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1.
超高忠实性PCR用DNA聚合酶 总被引:4,自引:0,他引:4
PCR(PolymeraseChainReaction)法已在生物工程领域得到了广泛的应用,而PCR法的推广完全得益于Taq耐热性DNA聚合酶。近年来,PCR法的应用除生物工程领域外,已应用至工业、农业、医学、制药等与人们生活息息相关的各个领域。随着PCR法的不断推广,人们对DNA聚合酶的忠实性(Fidelity)要求越来越高,一般来说,TaqDNA聚合酶在进行PCR延伸反应过程中的错配率为0.5%左右。TaKaRa公司独自研制成功的PyrobestDNA聚合酶是一种来源于Pyrococcuss… 相似文献
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植物基因表达调控的机制:核因子作用邵宏波(四平师范学院生物工程研究所四平136000)1引言真核生物的转录启始是由顺式作用的DNA基序(ets-actingDNAmotif)与反式作用的蛋白质因子(trans-actinznroteinfactor)... 相似文献
3.
线粒体缺陷与阿尔采末病 总被引:10,自引:0,他引:10
阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)存在线粒体氧化磷酸化异常与线粒体DNA(mtDNA)缺陷,主要表现为;线粒体呼吸链复合体Ⅳ(细胞以素c氧化酶,COX)活性在AD患者血小板,培养的皮肤成纤维细胞及脑中显著下降。其可能则遗传性mtDNA突变与自由基介导的体细胞mtDNA突变的共同作用,也可能继发于其它改变。 相似文献
4.
氧化诱导K_(562)细胞凋亡机制的初步探讨 总被引:7,自引:0,他引:7
以过氧化氢(H2O2)诱导人慢性髓细胞白血病(K562)细胞为凋亡模型,采用流式细胞仪(flowcytometry,FCM)和激光共聚焦扫描显微镜(laserconfocalscanningmicroscopy,LCSM)研究细胞凋亡,形态观察出现核固缩,核碎裂及凋亡小体等典型凋亡特征.DNA电泳图谱出现“Ladder”.FCM检测在G0/G1峰前出现一低DNA含量的凋亡峰.LCSM显示凋亡细胞c-Fos.c-Jun和NFκB表达量均有不同程度的增加.该结果提示上述三种转录因子可能参与氧化诱导凋亡过程中基因的调控作用. 相似文献
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《DNA复制:调节机制》《DNA复制:调节机制》(DNAreplication:theresulatorymechanisms)由P.Hughes等人编著,1992年斯普林格出版社出版,422页。该书有下列章节:1.细胞DNA复制。DNA复制的细胞周... 相似文献
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毛细血管扩张性共济失调突变蛋白在细胞凋亡过程中被Caspase┐3降解 总被引:1,自引:0,他引:1
新近的研究揭示:caspase蛋白酶在细胞凋亡中起着死亡执行者的重要功能.一些蛋白相继被证明在细胞凋亡中可被caspase特异切割,其中参与DNA损伤修复过程的聚ADP核糖聚合酶(PARP)以及DNA依赖的蛋白激酶(DNA-PK),在细胞凋亡过程中被caspase选择性切割具有特殊的功能意义.为探索与DNA-PK催化亚基有较高同源性,含有caspase切割位点,且功能上目前也被认为是感受DNA损伤和参与信号传导途径的ATM(Ataxiatelang-iectasiamutated)蛋白,是否在凋亡过程中也可被切割而降解?应用体外转录与翻译系统获得ATM蛋白的PI3K结构域,同时通过建立无细胞反应体系获得含caspase活性的细胞抽提液,将两者在体外共同保温.结果发现:ATM蛋白与caspase-3能免疫共沉淀,ATM蛋白的PI3K结构域可被caspase-3特异切割,并观察到辐射诱发细胞调亡中ATM蛋白的降解.从而进一步证实了DNA损伤修复的抑制,促进细胞凋亡的发生. 相似文献
7.
四种鱼类外周血红细胞细胞周期及DNA含量 总被引:5,自引:0,他引:5
通过流式细胞仪测量了兴国红鲤(Cyprinus carpio Var. Singuonensis)、奥利亚罗非鱼(Sarotherodon aurea)、 鳙(Aristichthys nobilis R.)和团头鲂(Megalobrama amblycephala Yin.)红细胞的DNA含量,四种鱼与鸡红细胞DNA含量的比值分别为1·65、0.96、0.91、1·15,以鸡红细胞DNA含量2.3pg/N计算,四种鱼二倍体体细胞的 DNA含量分别为3.80 pg/N, 2. 22pg/N、2. 08pg/N、 2. 66pg/N。另外,四种鱼外周血红细胞分别有26%、 26%、 23%、 24%的细胞处于 DNA合成期(S),DNA合成后期(G2)和分裂期(M),这表明这四种鱼类的外周血红细胞并非失去分裂能力的特化细胞群,它们表现了较强的细胞周期现象。这有可能是这几种硬骨鱼类外周血仍具有造血功能的缘故。 相似文献
8.
普通小麦细胞质雄性不育系及其保持系线粒体DNA的RAPD分析 总被引:1,自引:0,他引:1
应用随机扩增多态DNA(RandomamplifiedpolymorphicDNAs,RAPD)技术,对普通小麦细胞质雄性不育系(A)及其保持系(B)线粒体基因组(mitochondrialgenome)的指纹图谱进行了分析。共使用引物41个,其中20个引物得到了扩增产物,部分引物扩增结果表现多态性。说明线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)序列在不育系和保持系之间存在差异,进一步明确了小麦细胞质雄性不育(cytoplasmicmalesterile,CMS)与mtDNA的关系。 相似文献
9.
L-苯丙氨酸与血管平滑肌细胞增殖 总被引:3,自引:0,他引:3
本文用氚标胸腺嘧啶核苷掺入DNA合成法测定自发性高血压大鼠(SHR)与正常对照鼠的培养主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,观察L-苯丙氨酸对细胞增殖、细胞生长及原癌基因c-fos、c-myc表达的影响。结果显示:(1)L-苯丙氨酸剂量依赖性地抑制血清、碱性成纤维细胞生长因子及凝血酶诱导的DNA合成;(2)L-苯丙氨酸剂量依赖性地抑制细胞对血清的增殖反应;(3)L-苯丙氨酸抑制血清诱导的c-fos 相似文献
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抗菌肽CM4组分的K562癌细胞染色质DNA断裂作用的SCGE研究 总被引:14,自引:0,他引:14
单细胞凝胶电泳法(singe cell gel electrophoresis,SCGE)是一种快速,敏感的检测单个哺乳动物细胞DNA断裂的技术,也叫彗星实验(comet assay)。此实验首次通过SCGE法观察抗菌肽M4组分对人髓样白血病K562细胞和正常人白细胞核染色质DNA的影响,从而进一步研究抗菌肽抗癌作用的机制。荧光显微镜观察显示经抗菌肽CM4组分处理过的K562癌细胞核染色质DNA出 相似文献
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从印度木薯花叶病毒(ICMV)侵染的植物中纯化特异的核酸,经RNAase,DNAasc,Nucle-aseSl,ExonucleaseⅢ和EcoRI酶切,Southern和Dotblots杂交证实,在感病的植株中,存在两种形式的病毒核酸:环状双链DNA和环状单链DNA,后者可能是病毒DNA的(-)链,环状双链DNA经限制性内切酶作用可得2.7kb的线性双链DNA纯化的病毒核酸含DNA1和DNA2两个分子量相近的组份。 相似文献
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在国际侵蚀控制学会(InternationalErosionControlAsociation,IECA)等国际机构的资助与倡导下,第一届亚太地区侵蚀控制与护坡生物工程大会暨展览(FirstAsia-PacificConferenceandExhib... 相似文献
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从DNA序列到物种树 总被引:77,自引:7,他引:70
从DNA序列到物种树张亚平(中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进化开放研究实验室650223)关键词DNA序列,基因树,物种树Keywords:DNASequence,Genetree,SpeciestreeDNA不仅是主要的遗传物质,同时也是生物进... 相似文献
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鬣羚干皮标本中的DNA提取和PCR扩增 总被引:7,自引:1,他引:7
为了澄清鬣羚(Capricornis sumatraensis)这种动物在系统进化和分类上的混乱局面,有效地保护其种群的遗传多样性,本文以鬣羚不同种群的干皮标本为样品,分别提取了总DNA(totalDAN),并以此为模板,特异性扩增了mtDNA(mitochondrialDAN)细胞色素b(cyt b)基因的约500bp的片段,从而证明了通过干皮标本研究这种珍贵动物遗传分化的可行性。 相似文献
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同型半胱氨酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用 总被引:11,自引:0,他引:11
血中同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)浓度的升高已成为动脉粥样硬化发生的一个独立危险因子.为进一步阐明HCY促进血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecels,VSMCs)增殖,从而引起动脉粥样硬化发生的机理.本实验采用细胞计数、3H-TdR参入、细胞周期分析、Northern杂交方法证明,一定剂量的HCY可促进离体培养的WKY大鼠血管平滑肌细胞增殖,使其DNA合成增加,细胞周期中S期细胞所占比例增加43%,并促进c-myc与c-fos原癌基因mRNA表达增加.提示HCY可能通过促进VSMCs增殖而诱发动脉粥样硬化 相似文献
16.
紫云英细胞转化条件的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了紫云英(AstragalussinicusL.)细胞遗传转化的条件。根癌农杆菌(Agrobacteriumtum efaciens)经含乙酰丁香酮的低pH/PO3-4 诱导培养后,用来感染紫云英下胚轴原生质体,随后的细胞GUS瞬间表达活性显著提高,间接证明了上述预培养诱导活化了细菌vir基因,促进了T-DNA 向植物细胞转移。在PEG介导的DNA 转移中,较高的pH 和Ca2+ 浓度能够提高细胞GUS活性。质粒DNA 浓度及启动子类型对外源基因在植物细胞内表达也有一定影响。采用外植体-农杆菌共培养法,获得GUS和NPT Ⅱ基因稳定表达的紫云英转化植株 相似文献
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喹诺酮类药物抗乙型肝炎病毒体外实验研究 总被引:4,自引:0,他引:4
本文以2.2.15细胞株为模型,以HBsAg、HBeAg、HBVDNA、细胞存活率为观察指标,综合评价了喹诺酮类药物吡哌酸(PipemidicAcid)、氟哌酸(Norfloxacin)、环丙氟哌酸(Ciproflosxacin)、氟嗪酸(Ofloxacin)体外抗HBV效果。结果表明:吡哌酸、氟哌酸、环丙氟哌酸、氟嗪酸对HBsAg、HBeAg50%抑制浓度(ID_(50))分别为11μg/ml、64μg/ml、93μg/ml、105μg/ml和199μg/ml、111μg/ml、24μg/ml、217μg/ml,细胞存活率为50%时的药物浓度(CD_(50))分别为219μg/ml、90μg/ml、181μg/ml、169μg/ml,在所选定的用药浓度范围内不同程度抑制培养上清液及细胞内HBVDNA及其复制中间体的产生。尤其对超螺旋结构DNA(scDNA)有不完全抑制作用。 相似文献
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普通小麦基因组最可能的4个供体的ITS1和ITS2序列及其亲缘关系 总被引:4,自引:0,他引:4
对普通小麦(TriticumaestivumL.)基因组(AABBDD)最可能的供体-T.uratrtuThum.(AA)、T.monoccumvar.boeoticum(Boiss.)MK(AA)、AegilopsspeltoidesTausch.和Ae.tauschii(Coss.(DD)的核糖体RNA基因ITS区进行了PCR扩增和克隆,并测定了ITS1和ITS2的DNA序列,讨论和纠正了前人 相似文献
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大鼠催乳素基因真核细胞可表达性质粒的构建及应用研究 总被引:4,自引:0,他引:4
735bp的PRLcDNA片段从质粒PRL-SP65#1中回收后,用粘性末端连接法将其重组到真核表达载体pcDNA3上,筛选出正向连接重组体pcDNA3-PRLS和反向连接重组体pcDNA3-PRLAS。将重组体pcDNA3-PRLs和空载体pcDNA3分别转入NIH3T3细胞系,用G418筛选出阳性细胞后与未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2的情况下,用原位杂交的方法,分别用PRLcDNA探针和原癌基因c-H-rascDNA探针进行检测,未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2时都几乎无催乳素基因的表达,同样,转入空载体的NIH3T3细胞也无PRL的表达,而转入重组体pcDNA3-PRLS的NIH3T3细胞则有大量的PRL基因的表达,与对照组相比有显著差异(P<0.01)。正常和转入空载体的NIH3T3细胞有一定程度的原癌基因c-H-ras的表达,当分别加入E2和转入重组体pcDNA3-PRLS后,NIH3T3细胞中的c-H-ras基因表达水平都显著升高(P<0.05)。 相似文献
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普通小麦三个基因组之间的遗传关系及原位杂交分析 总被引:1,自引:0,他引:1
以普通小麦(Triticum aestivumL.)的3个可能的二倍体供体种(乌拉尔图小麦(T.urartuThum.)拟斯卑尔脱山羊草(AegilopsspeltoidesTausch)和粗山羊草(Ae.tauschiiCoss.)的基因组DNA为研究对象,通过它们之间的相互杂交,比较杂交强度以及泳道中带纹的不同,并结合部分DNA重复序列在基因组间含量差异的数据,得出结论:A^u和D基因组的关系 相似文献