过氧化氢干雾对生物安全柜微环境表面消毒效果的研究

生物安全实验室微环境消毒是控制实验室污染的重要环节。过氧化氢广泛用于病原微生物实验室微环境消毒,但其对不同病原微生物的消毒效果有待研究。本文研究了过氧化氢干雾（粒径％10μm）以不同消毒程序对生物安全柜表面常见微生物的消毒效果。结果显示,在生物安全柜内采用优化的消毒程序（发散循环8次,每次1min,达60ppm后,静置消毒2h）,过氧化氢干雾可完全杀灭1×106CFU枯草芽胞杆菌、嗜热脂肪芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、耻垢分枝杆菌,以及1×106CFU大肠埃希菌。然而,当金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、耻垢分枝杆菌浓度达1×107CFU时,过氧化氢干雾无法完全杀灭。因此,建议在进行过氧化氢干雾消毒时,应先用消毒剂处理,以期彻底杀灭生物安全柜微环境中污染的病原微生物。     

封面说明

正原始图片由大连工业大学生物工程学院大连市微生态制剂与天然产物工程实验室提供,为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)B-VE所产生的抗菌脂肽类物质对溶壁微球菌抑菌过程的扫描电镜图。贝莱斯芽胞杆菌属于革兰阳性细菌,该菌属大部分具有广谱抗菌性及较高的生物安全性等优点,可作为益生菌在农业、食品、工业等方面广泛研究与应用。     

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正原始图片由大连工业大学生物工程学院大连市微生态制剂与天然产物工程实验室提供,为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)B-VE所产生的抗菌脂肽类物质对溶壁微球菌抑菌过程的扫描电镜图。贝莱斯芽胞杆菌属于革兰阳性细菌,该菌属大部分具有广谱抗菌性及较高的生物安全性等优点,可作为益生菌在农业、食品、工业等方面广泛研究与应用。     

炭疽实验室生物安全

近年来,炭疽自然疫情和实验室相关事故频发,有关炭疽生物安全问题再次引发关注。本文简要介绍炭疽芽胞杆菌基本特点和目前对炭疽的治疗及预防概况,再结合历年来炭疽实验室典型生物安全事故,分析并总结国内外实验室生物安全管理的经验教训,针对性地提出炭疽实验室管理问题及对策,供炭疽实验活动和实验室生物安全管理参考。     

养猪微生物发酵床芽胞杆菌空间分布多样性

了解微生物发酵床大栏养猪垫料中的芽胞杆菌多样性和空间分布规律,为微生物发酵床管理、芽胞杆菌新资源挖掘及菌剂开发奠定基础。将发酵床划分为32个方格(4行×8列),采用五点取样法获得每个方格的样品。采用可培养法从32份样品中分离芽胞杆菌菌株,利用16S rRNA基因序列初步鉴定所分离获得的芽胞杆菌种类。利用聚集度指标和回归分析法,分析芽胞杆菌的样方空间分布型。通过Shannon-Wiener多样性指数、Simpson优势度指数、Hill指数及丰富度指数分析,揭示微生物发酵床中芽胞杆菌的空间分布多样性。从32份样品中共获得芽胞杆菌452株,16S rRNA基因鉴定结果表明它们分别隶属于芽胞杆菌纲的2个科、8个属、48个种。其中,种类最多的为芽胞杆菌属(Bacillus),30种;赖氨酸芽胞杆菌属(Lysinibacillus),6种;类芽胞杆菌属(Paenibacillus),5种;短芽胞杆菌属(Brevibacillus),3种;鸟氨酸芽胞杆菌属(Ornithinibacillus)、大洋芽胞杆菌属(Oceanibacillus)、少盐芽胞杆菌属(Paucisalibacillus)和纤细芽胞杆菌属(Gracilibacillus)各1个种。芽胞杆菌种类在发酵床空间分布差异很大,根据其空间出现频次,可分为广分布种类,如地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis);寡分布种类,如根际芽胞杆菌(B.rhizosphaerae);少分布种类,如弯曲芽胞杆菌(B.flexus)。依据其数量,可分为高含量组优势种群,如地衣芽胞杆菌(B.licheniformis);中含量组常见种群,耐盐赖氨酸芽胞杆菌(Lysinibacillus halotolerans);寡含量组寡见种群,如根际芽胞杆菌(B.rhizosphaerae);低含量组偶见种群,如土地芽胞杆菌(B.humi)。空间分布型聚集度和回归分析测定表明,芽胞杆菌在微生物发酵床的分布类型为聚集分布。微生物发酵床垫料中芽胞杆菌种类总含量高达4.41×108个/g,其种类含量范围为0.01—94.1×106个/g(均值为8.96×106个/g),丰富度指数(D)、优势度指数(λ)、Shannon-Wiener指数(H')和均匀度指数(J')分别为0.4928、0.2634、1.3589和0.9803,其中香农指数最大的单个芽胞杆菌种类为地衣芽胞杆菌(B.licheniformis)。根据芽胞杆菌种类多样性指数聚类分析,当欧式距离λ=17时,可分为高丰富度高含量和低丰富度低含量类型。微生物发酵床的芽胞杆菌种类丰富、数量高,是一个天然的菌剂"发酵罐",有望直接作为微生物菌剂,应用于土壤改良、作物病害防控、污染治理等领域。     

PlcR在炭疽芽胞杆菌A16R中的功能研究

炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)、蜡样芽胞杆菌(B. cereus)和苏云金芽胞杆菌(B. thuringiensis)均属于蜡样芽胞杆菌群,在遗传学上有很高的相似性。PlcR (Phospholipase C regulator)在蜡样芽胞杆菌中是十分重要的调控因子,但plcR基因在炭疽芽胞杆菌中发生一个无义突变导致在炭疽芽胞杆菌中产生一个截短PlcR蛋白。为了研究plcR基因对炭疽芽胞杆菌功能的影响,文章以蜡样芽胞杆菌CMCC6330基因组为模板,构建重组表达质粒pBE2A-plcR后导入炭疽芽胞杆菌疫苗株A16R中获得重组菌株,对其进行表型分析。结果显示,炭疽芽胞杆菌重组菌株的溶血活性基本没有恢复,但恢复了部分神经鞘磷脂酶活性,表明将蜡样芽胞杆菌的plcR基因导入炭疽芽胞杆菌后,可以直接激活神经鞘磷脂酶活性。     

台湾地区芽胞杆菌物种多样性

了解芽胞杆菌资源多样性, 可为芽胞杆菌功能资源挖掘和菌剂开发提供基础。从台湾地区8个市(县)采集土壤样本, 从20份土壤样品中分离获得了136株芽胞杆菌, 采用16S rRNA基因同源性将其鉴定为芽胞杆菌科的2个属、20个种。分别属于芽胞杆菌属(Bacillus)的16个种和赖氨酸芽胞杆菌属(Lysinibacillus)的4个种。根据分离频度分析得知, 台湾地区土壤中的芽胞杆菌优势菌群为阿氏芽胞杆菌(Bacillus aryabhattai)、苏云金芽胞杆菌(B. thuringiensis)和蜡样芽胞杆菌(B. cereus), 其他种类分布极其不均匀。芽胞杆菌Shannon多样性指数为1.2925-2.5850, 最高的为台中市和嘉义市(2.5850), 最低的为桃园县(1.2925)。根据分离频度对芽胞杆菌种类的聚类分析显示, 当欧式距离λ = 20时, 芽胞杆菌种类可分为高频度分布类型如阿氏芽胞杆菌(B. aryabhattai), 低频度分布类型如简单芽胞杆菌(B. simplex)。依据分离频度对8个采样点间的聚类分析未发现采样点间的芽胞杆菌种类分布的相关性。本研究认为台湾地区土壤中蕴藏着丰富芽胞杆菌种类多样性高, 具有很大的开发潜力。     

坚强芽胞杆菌主要分泌蛋白的鉴定及其分泌性序列

[目的]坚强芽胞杆菌是一种在自然界普遍存在的益生菌,在对虾养殖中应用较为广泛.为了研究其分泌性蛋白从而为分泌性载体的构建提供理论依据,本文对坚强芽胞杆菌的主要分泌蛋白进行质谱鉴定及分泌性序列的分析.[方法]从本实验室分离保存的1株来自对虾肠道的坚强芽胞杆菌(Bacillus firmus)培养液中获取了分泌性蛋白,进行SDS-PAGE,并对表达量较高的3条蛋白区带进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定及克隆测序,进行生物信息学分析.[结果]鉴定出的蛋白分别是坚强芽胞杆菌几丁质酶(chitinase)、坚强芽胞杆菌肠毒素A(enterotoxin A)和坚强芽胞杆菌BCG9842蛋白(hypothetical protein BCG9842).经在线软件SignaIP 3.0分析,确定chitinase、enterotoxin和BCG9842均存在不同的分泌性信号肽序列bf-43、bf-37和bf-16,通过在线软件PSORT分析表明,bf-43定位于细胞的外膜上,bf-37和bf-16定位于细胞的胞外.[结论]本研究鉴定出了坚强芽胞杆菌的3个主要分泌性蛋白,分析筛选出了3条分泌性序列,为分泌性载体的构建提供理论依据.     

仙草植物内生芽胞杆菌种群多样性研究

为了研究仙草植株内生芽胞杆菌种群的多样性,利用营养琼脂培养基分离仙草根、茎、叶中的内生芽胞杆菌,采用16SrRNA序列鉴定法对分离获得的芽胞杆菌进行鉴定。同一组织内,对16SrRNA序列及形态完全一样的菌株合并冗余,用ClustalX对分离得到的菌株16SrRNA进行排序,构建Neighbor-Joining系统进化树,并计算多样性指数。实验结果显示,共分离得到58株仙草内生芽胞杆菌(根29株、茎28株、叶1株),分属于芽胞杆菌属(Bacillus)、类芽胞杆菌属(Paenibacillus)和赖氨酸芽胞杆菌属(Lysinibacillus),共3个属的11个种,其中与阿氏芽胞杆菌B.aryabhattai、简单芽胞杆菌B.simplex和B.flexus 3个种最接近的内生芽胞杆菌占总分离芽胞杆菌株数的62%;根部内生芽胞杆菌数量及种属均最丰富,其多样性指数高于茎和叶。     

三级生物安全实验室感染性废弃物处理相关问题的探讨

在生物安全管理的各环节中,感染性废弃物的处理是控制实验室生物安全的关键环节.为此,我国制定了关于感染性废弃物处理的法律、法规,以避免污染实验室或环境.本三级生物安全实验室运行的3年中,在处理感染性废弃物时遇到了若干需要认真对待的细节,如固体感染性废弃物处理过程中的灭菌环节、消毒剂使用对压力蒸汽灭菌器的损伤、液体感染性废...     

The inactivation and removal of airborne Bacillus atrophaeus endospores from air circulation systems using UVC and HEPA filters

Aims: To (i) evaluate the UV radiation in the ‘C’ band/high efficient particulate air (UVC/HEPA) instrument’s potential to inactivate spores of Bacillus atrophaeus and selected Bacillus species and (ii) test whether a titanium dioxide coating inside the cylindrical HEPA filter improves the system's efficacy. Methods and Results: Known amounts of dried spore preparations of B. atrophaeus, Bacillus cereus, Bacillus megaterium, Bacillus stearothermophilus and Bacillus thuringiensis were exposed to the UVC lamp within a cylindrical HEPA filter for different time lengths (30 min to 48 h) and with different air flow speeds (0–235 l s^?1). The log₁₀ reduction (range 5–16 logs) of colony forming units for spores exposed to the UVC compared with the unexposed spores was significant (P < 0·0001). The addition of a titanium dioxide (TiO₂) veneer to the interior surface of the HEPA filter significantly increased the inactivation of spores (P < 0·0001). Conclusions: The UVC/HEPA unit could inactivate spores of B. atrophaeus, B. cereus, B. megaterium, B. stearothermophilus and B. thuringiensis. Significance and Impact of the Study: The UVC/HEPA unit represents an effective method of decontaminating circulating air within an air‐duct system as found in a building.     

基于功能催化剂的多因子消毒器对微生物气溶胶消毒效果

摘要 目的：利用空气消毒器能有效控制病原微生物在空气中的传播,但催化剂添加及多因子协同消杀的必要性及效果尚不明晰。方法：利用多因子消毒器,以白色葡萄球菌为指示菌,在30 m³标准试验舱开展了臭氧、紫外线、臭氧催化、紫外光催化、HEPA过滤等单一消杀因子及多因子协同消杀气溶胶中微生物的研究。结果：分别添加臭氧催化剂、光催化剂较单一臭氧、紫外线消杀率提高12.9%和11.33%;在多因子消杀中,协同臭氧催化-紫外光催化-HEPA过滤的多因子消杀较单一因子消杀率分别提高10.58%、36.37%、53.67%。此外,随着相对湿度从40%增加至80%,臭氧消杀率提高3.67%,而紫外线消杀率下降6.76%;随着设备风速由1.1 m/s增加到1.9 m/s,臭氧、紫外线、HEPA过滤的消杀率分别提高2.95%、8.08%和46.09%;臭氧发生量由5 g/h提高至10 g/h时,消杀率提高12.87%。结论：催化剂添加及多因子协同能提升消毒器的消杀效率,环境相对湿度、消毒器风速等因素会显著影响消毒器消毒效果。     

低浓度84消毒液对小鼠生殖生理的影响

目的：观察低浓度84消毒液对小鼠生殖生理的影响。方法将72只KM小鼠随机分为3组,即：0.5％84消毒液组（ A组）、2.0％84消毒液组（ B组）和生理盐水组（ C组）,每组24只,雌雄各半,各组每天1次灌胃给予相应药物,连续9周。阴道涂片镜检观察雌性小鼠的动情周期。9周后,观察雄性小鼠的精子畸形率;并用ELISA法测定小鼠血清中性激素的水平;并取睾丸（或卵巢）、心、肝、肺、肾进行组织学观察。结果与C组比较,A和B组小鼠体重差异无显著性（ P ＞0.05）;血清性激素水平差异无显著性（ P ＞0.05）;雌性小鼠动情周期差异无显著性（P ＞0.05）;组织学观察未见异常;与C组比较,A组小鼠精子畸形率差异无显著性（P ＞0.05）,B组小鼠精子畸形率显著增高（ P ＝0.041＜0.05）。结论0.5％84消毒液对小鼠的生殖生理无明显影响,在实际使用中要严格控制消毒液浓度。     

Observation on the air-borne bacteria and ammonia (NS3) gas in laboratory animal facility with rotary heat exchanger]

The number of air-borne bacteria in air ducts and barrierred laboratory animal rooms with the so-called econovent rotary heat exchanger, were checked monthly during a year by the pin-hole sumpler method for air ducts and Koch method for animal rooms. Also, concentration of ammonia was checked with the same samples by gas impinger. No significantly difference in number of air-borne bacteria was seen between before and after passing the econovent. Those passing through HEPA filter was not detected. There were more air-borne bacteria in animal rooms, outside locker room and shower room than in the corridor, utensil storage, inside locker room and pass box. No ammonia were detected in the outdoor, but exhaust air duct after passing the econovent contained very small amount of ammonia. On the other hand, high concentration of ammonia were preserved in the supplying air duct, exhaust air duct and mice and rats rooms, about 86% of ammonia in exhaust air duct returned back into the supplying air duct. No influences on reproduction in mice and rats were recognized.     

微生物法检测实验动物血清中的抗生素残留

目的建立实验动物血清中抗生素残留检测方法,保证微生物质量检测结果的准确。方法采用微生物抑制法,用嗜热脂肪芽孢杆菌作为指示菌,对1640份实验动物血清进行抗生素残留检测。并与Premi@Test抗生素检测试剂盒进行比对。结果在受试样品中,检测出小鼠、大鼠、豚鼠、兔和犬的血清中存在抗生素残留,阳性率分别为27.2%、16.4%、39.9%、23.7%和47.6%。抽取82份血清和18份阴阳对照品,与Premi@Test检测的结果相比较差异不显著（X2=16.680,P〉0.05）。血清中抗生素的残留与DHL琼脂平皿的菌落生长有一定相关性（X2=9.939,P〈0.05）。结论本研究采用嗜热脂肪芽孢杆菌作为指示菌的微生物抑制法,能够对动物血清中的抗生素进行检测,具有良好的敏感性和重复性,成本低,操作简便。为实验动物体内抗生素残留检测和微生物学检测结果的准确性提供依据。     

间断低氧大鼠饲养舱的研制和初步应用

目的设计制造自动控制的长期间断低氧大鼠饲养舱,以建立符合睡眠呼吸暂停综合征（SAS）特征的大鼠模型。方法①由单片机自动控制,通过电磁阀控制供应各气体的流量,使饲养舱内的氧浓度能够在9%～21%的范围内快速地变化。②50只SD大鼠均分为五组,即间断低氧2周组（2H）和4周组（4H）、空气对照2周组（2C）和4周组（4C）及正常对照组（NC）。间断低氧组在密闭的舱中间断性地呼吸低氧气体,90s一次循环,每天8h,每周7d。对照组呼吸空气。结果通过单片机能自动调节医用氮气与氧气的输入,使舱内低氧时氧浓度在9.0%±1.5%,复氧时氧浓度在21.0%±0.5%。大鼠平均肺动脉压：2H组较2C组高18.71%,4H组较4C组高16.87%（P均〈0.05）;右心室收缩末期压及最大变化速率RVESP、RV＋dp/dt和RV-dp/dt：4H组较4C组分别高36.36%、56.35%和55.43%（P均〈0.01）,4H组比2H组分别高88.85%、19.49%和80.97%（P均〈0.01）;而2C组、4C组与NC组上述指标各组间均无显著性差异（P均〉0.05）。结论该大鼠饲养舱能自动、精确控制舱内氧浓度、循环时间,能复制出比较符合SAS病理生理变化特征的动物模型。     

SARS-CoV细胞空斑试验

目的建立适用于生物安全三级实验室操作的SARS．CoV空斑试验方法。方法SARS－CoVl0倍系列稀释接种Vero－E6细胞,用0．6％琼脂糖覆盖中性红着色（琼脂糖．中性红法）或覆盖1％甲基纤维素,4％甲醛固定,结晶紫染色（甲基纤维素－结晶紫法）,空斑计数。结果琼脂糖－中性红法病毒滴度为6．14Lg pfu／mL,甲基纤维素－结晶紫法病毒滴度为6．57Lg pfu／mL。结论二种空斑试验方法相比,病毒滴度无明显差异。甲基纤维素－结晶紫空斑试验法形成的空斑比琼脂糖－中性红法清晰、操作简单安全、结果可长期保存。     

一次性氧气湿化瓶与重复使用湿化瓶应用的对比观察

目的：检测一次性氧气湿化瓶与重复使用湿化瓶用后细菌污染的程度和患者对噪音感受的舒适程度,对比两者的成本效益。方法：随机选出心内科病房内持续吸氧时间超过10天的患者100名,以随机分组的方法分出A组50名、B组50名。A组使用一次性氧气湿化瓶,B组使用重复使用的氧气湿化瓶。按照《医疗卫生机构消毒技术规范》进行采样后送微生物检验室进行病原学检验;同时对两组患者进行噪音感受舒适度的调查;根据使用的氧气湿化瓶成本费用、氧气湿化用灭菌注射用水的价格、含氯消毒剂健之素的费用计算成本。结果：50只一次性氧气湿化瓶使用时间120小时（5天）,微生物学检测未发现致病菌,成本费用9-3元／日,患者噪音感受舒适度满意度调查结果为100％;重复使用氧气湿化瓶使用24小时染茵率28％,成本费用9．6元／日,患者噪音感受舒适度满意度调查结果为60％。结论：使用合格的一次性氧气湿化瓶,在患者费用不会增加的前提下,减少了医院感染机会,增加了患者的舒适度,值得推广使用。     

转cry1 Ab基因粳稻对稻田节肢动物群落的影响

在将稻田节肢动物群落按营养关系分为植食类、寄生类、捕食类、腐食类和其他类等5个功能团的基础上,从功能团优势度、群落结构参数及群落相异性等方面,经2年3点的调查就2个转cry1Ab基因粳稻（Bt粳稻）品系KMD1和KMD2对稻田节肢动物群落结构的影响做了评价。结果表明：在大多数情况下,Bt粳稻与对照间各功能团优势度、群落结构参数[物种丰富度（S）、Shannon-Wiener多样性指数（H′）、均匀性指数（J）、优势集中性指数（C）]及其时间动态无明显差异;Bt粳稻与对照间植食类、寄生类、捕食类亚群落,及整个节肢动物群落的相似性也较高。综合分析认为,Bt粳稻对稻田节肢动物群落结构无明显的负面影响。