入参培养细胞多糖研究

多糖是一切生命机体必不可少的成分,具有多种生物功能,特别是由于其与生物体免疫系统调节有关,故对多糖韵研究日益受到重视。对我国中医扶正固本的首选药物人参中的人参多糖研究已有诸多报道,一致认为人参多糖有较强的药理活性。如刺激免疫功能,治疗肝炎、降低转氨酶、抗肿瘤等,并且已有从人参中提取粗多糖并经纯化精制而成的人参多糖产品,如人参多糖注射液已在临床上使用。但对人参培养细胞中的人参多糖的研究报道甚少。近年来,中国药科大学植物组织培养研究室在进行人参细胞大量培养研究时,除进行人参皂甙的提取、分     

西洋参冠瘿组织悬浮培养及其人参皂苷类成分的分离

对西洋参冠瘿组织悬浮培养生长特征进行了考察,并对其悬浮培养物中的人参皂苷类成分进行了提取、分离和鉴定。研究得到了培养物最大生物量收获时间［18.62 g/L(dry weight)］及其中最高人参皂苷累积时间（620.4 mg/L on the 27thday）。培养基中碳源、磷、氨基氮、硝基氮的利用率分别为91.8%, 100%, 81% 和97%。利用现代分离纯化方法从培养物中分离得到了4种人参皂苷类成分,利用理化及谱学技术分别鉴定为假人参皂苷F11（pseudoginsenoside F₁₁,Ⅰ）, 人参皂苷Rd（ginsenoside Rd,Ⅱ）, 人参皂苷Rb1（ginsenoside Rb1 ,Ⅲ）和人参皂苷Rb3（ginsenoside Rb3,Ⅳ）。     

人工栽培猴头菌多糖提取工艺及抑菌作用研究

研究人工栽培猴头菌多糖最佳提取工艺和抑菌作用。采用正交试验法研究人工栽培猴头菌多糖的提取工艺,经透析、除蛋白、真空干燥后,采用DEAE-52阴离子交换纤维素进行分离纯化,Nacl分段梯度洗脱得到纯化的人工栽培猴头菌多糖0.2M组分,采用滤纸片扩散法研究人工栽培猴头菌多糖的抑菌作用、pH值对抑菌作用的影响和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:人工栽培猴头菌多糖的最佳提取工艺为浸提温度60℃、提取时间4 h、料液比1∶25,人工栽培猴头菌多糖对大肠杆菌有一定的抑制作用,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌几乎没有抑菌作用。     

人参和三七皂甙提取分离的一个简易生产工艺

人参(Panax ginseng C.A.Meyer)和三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)均富含具有生理活性的多种皂甙成分。由于皂甙的提取和分离技术繁复不适于大量制备,我们研究采用吸附树脂层析法进行皂甙的提取和分离。实验表明,这一简易、快速而经济的新工艺流程用于皂甙的提取和精制克服了一般经典方法(如正丁醇萃取法、沉淀法等)需要化学试剂种类多、耗量大、成本高、操作复杂等缺点,且皂甙得率高、质量稳定。吸附树脂层析法也可用于人参和三七皂甙的分组分离和主要皂甙单体的制备。我们将这一方法用于其他植物甙类成分的提取和分离也取得了一定的成功。兹简介如下:     

中国人参花化学成分研究

目的:对人参(Panax ginseng C.A.Mey.)花蕾的化学成分进行研究。方法:采用多种柱色谱技术进行分离纯化,并通过波谱分析方法鉴定化合物的结构。结果:分离鉴定了9个化合物,分别鉴定为咖啡碱(1)、胡萝卜苷(2)、豆甾醇3-O-葡萄糖苷(3)、α-菠甾醇(4)、7-豆甾烯-3β-醇(5)、人参皂苷Rk3(6)、人参皂苷Re(7)、人参皂苷Rg2(8)、谷甾醇(9)结论:其中化合物1为五加科植物中首次分离得到,化合物3、4、5为人参花中首次分离得到。     

响应面法优化白及多糖的提取和醇沉工艺

白及多糖的生物活性近来引起了人们的高度关注,本研究旨在对白及多糖的水提醇沉工艺进行系统的优化,为白及多糖的深入研究提供理论基础。在单因素试验的基础上,本实验采用基于BBD (Box-Benhnken Design)的响应面法,分别对回流提取工艺和醇沉工艺进行优化。对回流提取工艺的优化以回流提取率为评价指标,得到最优回流提取工艺为提取时间3 h,提取温度100℃,料液比例为1:34 (g:mL);对醇沉工艺的优化以醇沉分离率为评价指标,得到最优醇沉工艺为:乙醇浓度85%,醇胶比例8:1 (g:g),醇沉时间6 h;在此条件下,提取率达到26.44%。     

毛尖茶叶多糖及其结合物的抗氧化活性研究

本研究对毛尖茶叶多糖及其结合物的抗氧化和清除自由基活性开展了研究。采用水提醇沉法提取毛尖茶叶多糖,经除蛋白和纯化后得到精制多糖(MP),将MP在三氟乙酸条件下水解完全,经C18柱层析分离后得到水洗脱部分(MP-HCW)和甲醇洗脱部分(MP-HCM),利用DPPH法和普鲁士蓝法测定MP、MP-HCM和MPHCW的清除自由基和抗氧化能力。结果显示MP、MP-HCM和MP-HCW的DPPH自由基清除率分别为28.99%、13.1%、23.2%;还原力指数分别为0.044、0.015、0.029。实验证明毛尖茶叶多糖及其结合物均有较强药理作用,具有清除自由基和抗氧化活性。     

灰树花子实体多糖D-组分的提取、硫酸化及免疫测定

从灰树花(Maitake)子实体中提取分离得到子实体多糖D组分,并分别考察了提取中的几个关键因素对D组分得率的影响,包括加水倍数、浸提时间、醇沉浓度、浓缩倍数。然后,对D组分进行了硫酸化修饰,得到了两种不同取代度的硫酸化多糖。最后,研究了灰树花多糖D组分及硫酸化灰树花多糖D组分对小鼠的免疫器官重量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素形成及淋巴细胞转化率的影响。结果表明,在10mgkg剂量下,灰树花多糖D组分及硫酸化灰树花多糖D组分具有免疫增强作用,并且在合适的取代度下硫酸化灰树花多糖D组分比灰树花多糖D组分表现了更强的免疫调节作用。     

天然植物多糖分离纯化技术研究现状和进展

植物多糖因具有抗肿瘤、增强免疫、抗氧化等功效而备受关注,多糖的分离纯化是多糖结构和生物活性研究的首要前提。本文系统介绍了传统的水提醇沉法以及酶提取法、超声波辅助提取法、超临界流体萃取法、超高压提取技术微波辅助提取法和双水相萃取等新技术,对其分离原理、处理方式和效果进行分析比较和综述;从物理分离方式、分子间作用力及化学性质分离的角度,综述植物粗多糖分离和纯化方法及途径,为天然植物中多糖的分离纯化和综合利用提供参考。     

超临界CO_2流体萃取苦丁茶多糖的工艺优化

为了探讨超临界CO_2萃取广西苦丁茶中多糖的工艺条件,该研究采用超临界CO_2流体萃取技术分离苦丁茶多糖,利用苯酚-硫酸法对苦丁茶多糖含量进行测定,并考察不同萃取温度(35、40、45、50、55、60℃)、萃取压力(20、25、30、35、40、45、50 MPa)、萃取时间(30、60、90、120、150 min)、夹带剂(甲醇、95%甲醇、50%甲醇、无水乙醇、95%乙醇、50%乙醇)以及夹带剂(95%乙醇)用量(2.0、2.5、3、3.5、4.0、4.5、5.0 mL·min~(-1))对多糖得率的影响,通过设计正交实验方案,对超临界CO_2萃取广西苦丁茶多糖的提取工艺进行优化。结果表明:通过单因素和正交实验考察了苦丁茶多糖提取的主要影响因素,得到的最佳萃取工艺条件为萃取温度50℃,萃取压力40 MPa,夹带剂流量3.5 mL·min~(-1),萃取时间150 min;采用苯酚-硫酸法对苦丁茶多糖含量进行测定。在最优萃取条件下得到的苦丁茶多糖的提取率为7.05%。由此可知,采用超临界CO_2流体萃取,具有提取温度低、萃取率高、萃取周期短、低耗以及污染小等优点,适用于苦丁茶多糖的提取。     

红托竹荪菌托多糖的提取及抗肿瘤活性的初步研究

红托竹荪菌托经热水提取、酒精沉淀、脱蛋白后的粗多糖,其得率远大于其菌丝体和子实体的其他部位及香菇子实体.菌托粗多糖进一步用DEAE纤维素柱和Sephadex G-75分离纯化,得到两个组分DRVP1与DRVP2,对分离得到的主要多糖通过高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR)等进行结构分析.DRVP1的相对分子质量(Mr)为1.47×104,红外光谱数据显示为β-型甘露糖苷.体外试验表明,红托竹荪菌托多糖的组分DRVP1对小鼠S180肉瘤有一定的抑制作用.     

1株产多糖芽胞杆菌的分子鉴定和诱变选育

以中国农业科学院北京畜牧兽医研究所鸡舍附近土壤为材料,采用稀释平板法对其中的菌株进行分离与纯化培养,并对其进行形态学鉴定和粗多糖提取量的检测,同时对分离得到的菌株进行紫外线和亚硝基胍的诱变。从土壤中分离得到1株产多糖的芽胞杆菌(编号P-30),结合形态学鉴定、16S rRNA序列分析和系统发育树分析结果,确定该菌株为短短芽胞杆菌(Bacillus brevis)。其16S rRNA GenBank登录号为HM185814。经过诱变选育后,获得3株(N-05、N-11、U-01)多糖产量为P-30的1.44、1.44和1.29倍的诱变菌株,具有良好的开发前景。     

沙漠生物结皮芽孢杆菌产胞外多糖的纯化及其絮凝性的研究

【目的】以新疆古尔班通古特沙漠的生物结皮为样品,通过培养、筛选、分离得到一株高产胞外多糖(EPS)的菌株XJ-27,对XJ-27菌株所产的胞外多糖进行分离纯化,并对其絮凝性进行研究。【方法】利用DEAE sepharose CL-6B阴离子层析和Sephadex G100凝胶层析的方法对胞外多糖进行纯化,通过紫外分析方法和高效凝胶渗透色谱进行纯度的测定,利用高效凝胶渗透色谱法(HP-GPC)测定其分子量,以高岭土为体系对其絮凝性进行研究。【结果】利用层析分离的方法共得到2个胞外多糖的组分,对其中一个组分进一步纯化,得到组分EPS-I。结果表明,EPS-I纯度较高,分子量为575 kD。同时对胞外多糖的絮凝性进行了研究,结果表明该胞外多糖对高岭土为体系的絮凝率为80.4%。【结论】菌株XJ-27产胞外多糖,其胞外多糖具有絮凝性,对该胞外多糖进行分离纯化后,得到分子量为575 kD的多糖组分EPS-I。     

毛尖茶叶多糖的提取分离及其活性测定

本研究对毛尖茶叶多糖结构分析与活性开展了研究。采用水提醇沉法提取毛尖茶叶粗多糖,经除蛋白后得到精制多糖(MP),以柱层析方法对MP进行多次分离纯化,得到一个均一组分毛尖茶叶多糖(Maojian Tea Polysaccharides,MTP)。采用1,1-二苯基–2–三硝基苯肼[1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH]自由基清除、小鼠免疫细胞RAW264.7增殖、吞噬能力和产生NO等试验方法对MTP的活性进行研究。结果显示MTP对浓度0.1 mmol/L DPPH自由基清除率为38.26%,对小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖、吞噬能力和产生NO的能力均具有促进作用,与空白对照组有显著性差异(P0.01),且质量浓度为500 mg/L时,活性最大。     

桦褶孔菌多糖的分离纯化及清除自由基活性

利用水提醇沉法对桦褶孔菌Lenzites betulina粗多糖HZKJc进行提取,随后经Sevage法和酶法联合脱蛋白,再经DEAE‐Sephadex A‐25,G‐100柱层析纯化后得到多糖纯品HZKJv。通过高效液相色谱(HPLC)测定上述纯化多糖的纯度和相对分子量分布;经纸层析(PC)、气相色谱(GC)、红外光谱(IR)进行单糖组成分析;并研究其清除自由基活性。分离纯化后得到的HZKJv为纯多糖,相对分子质量约为11 687。当HZKJv溶液浓度为3.0mg/m L时,其DPPH自由基清除率可达82%;浓度为2.0mg/m L时,对?OH自由基的清除率可达85%。表明HZKJv对?OH与DPPH自由基存在很好的清除作用。     

木立芦荟多糖提取的工艺优化及其清除活性氧自由基的研究

对影响木立芦荟多糖提取的温度、时间和乙醇浓度3个因素进行L9(33)正交试验,分析其主要影响因素并对提取多糖进行活性测定。结果表明:提取温度显著影响多糖得率,最佳工艺条件为提取温度85℃、乙醇体积分数80%,时间1 h。用过硫酸铵/N,N,N,,N,-四甲基乙二胺(AP/TEMED)体系产生的氧自由基O2-.对在最佳工艺条件下得到的多糖进行活性氧自由基清除研究,发现其具有较高的清除能力。     

使君子多糖的超声波提取及体外抗氧化

目的:利用超声波法提取使君子多糖,将得到的多糖进行抗氧化性实验,探究其抗氧化活性。方法:通过单因素实验和正交实验,研究料液比、超声作用时间、超声提取温度和超声功率对使君子多糖提取效果的影响。制备使君子多糖,通过对·OH及·O-2的清除实验结果来评价其抗氧化活性。结果:超声波法提取使君子多糖的最佳提取条件为料比液1∶30(g/m L)、提取时间40 min、提取温度70℃、超声波功率140 W,在此条件下使君子多糖的提取率为10.36%。抗氧化性试验数据显示使君子多糖对·OH及·O-2的清除作用显著。结论:使君子多糖具有较强的抗氧化活性,为使君子的资源利用与开发提供了科学依据。     

超声辅助酶解提取五味子多糖及其抗细胞氧化应激研究

以五味子(Schisandra chinensis)干果为原料,采用超声辅助纤维素酶酶解法提取五味子多糖,研究五味子多糖的超声辅助酶解工艺与抗细胞氧化应激活性。以多糖得率为指标,采用单因素试验和Box-Behnken响应面试验研究加酶量、超声功率、提取时间和料液比对五味子多糖得率的影响,优化得到五味子多糖最佳超声辅助酶解提取工艺条件;建立脂多糖(LPS)诱导的HepG2细胞氧化应激损伤模型,以丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)水平为指征,研究五味子多糖的抗细胞氧化应激能力。结果表明：五味子多糖的最佳提取工艺条件为加酶量1 420 U·g^-1,超声功率500 W,提取时间46 min,料液比1 g:32 mL,该条件下五味子多糖得率为22.25%;此外,所提取得到的五味子多糖可提高LPS诱导HepG2细胞中的SOD水平,并可降低细胞中MDA的积累量和ROS荧光强度,有效缓解了LPS诱导的HepG2细胞氧化应激反应。优化确立了超声辅助纤维素酶提取五味子多糖最佳工艺条件,发现所提取得到的五味子多糖有良好抗氧化应激能力。     

若羌大枣多糖提取及分离工艺研究

目的：确定大枣多糖提取分离工艺的参数。方法：采用热水浸提法取多糖,乙醇沉淀法分离多糖。对液固比、浸提时间、浸提温度进行了单因素和L9（3^3）正交实验,并对提取过程中影响提取率的因素进行了统计分析。对多糖浸提液浓缩倍数、乙醇沉淀体积、醇沉时间对大枣多糖得率的影响进行了研究。结果：最佳提取工艺条件为：提取时间6h,料水比1：24,提取温度90℃。最佳分离工艺：浓缩倍数为8倍,4倍体积乙醇,醇沉12h,大枣多糖的得率最大。结论：实验结果为新疆次级大枣的深加工提供了可参数据。     

荞麦麸皮多糖的分离纯化及其外貌表征的分析

采用水提醇沉法对荞麦麸皮多糖(Buckwheat bran polysaccharide,BBP)进行提取,通过DEAE-52纤维素柱层析法和Sephadex G-200对其进行分离纯化,采用凝胶过滤法对多糖组分的分子量进行测定,采用扫描电镜对荞麦麸皮多糖及其分离纯化的多糖组分的外貌进行分析,用红外光谱对分离纯化的三个荞麦麸皮多糖组分的苷键构型进行分析。结果表明:DEAE-52纤维素和Sephadex G-200对荞麦麸皮粗多糖具有较好的分离纯化效果,得到了三个多糖组分(BBP-Ⅰ、BBP-Ⅱ和BBP-Ⅲ),其分子量分别为1.56×10~4Da、5.85×10~4Da、8.45×10~4Da。扫描电镜的结果表明,BBP其表面粗糙,凹凸不平,三个分离纯化的多糖组分形貌差异较大,分别以球状、片状、棒状为主。红外光谱扫描表明BBP-Ⅰ和BBP-Ⅲ为ɑ-糖苷键化合物,BBP-Ⅱ为β-糖苷键化合物。荞麦麸皮多糖组分外貌的差异性为其进一步的结构探究提供了重要依据。