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亚克隆了Rhodobacter sphaeroidesglnB启动子,以pMP220为载体构建成blnB-lacZ融合子。将glnB-lacZ、nifH-lacZ、nifA=lacZ分别导入R.sphaeroides谷氨酸合酶突变株gltB、gltD和野生型菌株中,分析了突变对固氮基因转录表达的影响,试验证明,在gltBD突变株中nifH的表达受阻遏,nifA表达水平很低。这证明glt基因的突变引 相似文献
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亚克隆了Rhodobacter sphaeroides glnB启动子,以pMP220 为载体构建成glnBlacZ融合子。将glnBlacZ、nifHlacZ、nifAlacZ分别导入R. sphaeroides 谷氨酸合酶突变株gltB- 、gltD- 和野生型菌株中,分析了突变对固氮基因转录表达的影响。试验证明,在gltBD 突变株中nifH 的表达受阻遏,nifA 表达水平很低。这证明glt 基因的突变引起固氮酶结构基因和固氮正调节基因的转录被阻遏,而glnB 基因的表达几乎不受影响。试验还测定了环境中结合态氮和有机酸等信号分子对glnB 和nifH 表达的影响,发现加入氨或谷氨酰胺后,nifH 的表达受到明显的阻遏作用,glnBlacZ的β半乳糖苷酶活性虽下降30 % 左右但不随结合态氮浓度升高而变化,仍维持在一个较高的水平。α酮戊二酸和丙酮酸对nifH 的表达有部分去阻遏作用而对glnB的表达无诱导作用 相似文献
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水稻矮缩病毒最外层外壳蛋白基因(S2)cDNA克隆,序列分析及其在大?… 总被引:2,自引:0,他引:2
从水稻矮缩病毒(Ricedwarfvirus,RDV)中国福建分离物中克隆分离了最外层外壳蛋白基因(S2)全长cDNA并对其进行序列分析,结果表明RDVS2cDNA全长3512bp,仅含一个3348bp的阅读框架,编码一人含有1116个氨基酸的蛋白(P2)。与基因库中已知基因序列比较,发现它与日本RDVH株系相应片段的核苷酸和氨基酸同源率分别为94.6%和95.4%与轮状病毒VP2氨基酸序列有一定 相似文献
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一个新的水稻MADS—box基因的克隆及表达分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据MADS-box基因保守区结构,设计简并性引物,利用3'RACE从水稻(Oryza sativa L.)中克隆了1个新的水稻MADS-box基因的cDNA片段,同时利用5&RACE获得了全长cDnA命名为FDRMADSS。序列分析表明,该cDNA全长1406bp,开放阅读框共编码233个到,具有典型的植物MADS-box基因的结构。推测的氨基酸序列与拟南芥的MADS-box基因,AGL14同 相似文献
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大鼠脑谷氨酸脱羧酶基因的cDNA克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
胰岛β-细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶(Glutamicaciddecarboxylase,GAD,EC4.1.1.15)同源物,以双链cDNA为模权,用PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑GAD基因的cDNA将此包括编码593个氨基酸的全长DNA片段重组入pUC质粒并用双脱的氧末端终止法测定了全部序列,证明其全长为1779bp,经比较发现Wistar大鼠脑与Russell报导的大鼠脑G 相似文献
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痢疾福氏2a asd基因的克隆及其序列分析 总被引:5,自引:0,他引:5
本文根据大肠杆菌(E.coli)K12asd基因两侧序列设计了一对引物,用全菌PCR扩增了福氏2a T32株的asd基因及其两侧序列。对PCR产物的初步结果表明,在asd基因两端存在BamH I位点。为了防止由PCR扩增带来的差错,我们又从福氏2a T32株染色体中克隆了全长的asd基因。序列分析了结果表明,福氏2aT32株asd基因的序列与E.coli K12的完全一致,全长1680bp,其两侧 相似文献
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胰岛β-细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶(Glutamicaciddecarboxylase,GAD,EC4.1.1.15)同源物。以双链cDNA为模板,用PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑GAD基因的cDNA,将此包括编码593个氨基酸的全长DNA片段重组入pUC质粒并用双脱氧末端终止法测定了全部序列,证明其全长为1779bp.经比较发现Wistar大鼠脑与Russell报导的大鼠脑GAD基因序列,有一处碱基的差别,但并不涉及氨基酸的改变。同时还对用PCR扩增长片段DNA进行了方法学上的探讨。 相似文献
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根据法呢基焦磷酸合酶(FPS)保守域设计简并引物,应用Nest PCR和PCR-96孔板筛库技术分离到亚洲棉法呢基焦磷酸合成酶的cDNA。序列分析表明,该cDNA全长1280bp,开放阅读框共编码342个氨基酸残基,推断蛋白质分子量约为39kD,推测的氨基酸顺序与拟南芥和青蒿的FPP合酶序列同源性为78.9%和80.7%。应用RT-PCR定量分析fps1基因在“苏棉6号”(G.hirsutum L 相似文献
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水稻ADP—葡萄糖焦磷酸化酶的cDNA基因克隆和结构分析 总被引:1,自引:0,他引:1
用PCR技术从我国水稻品种“中花10 号”(Oryza sativa var. japonica cv. Zhonghua 10)的未成熟种子中克隆到ADP-葡萄糖焦磷酸化酶基因,进行了全序列分析,并与国外已报道的同类基因进行了核苷酸及推导氨基酸序列的同源性比较。结果表明,作者克隆的ADP-葡萄糖焦磷酸化酶基因全长1461 bp,编码1个由483 个氨基酸组成的多肽,与国外基因的核苷酸和推导氨基酸同源率分别为99.6% 和99.7% 。此外,还对该基因进行了结构及进化分析。 相似文献
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植物甜蛋白mabinlinⅡcDNA的克隆与序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据已由作者克隆的mabinlinⅡB亚基185bp的cDNA片段,设计合成系列引物.从马槟榔(CapparismasaikaiLévl.)种子提取总RNA并纯化mRNA,经反转录合成cDNA第一链.采用RACE方法,快捷克隆mabinlinⅡ全长cDNA.经序列测定与分析,该cDNA为583bp,其中编码序列长465bp,共编码155个氨基酸. 相似文献
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橡胶延伸因子REF(Rubber Elongation Factor)是橡胶生物合成中最重要的酶之一,作者利用REF基因序列设计并合成引物。通过提取胶乳总RNA用RT法合成cDNA后,通过PCR技术坟民并克隆了REF基因和3′端非编码区,序列测定结果表明,REF基因全长414个碱基,编码138个氨基酸,3′端非编码区长112bp.与GoyvaertsE等人发表的序列比较:REF基因同源率为100% 相似文献
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橡胶延伸因子REF(Rubber Elongation Factor)是橡胶生物合成中最重要的酶之一.作者利用REF基因序列设计并合成引物. 通过提取胶乳总RNA 用RT法合成cDNA 后,通过PCR技术扩增并克隆了REF基因和3端非编码区. 序列测定结果表明,REF基因全长414 个碱基,编码138 个氨基酸,3端非编码区长112 bp. 与Goyvaerts E 等人发表的序列比较:REF基因同源率为100% ,3端非编码区有2 bp 的差异,同源率为98% . 将所克隆的REF基因及3非编码区进行地高辛标记, 对胶乳和叶片总RNA 进行点杂交分析,结果表明,胶乳总RNA 呈阳性反应,叶片总RNA 则呈阴性反应. 相似文献
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辣椒疫霉(Phytophthora copsici)毒素的产生是由一个不完全显性基因所控制,通过RAPD/BSA分析证明,用OPW12扩增得到一条约1300bp的RAPD标记带,该带与辣椒疫霉产毒共分离。纯化回收OPW12 1300DNA,共转化感受态E.coli DH5a,筛选出3个白色阳性克隆,序列分析发现该标记DNA为1291bp。这一标记DNA序列的阐明为进一分析产毒遗传机理提供了新的信息。 相似文献
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辣椒疫霉(Phytophthora copsici)毒素的产生是由一个不完全显性基因所控制,通过RAPD/BSA分析证明,用OPW12扩增得到一条约1300bp的RAPD标记带,该带与辣椒疫霉产毒共分离。纯化回收OPW12 1300DNA,共转化感受态E.coli DH5a,筛选出3个白色阳性克隆,序列分析发现该标记DNA为1291bp。这一标记DNA序列的阐明为进一分析产毒遗传机理提供了新的信息。 相似文献
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辣椒疫霉产毒共分离RAPD标记的研究 总被引:9,自引:0,他引:9
辣椒疫毒(Phytophthora capsici)毒素的产生是由一个不完全显性基因所控制,通过RAPD/BSA分析证明,用OPW12扩增得到一条约1300bp的RAPD标记带,该带与辣椒疫霉产毒共分离。纯化回收OPW121300DNA,共转化感受态E.coli DH5α,筛选出3个白色阳性克隆,序列分析发现该标记DNA为1291bp。这一标记DNA序列的阐明为进一步分析产毒遗传机理提供了新的信息 相似文献
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玉米苹果酸脱氢酶基因的分离与结构分析 总被引:9,自引:0,他引:9
以一个玉米(ZeamaysL.)杂种一代超亲表达的cDNA片段为探针,从玉米幼苗期cDNA文库中筛选到一个全长1287bp的cDNA克隆。序列分析表明,该cDNA编码细胞质苹果酸脱氢酶,推导的氨基酸序列与龙须海棠(Mesembryanthemum crystallium L.)及拟南芥(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.)同一编码基因的氨基酸序列同源性分别为90%和84%。这是禾谷类作物中首次克隆的编码细胞质苹果酸脱氢酶的完整基因。 相似文献
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从水稻矮缩病毒(Ricedwarfvirus,RDV)中国福建分离物中克隆分离了最外层外壳蛋白基因(S2)全长cDNA,并对其进行了序列分析,结果表明RDVS2cDNA全长3512bp,仅含一个3348bp的阅读框架,编码一个含有1116个氨基酸的蛋白(P2)。与基因库中已知基因序列比较,发现它与日本RDVH株系相应片段的核苷酸和氨基酸同源率分别为946%和954%,与轮状病毒VP2氨基酸序列有一定的同源性。S2核苷酸序列二级结构预测结果表明,5’端50个核苷酸的二级结构为一个发夹结构和一个茎环结构。P2有4个富含亮氨酸的区域,位于N端亲水区域的10个氨基酸(AA69~78)残基形成一个α螺旋,这些特点均与轮状病毒VP2的结构特征相似。SDSPAGE和Western印迹分析表明在大肠杆菌中分段高效表达了S2编码蛋白的N端和C端。 相似文献
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为研究玉米(Zeamays L.)19kD醇溶贮藏蛋白(zein)基因启动子种子特异性表达的控制区段,将全长694bp的启动子进行5’端缺失,共得到6个缺失突变体,长度分别为488bp、378bp、302bp、152bp、124bp和85bp。将6个片段分别与报告基因gus连接构建成表达载体pDGB系列,经土壤农杆菌(Agrobacterium)介导转化,引入烟草。GUS活性检测证明,488bp启动子片段能促使gus基因在种子中特异表达。378bp、302bp、152bp和124bp片段启动子引导的gus基因在烟草根、叶柄、种子中均可表达。 相似文献