异源位点特异性重组系统在植物中的研究

现在对位点特异性重组系统佃ie－sPec们crecombinationsystem）研究的很多,它们都源于低等生物,由于都有独特的位点重组特异性,所以吸引了大批研究人员在真核生物中进行了广泛的研究。本文主要综述了在高等物中研究的位点特异性重组系统的来源、重组机理、重组方式、重组中存在的问题及位点特异性重组系统研究应用前景和意义等。回位点特异性重组系统位点特异性重组是指在重组酶介导下,在特异的重组位点间发生重组,导致重组位点间交互交换的一种精确。组形式。位点特异性重组始于对人噬菌体溶源化过程的研究。又噬菌体通过自身位点att…     

PCR对ES细胞定点整合重组子的鉴定

ＰＣＲ是一种对ＥＳ细胞定点整合重组子进行鉴定的有效方法。由于在定点整合重组子和非定点整合重组子中外源导入基因与基因组ＤＮＡ分子整合的方式各不相同。因此,非重组子、定点整合重组子和非定点整合重组子的基因ＤＮＡ结构也将各不相同。因此,非重组子、定点整合重组子和非定点整合重组子的基因组ＤＮＡ分子结构也将各不相同。当我们设计合适的引物,从ＰＣＲ扩增结果中即可分析、鉴别出定点整合重组子、非定点整合重组子、或     

其它药物

920166大型动物细饱分裂素的分子生物学〔英〕/M alisz。“,ski,C.…/Ady.Vet.Sei.Comp.Med一1990,35一181~213〔译自DBA,1991,20(9),91一04983〕 内容如下:选择的细胞分裂素的生物学特性,用细胞分裂素调节血细胞生成和免疫应答,以及牛和猪的重组细胞分裂素,包括(i)牛重组白细胞介素一1,(ii)牛重组白细胞介素一2,(i 11)牛重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子,(iv)牛重组干扰素甲,(v)猪重组白细胞介素一1和(vi)它们的结构特征及其基因。可利用交又杂交技术克隆编码这些细胞分裂素的cDNA,并在酵母或细菌中得以表达。在基础水平上,大量重组…     

Red重组系统用于大肠杆菌基因修饰的研究进展

Red重组作为一种新的重组系统已经被广泛用于大肠杆菌的基因敲除、基因替换。与传统的Rec重组相比,Red重组具有同源臂短,重组效率高等优点。本文分别详细介绍了Red重组系统中Exo、Beta、Gam三种蛋白质的功能,Red重组系统运用在大肠杆菌基因敲除中的三种质粒及其功能,同时概括了Red重组的技术要点及技术难点,分析了文献报道的阿拉伯糖诱导浓度和诱导时间、转化后的复苏温度及时间、引物同源臂长度对于重组率的影响,总结出了Red重组的最佳条件。     

Red重组系统用于大肠杆菌基因修饰研究进展

Red重组作为一种新的重组系统已经被广泛用于大肠杆菌的基因敲除、基因替换.与传统的Rec重组相比,Red重组具有同源臂短,重组效率高等优点.分别详细介绍了Red重组系统中Exo、Beta、Gam 3种蛋白质的功能,Red重组系统运用于大肠杆菌基因敲除的3种质粒及其功能,同时概括了Red重组的技术要点及技术难点,分析了文献报道的阿拉伯糖诱导浓度和诱导时间、转化后的复苏温度及时间、引物同源臂长度对于重组率的影响,总结出了Red重组的最佳条件.     

准备进行大田试验的重组DNA植物

公司Cib一Geigy生物技木研究公司Mosanto农业公司Mosanto农业公司北卡罗林纳州立大学弗洛里达大学Mosanto农业公司Rohm&Haas公司Poimeer Hi一Bre迁国际公司美国农业部农业研究局Calgene公司 试验内容- 重组DNA玉米/引进混霉素(hygromy-c认)抗性和任葡糖昔酸酶标记基因 通过遗传工程表达苏云金杆菌(Bt(ssp.)Kurstaki)色一内毒素蛋白质的重组DNA玉米 通过遗传工程表达苏云金杆菌(Bt(ssp.)Kurstaki)各一内毒素蛋白质的重组DNA棉花-通过遗传工程表达苏云金杆菌Kurslakl两种HDI菌株卜内毒素蛋白质的重组DNA花草重组DNA花草/引进表…     

《遗传物质重组》介绍

《遗传物质重组》(The Recombination of Genetic Material》,由K.Brooks Low编著,学术出版社1988年出版,506页。遗传重组是发生在活的生物体内遗传物质重新排列的主要机制,从最简单的细菌病毒到人都是如此。该书详细地提供了遗传重组的分子生物学,生化和进化。并概述了从真核生物到原核生物发生重组的类型。该书十二章节:一、遗传重组:简略回顾。二、囊团中的重组和基因转化。三、果蝇基因内重组的遗传分析。     

重组DNA技术在昆虫学中的应用

重组DNA技术即基因工程,亦为人们称做基因克隆或基因操作。重组DNA技术已被应用于昆虫学的基础研究和应用研究中。本文首先对重组DNA技术及基因转移技术(在昆虫学研究中与重组DNA技术配合应用的重要手段)作一简述,然后着重介绍这些技术在昆虫学研究中的应用概况。 重组DNA技术 重组DNA技术就是将DNA从细胞中分离出来,切割成片段,与载体DNA连接,形成重组DNA分子,然后导入宿主细胞,进行复制。     

重组RNA技术

重组DNA技术已成为生物工程的重要支柱。利用这一技术人们已经开始以工业的规模生产对人类有重要意义的蛋白质。但目前应用重组DNA技术还存在一些难以解决的困难:生产成本昂贵;某些产品的安全性存在一些问题;真核重组DNA分子在现有转录系统中难以表达或表达效率不够理想。然而近年来出现的重组RNA技术将会避免重组DNA技术应用上存在的问题。具有区别于重组DNA突出的特点。     

基因靶位操作的原理与策略

基因靶位操作（ｇｅｎｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）是８０年代发展起来的一项重要分子生物学技术,是通过外源ＤＮＡ与染色体ＤＮＡ间的同源重组,定点修饰、改造基因组特定位点的技术。１同源重组同源重组是基因靶位操作技术的分子生物学基础。ＤＮＡ同源重组在基因转化和遗传...     

人SNAP25基因重组腺病毒的构建与表达

利用RT-PCR法,从人胰腺组织扩增出SNAP25基因,定向克隆至pENTR-TOPO载体获得重组质粒pENTR/D-TOPO-SNAP25。经PCR及测序验证其阅读框正确。再与腺病毒载体pAD／CMV／V5一DEST 发生LR重组反应,SNAP25取代pAD／CMV／V5一DESTTM中的ccdB-CmR基因,获得重组腺病毒载体pAD／CMV／V5一DEST-SNAP25(pAD- SNAP25)。重组腺病毒载体经Pac I酶切,脂质体法转染HEK-293A细胞．以鼠抗人SNAP25单克隆抗体为一抗,做荧光及Western Blot检测,结果表明重组腺病毒pAD-SNAP25在HEK-293A细胞中包装成功。重组腺病毒pAD-SNAP25感染大鼠胰岛,结果表明在高糖浓度下,外源性SNAP25蛋白的表达促进了大鼠胰岛素分泌。     

蝎神经毒素在大肠杆菌中的非分泌非融合表达

构建一种温控型蝎神经毒素重组表达质粒以及一种IPTG诱导的非分泌非融合型重组表达质粒 ,并在大肠杆菌中进行了表达研究。     

构建重组杆状病毒的几种新方法

昆虫杆状病毒作为高效的表达载体,现已广泛地用于各种外源基因的表达.但是,用传统的方法构建重组杆状病毒,存在着重组率低,纯化难及耗时长等缺点,围绕如何快速、简便、高效地构建重组杆状病毒,近几年来人们进行了一些重大的改进,包括使病毒DNA线状化以提高重组病毒的比例;在体外进行重组;同源重组和重组病毒的纯化与筛选在酵母和大肠杆菌中一次完成;使重组病毒可以形成多角体等,从而从根本上改变了传统方法中的不足;文章着重介绍了这几种新的改进方法.     

微生物介导的恶性疟原虫PfMSP-1疫苗的研制现状

恶性疟原虫引起的恶性疟是一种严重危害人类健康的寄生虫病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一。PfMSP-1抗原是一种有效的疫苗候选分子,鼠伤寒沙门菌、卡介苗、酵母菌、根癌农杆菌、嗜热四膜菌、腺病毒、牛痘病毒和杆状病毒等微生物经过改造后均可成为有希望的疫苗载体。本文综述了重组鼠伤寒沙门菌（rSt-PfMSP-1和rSt-PfMSP-119）、重组BCG疫苗（rBCG-PfMSP-1c和rBCG-PfMSP-119）、重组酵母菌（rPp-PfMSP-1）、重组根癌农杆菌（rAt-PfMSP-142、rAt-PfMSP4/5和rAt-Pf38）、重组嗜热四膜菌（rTt-PfMSP-119）、重组腺病毒（rAd5-PfMSP-142和rChAd63-PfMSP-1）、重组牛痘病毒（rVV-PfMSP-1和rVV-PfHGFSP）以及重组杆状病毒（rBDES-PfMSP-119）的构建及其免疫机制的研制现状。     

动物线粒体DNA重组的研究进展

动物线粒体DNA作为遗传标记广泛用于从种内到高级阶元的许多生物学领域,这些应用是建立在线粒体DNA的严格母系遗传方式和不发生重组的基础上的。近年来的研究提出了一些能够证明动物mtDNA发生重组的直接和间接证据。动物mtDNA重组可能主要通过两条途径发生,一条途径是母系mtDNA与核基因组中mtDNA假基因间发生重组;另一条途径是通过父系渗漏引起的不同单倍型的双亲mtDNA间发生重组。父系渗漏是最可能的途径。如果动物界广泛存在线粒体DNA重组,将会对以mtDNA严格母系遗传为基础的许多应用领域产生重要影响。     

一种基于线性DNA片段同源重组的嗜盐古菌高效基因敲除系统

随着功能基因组学研究的深入发展,基因敲除技术日益成为基因功能研究的重要手段。嗜盐古菌Haloferax volcanii易于培养,是研究古菌基因功能的良好模式菌株。虽然现已开发了多种嗜盐古菌的遗传操作系统,但基因敲除成功率不十分理想。这些遗传操作方法基于pyrE筛选标记,利用携带同源片段的环状质粒与基因组同源片段间的两次同源重组,敲除目的基因。由于基于环状质粒和pyrE筛选标记的经典同源重组敲除方法在二次重组时,普遍存在回复到野生型菌株的可能,导致二次重组子中敲除目的基因的阳性菌株比例较低。为了克服传统同源重组技术的上述缺陷,文章建立了基于线性DNA片段的同源重组技术。该方法通过一次重组在目标基因的下游引入一段上游同源片段和pyrE标记,从而限定二次重组的发生部位只能在两段上游同源片段之间,发生二次重组的重组子理论上都敲除了目标基因。利用该方法,文章成功敲除了嗜盐古菌Haloferax volcanii的xpd2基因,阳性克隆率达65%。这种线性DNA片段重组法为嗜盐古菌的基因敲除提供了一种高效策略,便于嗜盐古菌的基因改造。     

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的药效学研究

比较研究聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)与重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)升高环磷酰胺所致外周血白细胞降低的Blab/c小鼠的白细胞效果.结果显示一次注射聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子与多次注射重组人粒细胞集落刺激因子的药效作用相当,且各剂量间呈良好的量效关系.     

《生物工程讲座》(Ⅲ) ——基因工程的理论及应用(二)重组DNA技术和基因工程

DNA双螺旋模型的提出意味着分子生物学的诞生,重组DNA技术的建立标志着遗传工程和生物工程的问世。可以说重组DNA技术对整个生物学研究的影响比起DNA双螺旋来说有过之而无不及。目前世界上从事生物学或医学研究的大多数实验室都在使用这项技术解决不同的生物学问题。许多人衡量一个生物学实验室是否先进总喜欢把是否运用重组DNA技术和基因工程作为一个重要标志。一、重组DNA技术和基因工程概况重组DNA技术和基因工程涉及的内容很广,不仅包括外源DNA和载体的重组,还应     

冠状病毒的基因重组

冠状病毒的基因组约有高达25％的重组频率。已经证明在病毒基因组之间以及缺损性干扰（DI）RNA与病毒RNA之间可以发生重组,这为病毒RNA及DI RNA提供了一种进化的工具,并可用来解释冠状病毒基因组的多样性,冠状病毒能进行重组的特性可能与其mRNA的转录机制有关,其RNA的合成是不连续的,产生了病毒聚合酶的非持续性,重组还被用作病毒基因组RNA突变的一种工具。     

群居性啮齿动物集群重组率的估算

提出了一种定量估算群居性啮齿动物的集群重组率的方法。此法以特定时期集群中动物个体之间的异源概率（即来源于不同家族的概率）作为衡量群居性啮齿动物的“混合”程度（即重组率）的定量指标,并与平均重组率（即重组期望）进行比较,进而判断动物在集群过程中的选择倾向。按照这种方法估算了内蒙古典型草原区布氏田鼠越冬集群的重组率。结果表明,该鼠的越冬集群重组率很低,仅在0.1左右,集群个体多数来源于相同的家族。此外,该鼠的集群重组率远低于其重组期望值,表明该鼠在秋季集群中,有强烈的选择同源个体的倾向。