细胞凋亡检测技术的进展

细胞凋亡是多细胞生物体内一个重要的生命现象,它已成为当前科学和医学领域的研究热点。随着对细胞凋亡的研究不断扩展和深化,许多新的指标逐渐被采纳;同时伴随着一些先进仪器的应用,原有一些指标的灵敏性和准确性也得到了提高,这些都将细胞凋亡的检测水平提升到一个新的高度。     

用YO-PRO-1和PI联合染色定量检测细胞凋亡

经不同浓度staurosporine处理诱导凋亡的G7细胞样品,分别用YO-PRO-1/PI和AV/PI进行荧光染色,借助流式细胞仪检测凋亡情况,将两种检测方法得到的结果进行统计学分析显示,二者有显著的相关性(r=0.9659,P<0.01),且没有显著性差异(P<0.05);另外,上述凋亡细胞样品经YO-PRO-1/PI染色后在荧光显微镜下计数凋亡细胞比例的结果与AV/PI流式细胞仪的检测结果也有显著的相关性(r=0.9903,P<0.01),且没有显著性差异(P<0.05)。以上这些结果表明,用YO-PRO-1/PI对细胞进行染色、借助流式细胞仪和荧光显微镜均能准确地检测细胞凋亡,可替代AV/PI流式细胞仪方法用于细胞凋亡的检测。     

利用核磁共振技术检测植物细胞凋亡

在细胞凋亡的研究中,通常以检测细胞核和细胞器的形态改变或生物化学特性变化为指标进行分析.已有的实验表明:动物细胞在凋亡过程中,细胞膜的脂质双分子层发生了一系列生物物理和生物化学改变,如膜电位的改变、磷脂酰丝氨酸由细胞膜内侧向外翻转、细胞膜微粘度的改变等,这些变化会导致细胞中亚甲基信号强度的增加.我们利用质子核磁共振光谱分析(1H-NMR)方法,首次发现用物理和化学方法诱导的烟草(Nicotiana tabacumL. cv.BY-2)和胡萝卜(Daucus carota L.)细胞在凋亡过程中伴随有亚甲基信号强度的明显增加.在用烟酰胺处理的烟草细胞中,亚甲基信号强度的增加与DNA Ladder几乎同时出现,随诱导时间的延长,亚甲基信号强度也逐渐增大,在24 h亚甲基信号强度增加约2倍.而这种特征在坏死的细胞中并不存在.说明亚甲基信号强度的增加是动、植物细胞凋亡过程中所具有的共同特征,1H-NMR技术提供了一种精确可靠的分析植物细胞凋亡的手段,同时由于它所具有的非侵害性的特点,可能在揭示细胞凋亡机制的研究中具有一定的意义.     

利用核磁共振技术检测植物细胞凋亡

在细胞凋亡的研究中,通常以检测细胞核和细胞器的形态改变或生物化学特性变化为指标进行分析。已有的实验表明: 动物细胞在凋亡过程中, 细胞膜的脂质双分子层发生了一系列生物物理和生物化学改变,如膜电位的改变、磷脂酰丝氨酸由细胞膜内侧向外翻转、细胞膜微粘度的改变等,这些变化会导致细胞中亚甲基信号强度的增加。我们利用质子核磁共振光谱分析(1H-NMR)方法, 首次发现用物理和化学方法诱导的烟草(Nicotiana tabacumL. cv. BY-2)和胡萝卜(Daucus carota L.)细胞在凋亡过程中伴随有亚甲基信号强度的明显增加。在用烟酰胺处理的烟草细胞中, 亚甲基信号强度的增加与DNA Ladder 几乎同时出现,随诱导时间的延长, 亚甲基信号强度也逐渐增大,在24 h亚甲基信号强度增加约2倍。而这种特征在坏死的细胞中并不存在。说明亚甲基信号强度的增加是动、植物细胞凋亡过程中所具有的共同特征,1H-NMR技术提供了一种精确可靠的分析植物细胞凋亡的手段,同时由于它所具有的非侵害性的特点,可能在揭示细胞凋亡机制的研究中具有一定的意义。     

细胞凋亡检测方法探讨

采用图例法和比较法分析评价细胞凋亡检测方法的应用范围和检测结果的相关性,指出只有选择多种适当的方法进行综合检测,才能对结果做出正确而合理的分析判断。流式细胞术简便、快速,从膜上分子、胞内蛋白到DNA水平全方位多角度分析凋亡,可作为检测细胞凋亡的首选方法。     

细胞凋亡检测方法新进展

细胞凋亡是生命科学研究的热点之一,检测细胞凋亡的方法层出不穷。目前,用于体外细胞凋亡检测的方法已相对成熟,比如:流式细胞术、TUNEL检测法、DNA片断检测等。而用于体内细胞凋亡检测的试剂则正在研究之中,各种检测试剂不断出现。其中,Annexin V、Synap-totagmin I-C2A、ApoSense家族分子与其他检测试剂相比具有一定的优势。该文在介绍几种常用的体外细胞凋亡检测方法的同时,重点介绍上述三种试剂。     

植物细胞凋亡的ELISA检测

本文利用TUNEL方法在单个细胞水平上对苯胺灵诱导的玉米根尖细胞死亡进行了检测。结果表明,一定浓度的苯胺灵能诱导玉米根尖细胞发生主动性的细胞凋亡,具有细胞凋亡典型的形态和生化特征即细胞核浓缩并形成核碎片、染色质边缘化及DNA特异片段化等（Fig.1)。首次利用ELISA方法在群体水平上对这种细胞凋亡进行了进一步检测。结果表明：动物细胞研究常用的ELISA方法同样也适合用于植物细胞凋亡的检测。在凋亡前期,随着凋亡过程的进行,细胞质中的OD值逐渐上升（Fig.2)。剂量实验表明,0．2mg/mL苯胺灵最适合于诱导细胞凋亡（Fig.3)。     

细胞凋亡检测方法的研究进展

细胞凋亡在生命活动中具有重要的地位,多年以来一直都是生命科学领域的研究热点.为了准确、快速的检测细胞凋亡,人们发明了多种方法,并且随着科技的发展和技术的进步,新的检测方法不断涌现.就近年来关于细胞凋亡的一些检测方法进行综述.     

植物细胞凋亡的检测方法

细胞凋亡是一种在动、植物中普遍存在的现象,在动、植物的发育过程中起着非常重要的作用。从形态学、生化及分子生物学、免疫学、生理学等方面介绍了几种检测细胞凋亡的方法,以及各种方法在检测不同植物凋亡时的应用,并对植物细胞凋亡检测技术的前景进行了展望。     

一种预测细胞凋亡蛋白的亚细胞定位的新方法

细胞凋亡蛋白对生物体的发育、维持内环境稳定及人们理解细胞凋亡机制非常重要。文中提出了一种新的蛋白质序列特征提取方法—三肽离散源方法。计算了蛋白质序列中紧邻三联体的出现个数,利用离散增量极小化对凋亡蛋白进行定位预测;同时推广了张春霆等提出的内容平衡精度指数,使其能评估任意类的分类问题。实验结果表明:在凋亡蛋白定位预测研究中,三肽离散源方法在提高总体预测精度的同时,能够较好的解决样本不均衡问题;而内容平衡精度指数能比传统的总体预测精度更准确的评估预测算法的预测能力,有效的反映预测算法对样本不均衡问题的相容能力。     

多通道神经元锋电位检测和分类的新方法

大脑神经元胞外单细胞动作电位(即锋电位)的检测和分类是提取神经元脉冲序列、研究神经系统信息处理机制的关键．为了提高锋电位的检出率和分类的正确性,设计了一种处理多通道锋电位记录信号的算法,用于分析微电极阵列记录的大鼠海马神经元锋电位信号,电极阵列上的测量点排列紧密,4个通道可以同时记录到来自相同神经元的信号．该算法首先利用一种多通道阈值检测法检出四通道记录信号中的锋电位,然后利用一种基于复合锋电位的主成分特征参数分类法将锋电位分类．仿真数据和实验记录信号的检验结果表明：与相应的单通道算法相比,该算法的锋电位检出率和分类的正确性显著提高,并且可以增加单次实验测得的神经元数目．因此,该算法为实现神经元锋电位的自动检测提供了一种简单有效的新 方法．     

细胞凋亡原位检测的TUNEL法

细胞凋亡原位检测的ＴＵＮＥＬ法刘勇（江西省人民医院病理科,南昌３３０００６）细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）,又称程序性细胞死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｄｅａｔｈ,ＰＣＤ）,是细胞的一种生理性死亡过程,有关细胞凋亡的研究近年来受到高度重视。末端转移...     

乙醇诱导杂交瘤细胞凋亡的检测

为建立杂交瘤细胞凋亡检测模型,在乙醇诱导下,采用荧光染色、MTT等方法检测H18杂交瘤细胞凋亡时的形态学及增殖活性变化,并用流式细胞仪对其进行定量分析,夹心ELISA检测IgG抗体分泌的变化情况。结果发现5lOmmol／L乙醇作用5～6h的凋亡诱导效果最为明显,在诱导条件下,杂交瘤细胞的活细胞数显著下降,凋亡细胞比例较高。抗体浓度明显下降,与乙醇浓度呈负相关,但与细胞增殖活性无明显的线性关系。故以此为凋亡检测模型,可为后续抗凋亡细胞株的建立与筛选研究提供初步的实验基础,并为乙醇对IgG型抗体分泌的影响研究提供了可能的实验模型。     

一种检测早期凋亡细胞的方法

本文介绍了一种定量检测早期凋亡细胞的流式细胞术——Annexin V-PI双染色法,并作了一些改进。     

几种细胞凋亡检测方法的比较

近年来,凋亡细胞的检测方法从以形态学观察发展到生物化学、免疫化学和分子生物学等定性和定量测定技术,并在细胞、染色质到分子水平日趋完善和成熟。这些方法多用于描述DNA的片段化和细胞死亡过程中许多特定成分的检测。细胞凋亡具有其生物复杂性,检测方法要求灵敏度高、特异性强、准确性好、凋亡与坏死的区分明显等。由于每种方法各有优缺点,故应避免使用单一方法检测。     

非细胞体系在细胞凋亡中的应用

随着科学技术的进步和发展,对细胞凋亡的研究也涌现出许多新的方法和技术,为凋亡的研究提供了有力的武器。本阐述了非细胞体系用于细胞凋亡研究的优越性,着重介绍非细胞凋亡体系的种类以及在细胞凋亡研究中的应用,同时总结了非细胞体系研究凋亡过程的各种检测方法。     

LOWNS分类信号检测技术

目的:检测出Lown分级中各种室性心律失常,进一步完善便携式心电仪中心电的诊断分析,增强其功能.方法:本文提出一种在基于小波变换理论上检测出R波的基础上,采用适当的阀值并结合新的模板匹配方法检测出室性早搏,并进而检测出Lown分级中各种室性心律失常.结果:利用Matlab仿真工具,选择MIT-BIH心率失常数据库中信号进行验证,能正确检测出各种室性心律失常,错检率较低,实现简单,适合实时处理.结论:此方法正确率高,符合心电分析要求.进行算法优化后可嵌入到心电检测仪中实现应用.为便携式心电仪功能的完善有很大的帮助.     

一种基于荧光强度分析的高通量定量检测细胞凋亡方法

根据正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞的细胞膜对核酸荧光染料的不同选择通透性,用4μmol/L YO-PRO-1（YP）和4μg/ml 碘化丙啶（Propidium iodide, PI）染色96孔板中的细胞样品。分别在485/538 (Ex/Em, nm) 和530/590 (Ex/Em, nm) 的检测波长下借助荧光分光光度计检测细胞样品孔的YP和PI荧光强度。将YP和PI荧光强度值与用荧光显微镜对同一细胞样品细胞凋亡和坏死的定量分析结果相对应,通过对YP荧光强度值与凋亡细胞数的直线回归分析 (r = 0.999,P<0.01),得到依据YP荧光强度值求得凋亡细胞数的直线相关方程。该方法可检测出样品中少至180个的凋亡细胞,具有灵敏度高和快速高效的特点。     

快速诱导细胞凋亡及检测方法研究

目的：探讨Ca2＋和Na＋诱导细胞凋亡的最佳浓度及时间,并用甲基绿一派诺宁染色法检测凋亡细胞的形态变化。方法：分别用不同浓度梯度及时间梯度的Ca2＋和Na＋胁迫处理洋葱鳞茎内表皮细胞,得诱导的最佳浓度及时间;用甲基绿一派诺宁染色法检测诱导凋亡的洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞和鸡血红细胞的形态特征变化。结果：诱导处理的最佳Ca2＋和Na＋浓度为0．4mol／L,最适时间约为8h,且CaCl2的诱导效果较NaCl好;经甲基绿一派诺宁染色,洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞、鸡血红细胞凋亡细胞的细胞核均呈蓝紫色,细胞质呈红色。结论：找出了诱导细胞凋亡的最适Ca2＋和Na＋浓度和时间,并检测到细胞凋亡。