降低ADM对复合体的抑制.经 31P-NMR和标记荧光探针NBD-PE,DPH,MC-540以及内源荧光等的测定,结果表明ADM可能首先通过诱导F1F0膜脂形成非双层脂结构,继而影响了膜脂的堆积程度和流动性,进而引起F1F0-复合体酶蛋白构象的改变,最终导致酶活力的降低.Mg2+则可能由于与ADM竞争与心磷脂的结合,而对ADM引起F1F0的变化产生保护作用. 相似文献