单倍体水稻体细胞组织的植株再生及其激素调节

本文报道激素对调节单倍体幼穗组织去分化与分化的方向以及器官形成的影响。发现在试验浓度内(2毫克/升),2,4-D诱导组织去分化,NAA诱导根的大量形成,KT抑制愈伤组织形成和器官分化。KT2毫克/升 NAA2毫克/升使外植体不经过愈伤组织阶段就直接分化大量的苗。当KT/NAA=2:2时,直接分化苗的频率较高,达76％,不同浓度的2,4-D试验表明,2,4-D2毫克/升或4毫克/升时,愈伤组织诱导率高达94％以上。固体和液体继代培养中,低浓度的2,4-D(0.5—0.1毫克/升)加0.1毫克/升的KT,对愈伤组织保持旺盛的生长和后来的分化有良好的作用。发现单倍体体细胞组织再生的植株,白苗很少。讨论了单倍体体细胞愈伤组织无性系用于诱发突变和体细胞遗传研究的可能性。对于愈伤组织的再分化,不仅需要细胞分裂素,而且诱导培养基中生长素浓度的影响也是显著的。     

小麦花粉无性系的建立及其胚状体的发生

本文报道的小麦花粉无性系,已继代培养了两年零一个月共27代,目前仍具有分化能力。继代分化固体培养基以:MS附加NAA0.6毫升/升+KT0.2毫克/升为最好。较好的恢复再生培养基为MS液体培养基附加2.4-D 0.6毫克/升+NAA0.2毫克/升+6-BA 2毫克/升+CH500毫克/升予处理三天后转入附加2.4—D0.6毫克/升+KT 2毫克/升+CH 500毫克/升的MS固体培养基,培养十八天后,丧失分化能力已达八个月之久的愈伤组织又恢复了再生能力,分化出植株。通过愈伤组织的细胞学观察,小麦花粉愈伤组织无性系,分化成小植株的途径有二:一是由特化的胚性细胞经多次分裂后发育成胚状体长成小植株;二是由特化的表层细胞经多次分裂后发育成芽苗。胚性细胞发生于愈伤组织的表皮层和表皮附近的细胞层,有的也可在内层已衰老的细胞中产生。胚状体与芽的区别特征是:胚状体具有两极性,两极间有维管组织相连接;芽具有单极性,芽端的维管组织与愈伤组织内维管组织相连接。     

柑桔茎尖培养的初步研究

截取1～2毫米高的甜橙(Citrus sinensis)茎尖,培养子经消毒的基本培养基中。比较试验了几种植物生长调节物质、蔗糖的不同浓度和培养基的物理性状对愈伤组织发生的效应。分别观察了不同天数的离体茎尖愈伤组织发生情况。发现对愈伤组织形成较好的处理有:2,4-D0.1毫克/升+Kinetin 0.25毫克/升+NAA 2.5毫克/升,单独使用2,4-D为1.5毫克/升;蔗糖浓度为5％;以及液体培养基。将具有愈伤组织的离体茎尖,转移至激素类物质为BA 0.25毫克/升+NAA 0.1毫克/升的基本培养基中,则能促使茎芽及愈伤组织的进一步生长。但不容易形成根。然后再移入只含NAA 2毫克/升的的基本培养基中,才能分化出根,形成完整的小植株。我们已经获得暗柳、雪柑和柚子等三个柑桔品种的离体茎尖培养的植株,并揭示出在同一块离体茎尖愈伤组织生长出许多小植株的可能前景。茎尖嫁接植株是用全黑暗条件培养13～14天的枳壳(Ponciruo trifoliata)等实生苗作砧木,甜橙(Citrus sinensis)茎尖长为0.2～0.4毫米、并带叶原基2～3个作接穗,在无菌条件的实体显微解剖镜下,嫁接于砧木倒T字型的缺口上,能获得嫁接绿苗18.5％的成活率。嫁接植株培养在MS液体培养基,蔗糖浓度提高到7.5％,放置于800米烛光的荧光灯、每天光照16小时的条件下。嫁接植株生长到2～4片     

从胡萝卜根木质部愈伤组织分离的原生质体培养成再生植株

以胡萝卜(Daucus L.var.sativa DC.)根的中央木质部切段为外植体诱导了松软的愈伤组织。用酶法从这种愈伤组织分离出大量有活力的原生质体。当在补加有0.11毫克/升玉米素和0.18毫克/升萘乙酸的C81V培养基中进行液体浅层培养时,原生质体能再生新细胞壁,进行连续分裂,产生大量小愈伤组织。再转移到含有1毫克/升的激动素和0.2毫克/升萘乙酸的MS固体培养基上后,愈伤组织继续长大,并分化出小植株。从原生质体开始培养到形成再生植株的时间为1个半月至2个月。     

油菜游离细胞培养及易再生的体细胞无性系的建立

以芥菜型油菜(Brcssica juncea)下胚轴来源的愈伤组织为材料,进行悬浮细胞振荡培养,得到游离的单细胞。这些细胞作浅层液体静置培养,可获得高频率的愈伤组织。在附加有水解乳蛋白200毫克/升、BA 2—3毫克/升及GA,0.1—1毫克/升的MS培养基上,这些愈伤组织分化了芽。分化的芽在无激素或附加有0.01—0.1毫克/升IAA或NAA的MS培养基上长出根,从而发育成完整植株。当对游离细胞获得的再生植株的茎切段愈伤组织,再经上述程序进行细胞培养时,发现愈伤组织诱导率及愈伤组织分化频率均远远高于原供体,从而建立了B.juncea易再生的体细胞无性系。     

伊贝母(Fritillariae pallidiflorae)愈伤组织的诱导和植株再生的研究

本文对伊贝母鳞瓣切块和鳞芽顶端愈伤组织的形成和鳞茎的再生进行了研究。结果在加有2.4—D1毫克/升和KT0.1毫克/升的MS培养基上诱导出了愈伤组织。在加有IAA1毫克/升和NAA0.2毫克/升及KT0.1毫克/升的MS培养基上分化出了小鳞茎。培养结果表明:小鳞茎有三个来源:(1)由鳞瓣切块的愈伤组织形成。(2)由鳞瓣切块直接发育成。(3)由鳞芽顶端形成。所形成的小鳞茎和大田栽培的没有什么不同。培养4个月的小鳞茎相当于种子繁殖2—3年的鳞茎一样大小。     

芥菜型油菜原生质体再生成植株的研究

芥菜型油菜子叶和下胚轴原生质体在含0.5毫克/升NAA、0.5毫克/升2,4-D和1毫克/升BA的Nitsch培养基中发育成愈伤组织。“黄辣芥”子叶原生质体来源的愈伤组织在无生长素而含有3毫克/升BA或2毫克/升KIN的MS固体培养基上分化了芽;即使是低水平的生长素(0.05毫克/升NAA)也不利于芽的分化。当芽长到2—3厘米高时,将其从愈伤组织上切下,转移到不含细胞分裂素而有0.01—0.05毫克/升IAA的MS培养基上,很快长出根,从而得到完整的再生植株。     

擦树茎尖培养

1.植物名称擦树(Sassafras tzumu Hcmsl) 2.材料类别幼苗茎尖 3.培养条件茎尖在(1)1/2MS+NAA,毫克/升+IBA1毫克/升的培养基上诱导愈伤组织,然后转移带愈伤组织的茎尖培养体至(2)     

沙葱(Allium mongolicum Regel)离体培养再生可育植株

以沙葱（Allium mongolicum Regel)的叶基切段作外植体,成功地诱导出愈伤组织和再生植株。诱导愈僵组织的培养基为附加2mgL^-22,4-D和0.2mgL^-1KT的MS培养基。愈伤组织转移到附加2mgL^-16BA和0.4mgL^-1NAA的MS培养基后分化出大量的苗;分化苗在含有IBA1mgL^-1的1/2MS培养基上生根最佳。再生植株移栽成活率在95%以上。移栽到田间的植株第二年以后可正常开花结实。     

沙枣(Elaeagnus angustifolia L.)胚状体的产生及激素对器官发生的作用

供试材料为野生种(Elaeagnus angu-stifolia L.)的子房、茎和叶。在附加0.5毫克/升NAA和1毫克/升玉米素或再加2毫克/升2,4-D的MS培养基中均能诱导出愈伤组织。愈伤组织转入MS+KT(2毫克/升)或KT(2毫克/升)+IBA(0.2毫克/升)的分化培养基上可分化出大量的绿苗。苗分正常苗和异常苗两种类型,目前为止,沙枣愈伤组织无性系已继代培养了22代,将近两年的时间仍具有较强的分化能力。外源激素对正常苗的分化有直接的影响,高浓度的KT水平可促进正常苗的分化,其最佳浓度为4毫克/升,正常苗诱导频率可高达83—86%,基本上解决了分化的问题;高浓度的6-BA虽也能提高分化率,但异常苗占优势。试管苗形成的途径有二,一是通过不定芽的方式产生,一是通过胚状体的方式产生。沙枣胚状体原始细胞的来源有三种情况:(一)由紧邻表皮细胞的单个薄壁细胞产生,这种方式占优势;(二)由表皮细胞横裂产生;(三)由表皮细胞及其下面相邻的薄壁细胞同时分裂共同参与胚状体的形成,即二者的嵌合体。胚状体的发生与合子胚的发生过程基本相似,但在其发育的早期阶段无典型的基细胞与顶细胞之分,故也缺乏典型的胚柄结构,随着胚状体的长大,表皮细胞被撑破,其周围的薄壁细胞内含物被吸收而解体,最后胚状体脱离开愈伤组织的表面,孤立出来成一个完整的个体。     

籼稻花药培养研究——Ⅰ.基本培养基及附加成分在诱导籼稻花药产生愈伤组织及根芽分化中的作用

对6个籼稻(oryza sativa Subsp.Shien)品种和39个籼×籼杂种的花药在离体条件下进行培养,有5个品种及35个杂种得到了愈伤组织,平均诱导率为2.18％。在3个品种及11个籼×籼杂种中得到了绿苗或绿芽。本文着重报道基本培养基及其附加成分在诱导籼稻花药产生愈伤组织及根芽分化中的作用。 1.试验了几种诱导愈伤组织的培养基,以Miller培养基 2,4—D2毫克/升 酵母浸出液1,000毫克/升 激动素1毫克/升 吲哚乙酸2毫克/升 椰乳15％为最好。诱导率高者可达11—15％,平均诱导率在3％以上。 2.Ms、Nitsch及Miller培养基均可诱导籼稻花药愈伤组织分化出绿色的花粉植株。 3.籼稻花药愈伤组织的分化,随着激动素/生长素比值的增高,绿苗分化率及总分化率均有提高的趋势。而粳稻的这种关系不甚明显。 4.Miller培养基附加2毫克/升的吲哚乙酸对促进具茎、叶而无根的籼稻花粉小植株产生根有很好的作用。在这种培养基上,不仅可以诱导根的发生,而且根系发达,生长较弱的苗转移到这种培养基后,因根系健壮,生势好,转入盆栽,基本可以全部成活。     

甜菊(Stevia rebaudiana Bertoni)的组组培养

用本所栽培的甜菊的幼嫩茎叶,或由种子形成的无菌幼苗作为材料。诱发愈伤组织培养基为MS培养基(2,4-D0.8～1.0;KT或6-BA0.2～0.5;或KT及6-BA各加0.2毫克/升)和kT培养基(KT1.0;2,4-D1～3;NAA0.2毫克/升)。10天左右,渐形成生长旺盛的、淡黄或淡绿色的愈伤组织(图1,2),诱导率60％以上。愈伤组织可长期继代培养而不失其旺盛的生长能力。分化培养基成     

花烟草叶肉原生质体再生植株

用自制的纤维素酶(EA3-867)从花烟草(Nicotiana alata)叶肉细胞制备大量有活力的原生质体。在NT培养基(内含2,4-D2,KT0.25毫克/升)上观察到原生质体长大,分裂,形成愈伤组织。愈伤组织悬浮在含有2,4-D2mg/升的MS培养基上诱导出球形胚,移入MS(BA2,IAA 0.2 mg/l)培养基上出苗。小苗移植土壤中正常生长、开花、结实。     

魔芋属植物愈伤组织的诱导和再生植株的研究

用云南魔芋(Amorphophallus yunnanensis)、白魔芋(A.albus)、花魔芋(A.revieri)和勐海魔芋(A.bannaensis)等四个种的叶、鳞叶、花序、匍匐茎、块茎和茎尖为外植体,诱导产生小植物。可通过三种途径获得魔芋再生植株:(1)由外植体诱导愈伤组织,再分化小植株:在添加0.5—1.0mg/1 NAA和BA或KT、ZT的MS培养基上,高频率地诱导瘤状愈伤组织形成,发现NAA对愈伤组织的诱导是必不可少的,而细胞分裂素与之组合,促进瘤状愈伤组织的形成和发育,在无激素或低浓度激素的培养基上,瘤状愈伤组织分化出小植物;(2)茎尖和鳞叶、块茎切块培养,诱导形成多芽苗,产生再生植株;(3)块茎切块诱导产生微型小块茎,然后分化芽和根,长成小植物。本研究为魔芋的快速繁殖提供了新的手段。     

从小黑麦未授粉的幼嫩子房培养出小植株

通过未授粉子房的离体培养技术,在Ms无机盐十甘氨酸(7.7毫克/升)十天门冬素(1480毫克/升)十烟酸(0.15毫克/升) VB_1(0.25毫克/升)十VB_6(0.25毫克/升)十泛酸钙(0.25毫克/升) 2%蔗糖的固体培养基上,由小黑麦1号未授粉的幼嫩子房中诱导出愈伤组织,诱导率为53.4—66.8%。将愈伤组织转移到N_6 2.4-D(0.5毫克/升) 动力精(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂的培养基上,或在愈伤组织转移到N_6 2.4-D(2毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂培养基前后,分别注入2毫升的N_6 IAA(1毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖的培养液,均可由愈伤组织分化出小植株,但幼苗移栽时多数未成活,仅一株抽穗开花,然而不育。本文还讨论了外源激素对植株分化的作用问题。     

不同激素对伊贝母组织培养中染色体不稳定性的研究

伊贝母鳞茎培养在附加2,4—D、IAA、NAA和2,4—D+KT、IAA+KT、NAA+KT的MS培养基上(2,4—D、IAA、NAA1毫克/升,KT0.1毫克/升),研究了愈伤组织细胞染色体的变异及愈伤组织的分化和再生植株的染色体倍性。结果表明,2,4—D能有效地引起染色体数目的变化,当和KT结合使用时,可诱导高频率的多倍化细胞。IAA的作用次之,NAA较小。各种激素均能程度不同地引起各种类型的有丝分裂异常及染色体结构变异,其效应与对染色体数目变异的影响呈现明显的一致性。研究还得出,染色体的整倍性是愈伤组织得以分化的重要因素,所以再生植株主要是二倍体,也有少量的四倍体,混倍体仅占少数。根据实验结果,对染色体变异的原因以及染色体数目变异与愈伤组织分化的关系进行了讨论。     

黄独脱毒苗叶片和茎段再生体系的建立

以黄独茎尖再生苗为试材,研究不同因素对黄独脱毒苗叶片和茎段再生体系的影响,以期对黄独脱毒苗的再生体系进行优化。结果表明,叶片和茎段诱导愈伤组织的最佳培养基是MS+KT 2 mg·L^-1+2,4-D 2 mg·L^-1;叶片和茎段诱导愈伤组织的最佳蔗糖浓度分别为30和50 g·L^-1;叶片和茎段在黑暗中较容易诱导出愈伤组织;叶片和茎段愈伤组织分化的最佳培养基是MS+KT 4 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1;继代2次的叶片和茎段愈伤组织较容易分化;黄独不定芽生根的最佳培养基是1/2MS+IBA 0.1 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1+PP₃₃₃ 1 mg·L^-1。本实验成功建立了黄独脱毒苗叶片和茎段的再生体系,为黄独脱毒苗的工厂化生产奠定了技术基础。     

六个海岛棉品系体细胞胚胎发生及再生体系的研究

以海岛棉DJ-1(373)、天长2号(376)、5917(380)、阿长-599(381)、塔07-152(383)、S0717(408)6个品系的下胚轴为外植体,通过双因素随机区组设计的方法筛选出的两组最佳激素组合,诱导出愈伤组织,并成功获得再生植株。研究结果表明,0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT为海岛棉380、383和381愈伤组织最佳诱导条件,0.3 mg/L NAA+0.1 mg/L KT为海岛棉373、376和408愈伤组织最佳诱导条件;诱导出的愈伤组织接种于KNO3加倍的培养基可产生胚性愈伤组织;将其接种于含有0.1mg/L KT和0.05 mg/L IBA的培养基中可促进体细胞胚胎的发生和成熟,利用畸形苗的培育可缩短再生体系的周期,6个品种在6-8个月内均能获得再生植株。     

玉米花粉培养过程中花粉的发育及其愈伤组织的形成

本文以[(朝鲜黄×二南24)F_1×京黄13]F_1的花药为试验材料,花药在N_6+TiBA(1毫克/升)+KT(2毫克/升)+CH(300毫克/升)+C 0.5%+蔗糖(12%)的固体培养基上予培养14天后,再在N_6+2.4—D(2毫克/升)+KT(1毫克/升)+丝氨酸(100毫克/升)+谷氨酰胺(800毫克/升)+肌醇(5000毫克/升)+蔗糖(12%)的液体培养基中进行浅层培养,获得了胚状体和愈伤组织。     

枸杞胚乳植株的诱导及染色体倍性观察

枸杞[Lycium chinense Mill.var.potaninii(Pojark)A.M.Lu]的未成熟胚乳接种在MS基本培养基上,并添加1毫克/升2,4-D和0.1毫克/升KT,诱导产生愈伤组织,其频率为23.8％。处于色变期的果实为胚乳培养的最适时期。胚在胚乳培养中不是必不可少的,但当有胚存在时可以提高胚乳愈伤组织的诱导频率。胚乳愈伤组织的继代培养对器官分化和植株再生没有明显影响。胚乳植株根尖细胞染色体数目不很一致,甚至有的植株同一根尖的不同细胞染色体数目也有不同。其中有三倍体(2n=3x=36),也有二倍体(2n=2x=24)和非整倍体的细胞,染色体数为9、18等,但从观察的15株胚乳苗来看,三倍体有11株,占73.3％,非三倍体的只有4株,占26.7％。