反相高效液相色谱法检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度

目的 建立反相高效液相色谱法(reverse phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度。方法 利用Agilent AdvanceBio RP-mAb SB-C8(100 mm×2.1 mm)分析柱和Agilent1260高效液相色谱系统,以含0.1%三氟乙酸水溶液-异丙醇(98∶2)为流动相A,以含0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱,体积流速为0.5 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为65℃,进样体积为10μL,采用面积归一法检测CRM197蛋白纯度,并对方法的适用性、专属性、重复性、中间精密度、线性、灵敏度和耐用性指标进行考察。用建立的方法检测CRM197蛋白酸处理供试品溶液、碱处理供试品溶液及3批原液的纯度。结果 建立的方法系统适用性良好;专属性验证表明空白溶液在目标峰积分范围内无干扰峰,热处理CRM197蛋白目标峰与其他杂质峰分离度>1.5;6次重复进样目标峰面积相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为...     

高效液相色谱法测定多抗原肽MAP4原料药中醋酸和三氟醋酸的含量

目的:测定多抗原肽MAP4原料药中醋酸及三氟乙酸的残留量。方法:采用反相高效液相色谱法,采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Kromasil(250mm×4.6mm,10μm),200色谱柱;pH3.0磷酸盐缓冲液及甲醇为流动相,进行梯度洗脱;检测波长:210nm;柱温为25℃;流速:0.8ml/min;进样体积:40μl。结果:该方法中醋酸和三氟乙酸的分离度符合要求;醋酸的检测限0.1μg;三氟乙酸的检测限0.1μg;样品中未检出三氟醋酸。醋酸含量为5.7%。结论:该方法快速,准确,专属性强,精密度高,对多抗原肽MAP4原料药的质量控制有一定的意义。     

反相高效液相色谱法分析聚乙二醇修饰的水蛭素

目的：采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对聚乙二醇（PEG）修饰的水蛭素进行分析分离,用以分析修饰产物中不同修饰度水蛭素的组成和比例。方法：色谱柱为Hypersil C18,5μm,4.6mm×150mm;流动相A为H2O＋0.01％的三氟乙酸,流动相B为乙腈＋0.01％的三氟乙酸。40min内由10％-50％流动相B进行梯度洗脱,洗脱流速1mL／min,上样量50μL,检测波长为214nm。结果：在单甲基化PEG-丙酸琥珀酰亚胺和水蛭素摩尔比不同的的反应产物中,PEG1-水蛭素、PEG2-水蛭素均可以达到基线分离,且不同批次的反应产物进行RP-HPLC的重复性良好。结论：RP-HPLC可以有效地对PEG修饰的水蛭素产物进行分析分离,为PEG化水蛭素的长效、缓释剂型的开发提供技术支持。     

雪莲培养物高效液相色谱指纹图谱研究

目的:采用高效液相色谱法(HPLC)建立雪莲培养物指纹图谱。方法:以紫丁香苷为参照物,采用梯度洗脱HPLC法建立雪莲培养物指纹图谱,并进行相似度评价和聚类分析。色谱柱为CAPCELL PAK C18(4.6 mm×250mm,5μm),流动相A为0.1%TFA/水,流动相B为0.1%TFA/乙腈,梯度洗脱,检测波长260 nm。结果:建立了雪莲培养物指纹图谱,方法的精密度、稳定性、重现性较好,共标示出9个共有峰。结论:该法为雪莲培养物的鉴定提供了依据,其指纹图谱可用于雪莲培养物的质量控制。     

硫酸瑞格列汀含量测定方法筛选

目的建立硫酸瑞格列汀含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为waters(0.15m×3.5mm),以0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节p H至6.5)∶乙腈=8∶2为流动相A,乙腈为流动相B,A:B为70:30,检测波长为210nm,专属性试验结果表明溶剂不干扰含量测定,准确度回收率为99.2%,相对标准偏差为1.2%,线性试验研究结果表明溶液浓度在0.19mg/ml至0.42 mg/ml的范围内,线性关系良好,重复性及中间精密度试验符合规定,定量限试验结果表明在信噪比约为10:1时溶液的浓度为8.9ug/ml。结果方法学试验符合规定,所建立含量测定方法可用于本品含量测定,系统适用性试验需考察杂质H与主峰分离度。     

HPLC法测定3种老鹳草药材中没食子酸和柯里拉京的含量

目的：建立老鹳草、野老鹳草、牻牛儿苗中没食子酸、柯里拉京含量测定方法.方法：采用HPLC法,色谱条件：色谱柱为Diamonsil C18 （2）色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1％磷酸梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为274 nm;柱温为25℃.结果：没食子酸和柯里拉京的线性范围分别是：0.2024μg～2.024 0 μg（r =0.999 6）、0.126 0 ～2.520 0μg（r =0.999 2）,平均回收率分别是97.4％（RSD=1.4％）、96.7％（RSD=0.9％）.结论：本法简便、准确、重复性好,可用于老鹳草药材的质量评价.     

鹅不食草液相色谱指纹图谱及化学成分表征

目的:建立鹅不食草的HPLC指纹图谱,并对其化学成分进行表征。方法:指纹图谱采用Alltima~(TM)C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为35℃,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为1.0 m L/min;检测波长为290 nm,进样量为20μL。成分表征采用UPLC-QTOF-MS分析,Waters ACQUITY HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)梯度洗脱,ESI离子源,正离子与负离子模式下采集数据。结果:通过12批鹅不食草的HPLC指纹图谱分析,确定了13个特征峰,12批样品的相似度在0.837~0.997之间;UPLC-QTOF-MS鉴别出26个化学成分,其中Dulcoside A、Kaurane pentanedioic acid derivative及3’,4’-didesulphatedcarboxyatractyloside等二萜苷类化合物系首次在鹅不食草药材中发现。结论:本研究建立的HPLC指纹图谱和化学成分表征信息具有"全息"特征,可为鹅不食草药材整体质量评价提供科学依据。     

广西产拳卷地钱HPLC指纹图谱研究

为了对广西产拳卷地钱药材进行质量控制,采用HPLC指纹图谱法对8批药材进行了研究,色谱条件为安捷伦ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(B)-0.1%磷酸水溶液(D),梯度洗脱,检测波长为230 nm,柱温为25℃。结果表明:建立了参考指纹图谱,共有峰6个,8批广西产拳卷地钱药材HLPC指纹图谱相似度均大于0.75,其精密度、重复性、稳定性实验均符合指纹图谱技术要求。HPLC指纹图谱分析,数据稳定可靠,方法简便高效,可为广西产拳卷地钱质量评价提供参考。     

RP-HPLC法测定酸枣仁汤中芒果苷的含量

目的：建立测定酸枣仁汤中芒果苷含量的反高效液相色谱分析方法。方法：色谱柱：WatersC18（250nm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速：1.0ml/min,检测波长：257nm。结果：芒果苷在0.316μg-1.264μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9999）,平均加样回收率为97.64%,RSD为0.36%。结论：本方法简便、准确、可靠、重复性好,可作为酸枣仁汤中芒果苷的含量测定方法。     

UHPLC法同时测定金银花中6种有效成分的含量

本实验建立了UHPLC同时测定不同产地金银花中绿原酸、芦丁、木犀草苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C含量的分析方法。采用Agilent 1290超高效液相色谱系统,Agilent ZORBAX RH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸水,以0.2 m L/min的流速进行梯度洗脱,柱温30℃,检测波长350nm。结果表明在该色谱条件下,金银花的6种有效成分在8 min内可达到基线分离。方法的加样回收率为96.88%~99.16%,相对标准偏差为0.23%~1.06%。UHPLC法分析速度快,重复性好,结果准确,可用于金银花中绿原酸、芦丁、木犀草苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C的含量测定。     

HPLC同时测定伤科黄水中6个生物碱的含量

建立HPLC同时测定伤科黄水中6个生物碱的方法。采用XBridge C₁₈色谱柱(3. 5μm,2. 1 mm×100 mm),柱温35℃,测定波长280 nm,以0. 1%磷酸溶液(每100 mL加0. 3 g十二烷基苯磺酸钠)(A)-乙腈-水-磷酸-十二烷基苯磺酸钠(90∶10∶0. 1∶0. 3)(B)为流动相,进行梯度洗脱(0～30 min,B%:35～70; 30～31 min,B%:70～35; 31～40min,B%:35)。经方法学验证,黄柏碱、药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱等共6个生物碱分离情况良好,在测定时间段内无明显干扰峰;加样回收率均在95%～115%之间,RSD%均小于5%;精密度RSD%均小于5%;在测定浓度范围内(1～50μg/mL)线性关系良好,相关系数(R^2)大于0. 999。3个不同批次供试品的测定结果较一致。本研究建立的HPLC分析方法可用于同时测定伤科黄水中6个生物碱的含量。     

Fingerprint analysis of Psoralea corylifolia L. by HPLC and LC-MS

High-performance liquid chromatography (HPLC) was developed for fingerprint analysis of Psoralea corylifolia. Liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (LC-ESI-MSn) technique was first employed to identify the components of the fingerprint. The samples were separated with an Alltima C18 column (250 mm x 4.6 mm, 5 microm) by linear gradient elution using water-acetic acid (A; 100:0.1, v/v) and acetonitrile (B; 0 min, 40%; 15 min, 50%; 35 min, 60%; 45 min, 70%; 55 min, 80%; and maintained for 5 min) as mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/min and detector wavelength at 245 nm. A standard procedure was developed for HPLC fingerprint analysis. Average chromatogram of 10 batches of P. corylifolia L. from Sichuan and Henan Provinces, PR China, which has been considered as the original and genuine herbal medicine for a long time, was first established as the characteristic fingerprint. There are 12 common peaks in this fingerprint. Ten of these common peaks were identified by MS data. This profile was then used to identify and assess the differences among the herb grown in various areas of China. The HPLC fingerprint analysis is specific and may serve for quality identification and comprehensive evaluation of P. corylifolia.     

HPLC法测定杨梅叶中杨梅苷的含量

目的:建立HPLC法测定杨梅叶中杨梅苷含量的方法。方法:采用Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长358 nm,柱温30℃。结果:杨梅苷在0.088-0.880 mg/mL内与峰面积呈良好线性关系,A=36113C-401.56,r=0.9994;平均回收率为102.4%,RSD=1.9%(n=9)。测得杨梅叶中杨梅苷含量为1.43%。结论:该测定方法准确,可靠,对于杨梅的进一步开发利用具有重要的参考意义。     

HPLC法同时测定草苁蓉中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B

为建立高效液相色谱法同时测定草苁蓉干燥全草中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B的含量的分析方法,采用色谱柱:Klimail 100-5 C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:以乙腈为流动相A,以0.5%甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱条件:0~12 min,15%A;12~30 min,15%~20%A;30~40 min,20%~25%A;40~45 min,25%~30%A;45~60 min,30%~100%A;流速:1.0 mL·min^-1;检测波长:260 nm;柱温:30℃;进样量:20μL。得到草苁蓉纳拉苷的线性范围为4.688~150μg·mL^-1(R²=0.999 5);草苁蓉苷B的线性范围为3.438~110μg·mL^-1(R²=0.999 1);平均回收率分别为97.86%、96.55%;RSD分别为1.01、1.23(n=9)。本研究利用高效液相色谱法建立了同时测定草苁蓉全草中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B两种组分的方法。方法学的验证结果证明,该方法简便、快捷,重现性好,可以用于草苁蓉中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B两种组分的含量测定。     

RP-HPLC法测定泽兰中桦木酸的含量

目的：建立反相高效液相色潽法测定泽兰中桦木酸的含量.方法：采用AlltimaTM-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;以甲醇-0.2％磷酸水溶液=85：15进行等度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为202 nm,柱温为35℃.结果：桦木酸的线性范围为3.968～99.200 μg（r=0.997 3）,平均回收率为100.87％.结论：该方法结果准确、简便可行、重复性好,可为泽兰的质量控制提供依据.     

Quantitation of surfactant protein B by HPLC in bronchoalveolar lavage fluid

A sensitive reversed phase HPLC method with evaporative light scattering detection (ELSD) was developed for the determination of the hydrophobic surfactant protein B (SP-B) in human bronchoalveolar lavage fluid. Samples were extracted two times with CHCl(3):MeOH:HCl (2:3:0.005N) solution in a ratio of 1:2 by volume. The extract of the lower phase was separated on a C4 butyl silica gel column with an isocratic elution using a mobile phase, consisting of 97% methanol, 2.75% chloroform and 0.25% 0.1 M trifluoroacetic acid (by volume), at a flow rate of 1 ml/min. SP-B was detected by ELSD and quantified by comparison to an external standard. The duration of a run was 7 min, the quantification limit 30 ng and the limit of detection was at about 15 ng of SP-B. This method is suitable for the rapid routine quantification of SP-B in human bronchoalveolar lavage fluid samples.     

HPLC法同时测定人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Rg3、CK和Rh2

目的:建立高效液相色谱法同时测定人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Rg3、CK和Rh2的方法.方法:采用ODSC18(4.6 mm×150 mm)色谱柱,流动相乙腈-0.05%磷酸水,梯度洗脱,流速1 Ml/min,检测波长203 nm,柱温35 ℃.结果:人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Rg3、CK和Rh2分离效果良好,线性关...     

HPLC法测定葛花中鸢尾苷的含量

目的：测定8个产地葛花中鸢尾苷的含量,建立葛花中鸢尾苷含量测定的HPLC方法。方法：采用GRACEC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为0.8mL/min,紫外检测波长为265nm;柱温为室温。结果：鸢尾苷的峰面积（Y）与浓度（X）在11.8～236.4μg/mL范围内具有良好线性关系,Y=34920X-1156.5,r=0.9995（n=7）;平均加样回收率为103.66%,RSD〈2%（n=9）;测得8批不同产地的葛花药材中鸢尾苷含量在37.00～113.1mg/g。结论：建立了高效液相色谱法测定葛花中鸢尾苷含量的方法,该法准确、可靠,可用于葛花中主要成分鸢尾苷的含量测定;不同产地葛花中均检测到鸢尾苷,但其含量有一定区别。     

Sensitive liquid chromatography assay with ultraviolet detection for a new phosphodiesterase V inhibitor, DA-8159, in human plasma and urine

A sensitive high-performance liquid chromatographic (HPLC) method with ultraviolet absorption detection (292 nm) was developed and validated for the determination of the new phosphodiesterase V inhibitor, DA-8159 (DA), in human plasma and urine. A single step liquid-liquid extraction procedure using ethyl ether was performed to recover DA and the internal standard (sildenafil citrate) from 1.0 ml of biological matrices combined with 200 microl of 0.1M sodium carbonate buffer. A Capcell Pak C18 UG120 column (150 mm x 4.6 mm I.D., 5 microm) was used as a stationary phase and the mobile phase consisted of 30% acetonitrile and 70% 20mM potassium phosphate buffer (pH 4.5) at a flow rate of 1.0 ml/min. The lower limit for quantification was 5 ng/ml for plasma and 10 ng/ml for urine samples. Within- and between-run accuracy and precision were < or =15 and < or =10%, respectively, in both plasma and urine samples. The recovery of DA from human plasma and urine was greater than 70%. Separate stability studies showed that DA is stable under the conditions of analysis. This validated assay was used for the pharmacokinetic analysis of DA during a phase I, rising dose study.