不同防冻剂对兔胚胎干细胞慢速冷冻保存的影响

干细胞冷冻保存是干细胞研究和临床应用中的必需技术。为提高兔胚胎干细胞在慢速冻存过程中的保存效果,比较了二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(ethylene glycol,EG)对兔胚胎干细胞冷冻保护效果。对冷冻复苏后的细胞进行台盼蓝染色,并研究其胚胎干细胞分子特性,结果表明DMSO比EG具有更好的冷冻保护效果。再在以10%DMSO为基础的防冻液中添加膜稳定剂海藻糖(trehalose)或谷氨酰胺(glutamine),细胞冷冻复苏后结果显示,谷氨酰胺对兔胚胎干细胞有明显的冷冻保护作用,使细胞存活率从71%提高到83.7%。当谷氨酰胺浓度为0、5、10、20、40mmol/L分别加入防冻液中后,20mmol/L的谷氨酰胺具有最佳的冷冻保护效果。以上结果得出兔胚胎干细胞慢速冷冻的防冻液改进配方为:在胚胎干细胞培养液中添加10%DMSO 20mmol/L谷氨酰胺。     

国产丝裂霉素处理的胎儿成纤维细胞支持具有生殖系转化能力的小鼠胚胎干细胞的分离

应用于胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）培养的国产药物可以降低ES细胞的实验成本。研究中以浙江海正药业生产的丝裂霉素（mitomycin，国药准字H33020786）处理小鼠胎儿成纤维细胞，用于胚胎干细胞建系。并制备饲养层，将小鼠囊胚种植在该饲养层上。4—6天后，挑选形态良好的 内细胞团(inner cell mass)来源的克隆在胰酶中进行消化，将消化下来的细胞团块传至新鲜的饲养层上。之后，每2—3天传代一次。结果表明，经该丝裂霉素处理的胎儿成纤维细胞支持具有生殖系嵌合能力的胚胎干细胞的分离。     

中国灵长类文献纵览

把1870—2001年来自美国“现代灵长类文献题录数据库”、“维普中文数据库”及“中国灵长类研究文献题录”的资料按4个时期（I：1870—1949；II：1950—1965；III：1966—1977；IV：1978—2001）分类整理。此外，使用了“科学引文数据库（扩展版）”。结果如下：（1）1870—2001年共有2 052篇文献，2个文献数量高峰分别出现于1950—1965和1978—2001年；科研部门所发表的论文占54.2%，并随时间而增加；而国外部门则随之减少。（2）2 052篇文献中，超过9%的文献为SCI所收录，其中1966—1977年被SCI收录的文献百分比最高；在全部被SCI收录的文献中又以科研部门的占优势（59.1%）；但国外部门则以其30.1%的文献被SCI收录而领先。（3）统计了灵长类研究9个领域文献百分比及其变化，其中1978—2001间生态学和行为、神经生物学、繁殖和饲养快速发展；化石灵长类、形态学和解剖学减少；分类及分布、细胞及分子进化显得不甚突出；在第II时期和第 IV时期疾病防治研究相当多；保护生物学得到越来越多的关注。第IV时期作者数量最多，但每个作者的文献平均数却不如第I时期。一般地说，在SCI收录的作者中以中国作者居多，但在第I时期唯一被SCI收录的作者则是一名外国学者；在第III时期外国作者占被收录作者数的60%。     

猪卵母细胞玻璃化冷冻后细胞骨架的变化

为研究玻璃化冷冻后猪卵母细胞纺锤体、染色体和微丝的变化，从屠宰猪卵巢表面直径2—5 mm卵泡中采集未成熟(GV)期卵母细胞，由GV期卵母细胞经成熟培养获得体外成熟(MⅡ)期卵母细胞。GV期和MⅡ期卵母细胞各分为3组：对照组、冷冻保护剂处理组和玻璃化冷冻组。MⅡ期卵母细胞经分组处理后直接用于激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察样本；而GV期卵母细胞处理后先经44 h成熟培养，再用作LSCM观察样本。供试卵母细胞经固定、免疫荧光染色后，于LSCM下观察。结果表明，冷冻保护剂处理组GV期卵母细胞经成熟培养后，其纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为42.9%、89.6%和28.6%；玻璃化冷冻组此3项指标的正常率分别为10.1%、36.4%和16.9%，两组间差异显著(P<0.05)；除冷冻保护剂处理组染色体正常率与对照组无较大差异外，两试验组的其他指标均明显低于对照组(分别为79.5%、93.1%和72.3%，P<0.05)。MⅡ期卵母细胞冷冻保护剂处理组的纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为34.4%、61.3%和47.9%，而冷冻组分别为12.9%、56.7%和37.2%，两组均显著低于对照组(分别为78.3%、90.1%和72.8%，P<0.05)。结果表明，猪GV期和MⅡ期卵母细胞经冷冻保护剂处理或玻璃化冷冻保存后，均造成了纺锤体、染色体和微丝不可逆的损伤，这可能是影响卵母细胞成熟、受精与发育的重要原因。     

甲壳动物血细胞及其在免疫防御中的功能

甲壳动物的免疫反应主要依靠吞噬、包囊和凝集，属于非特异性免疫。血细胞在甲壳动物的免疫系统中具有重要作用。造血组织和造血干细胞为血细胞的生成、补充和更新提供了保障。血细胞成熟后分为不同类型，对血细胞分型的研究正在从采用传统的形态学方法向采用生物技术方法的方向发展，单克隆抗体技术已经应用于血细胞分型，结果更为客观准确。不同类型的血细胞在细胞化学特性与功能方面表现出明显差异。在甲壳动物的免疫反应中，血细胞数量在不同的免疫应激状态下发生明显变化。当外来病原体较小时，血细胞通过吞噬作用吞入病原体，在细胞内部将病原杀灭；而当入侵的病原体或寄生虫的个体大于10 μm时则以多个血细胞的包囊作用或凝集作用来完成。甲壳动物的免疫反应是一个交互作用的复杂过程，必然涉及多层次、多个因子的参与。其中造血组织的结构，血细胞的产生及调控机理，采用单克隆抗体技术对血细胞进行分型标准的建立，免疫因子在免疫反应中的功能及它们之间的相互作用的网络关系等尚需深入研究。     

广州地区犬蝠的食性

2004年5月—2006年4月采用拾遗法、粪便内容物分析法及实地观察对广州地区常见的食果蝙蝠¬—犬蝠(Cynopterus sphinx)进行了食性研究。对26份食物残留物和粪便样品的分析结果表明：犬蝠的食物包含13科21种的植物果实,3科3种的植物叶片,如：蒲桃（Syzygium jambos）、蒲葵（Livistona subglobosa）及龙眼（Dimocarous longan）的果实。其食性随果实的成熟季节而出现明显的季节性变化,夏秋两季大量食用各种水果,而在食物欠缺的春冬两季则主要食用棕榈科蒲葵的种子。广州地区犬蝠的繁殖期在每年的5—10月。     

鱼类特异的基因组复制

辐鳍鱼类是脊椎动物中种类最多、分布最广的类群，其基因组大小不等。过去的观点认为，在脊椎动物进化历程中曾发生了两次基因组复制。近期的系统基因组学研究资料进一步提出，在大约350百万年，辐鳍鱼还发生了第三次基因组复制，即鱼类特异的基因组复制(fishspecific genome duplication，FSGD)，且发生的时间正处在“物种极度丰富”的硬骨鱼谱系(真骨总目)和“物种贫乏”的谱系(辐鳍鱼纲基部的类群)出现分歧的时间点，表明FSGD与硬骨鱼物种和生物多样性的增加有关。进一步开展鱼类比较基因组学和功能基因组学研究将进一步验证FSGD这一假说。     

贺兰山马鹿冬季食性分析

2003年11月—2004年2月在宁夏贺兰山国家级自然保护区和内蒙古贺兰山国家级自然保护区，利用粪便显微组织学分析技术结合野外啃食调查对马鹿阿拉善亚种（Cervus elaphus alxaicus）冬季食性进行了研究。从7个沟系中一共收集了219堆马鹿粪便中捡拾粪粒，组成14个复合样本进行分析，其结果表明，灰榆（27.37%）、山杨（11.75%）、蒙古扁桃（9.83%）、金露梅（8.12%）、锦鸡儿（6.52%）等植物的当年枝和落叶以及禾本科草本植物（7.51%）是马鹿冬季主要食物，其中灰榆为大宗食物，针叶树种（杜松、油松、青海云杉）和其他草本植物所占比例均较小。马鹿对灰榆、山杨、蒙古扁桃、金露梅、锦鸡儿和杜松有正选择性；而对禾本科草本植物、油松和青海云杉有负选择性。马鹿对它们选择性的强弱顺序为：山杨＞杜松＞锦鸡儿＞蒙古扁桃＞金露梅＞灰榆＞禾本科草本植物＞油松＞青海云杉。马鹿取食乔木36.8%、灌木44.7%、禾本科草本植物8.0%和非禾本科草本植物10.5%，这4类植物的利用性与可利用性存在极显著差异，乔木和灌木的利用性高于可利用性；禾本科草本植物和非禾本科草本植物的利用性低于可利用性，说明马鹿的食物以木本植物为主，草本植物为辅。Spearman相关分析得出马鹿对食物的选择性与水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维和无氮浸出物之间无明显的相关关系。被啃食植物中粗蛋白含量较高，蛋白质不是越冬马鹿的限制因子，而能量可能是影响冬季马鹿采食较为关键的因子。马鹿冬季采食策略主要是以最小的能量消耗获取最大的能量收益。     

车轮虫分类与系统发育研究进展

车轮虫属一大类寄生性纤毛虫原生动物，可不同程度地给宿主造成危害，故对其研究既具有理论意义，又具有经济价值。文中简单回顾了车轮虫的分类研究和系统发育研究的历史。在分类学研究领域方面，全面介绍了目前车轮虫科已发现属的寄生部位和地理分布等；而系统发育研究领域方面，则介绍了车轮虫研究在萌芽期、探索期和发展期这三个时期的进展，包括形态学和分子生物学两方面的研究内容。并对该领域今后应进行的研究提出了建议。     

猫对方位辨别的知觉学习

观察了猫对光栅方位辨别的知觉学习。两只成年猫(cat 1和cat 2)先单眼辨别方位差为30度角的两个正弦光栅以获得食物奖赏。当辨别正确率达80%以上后，猫开始学习用单眼辨别夹角连续变化的两个正弦光栅，采用二进一递进训练方法(two-correct down/one-error up staircase method，即猫连续两次辨别正确，则待辨别的两个光栅的方位差降低为原来的0.9倍；如果辨别错误一次，则方位差增加至原来的1.1倍)追踪猫可辨别的光栅方位差。在训练前后分别检测训练眼和非训练眼对不同方位差(2°, 4°, 6°, 8°, 10°, 12°, 16°, 20°, 24°, 30°)光栅辨别的正确率。结果显示：对于固定方位差光栅的辨别学习，学习效果能完全传递给非训练眼；但对方位差连续减小的光栅辨别，两眼间几乎没有传递。提示固定方位角和连续变化方位角光栅的辨别学习可能由不同的信息处理机制介导。     

栖息地选择的理论与模型

栖息地选择理论和模型的发展经历了两个主要阶段：理想自由分布模型和空间直观的栖息地选择模型。随着对理论模型假设的放宽，近年来产生了越来越多的新模型。通过对栖息地选择过程的分析，提出了栖息地选择的几个关键环节：栖息地偏好、信息获取、行为决策及选择行为。在建立栖息地选择模型的各个关键环节上均存在大量有待解决的问题。目前对栖息地偏好的研究主要为相关分析，栖息地信息获取的过程仍然是一黑箱；对动物在栖息地选择过程中的行为决策以及对其生理状态的影响尚不了解，而解决这些问题需要生态学、生态学及认知学等多个领域的研究结果支持，也有待新的理论及方法加以充实，甚至还需要其他学科的介入。     

昆明滇蛙的取食策略

目前国内研究两栖类食性选择或偏好多未考虑蛙胃内不同食物的丰盈程度与栖境不同食物资源是否存在相关性。在分析了采自昆明白龙寺和昆明石林西街口的494只滇蛙(Rana pleuraden)的食性的同时，分析了采自对应栖境中的食物资源组成。结果表明，滇蛙的食物成份与食物资源相具有稳定性，主要类群均为直翅目、同翅目、半翅目、鞘翅目、双翅目、鳞翅目、膜翅目和蛛形纲等8类。但又存在变异性，不同产地、不同年份和不同月份之间的蛙标本胃内的食物成分各类群的比例均不相同。主要食物成份与食物资源相的差异显著性分析、相关性分析和选择性分析等方面的结果均支持或证明：滇蛙对食物具有选择性或取食偏好。栖境的食物资源相与蛙胃内的食物成分不存在相关性 (白龙寺：r=0.077, P=0.575; 西街口：r=-0.086, P=0.500)。直翅目(Ei<-0.35)和同翅目(Ei<-0.37)昆虫是滇蛙取食时回避的食物，而对鞘翅目、鳞翅目、膜翅目和蛛形纲等4个类群(Ei>0.45)具有明显偏好。     

食物变化量对艾虎取食行为的影响

在室内条件下,通过双通道选择实验比较艾虎在不同饥饿条件下对固定食物量斑块和变化食物量斑块的利用程度,确定艾虎对食物变化量的敏感性,以验证风险敏感取食原理。研究结果表明,训练期实验中,艾虎对固定食物量斑块中的取食量和利用频次明显高于变化食物量斑块,而对两个斑块的利用时间基本相同;艾虎饥饿一天后对固定食物量斑块中的利用频次明显高于变化食物量斑块,而对两个斑块的利用时间和取食量基本相同;艾虎饥饿两天后对两个斑块利用程度与训练期的结果相同;同时,艾虎在两个斑块中的取食量均与饥饿程度无关,而对两个斑块的利用时间和利用频次均随饥饿程度明显降低。因此,艾虎对固定食物量斑块和变化食物量斑块的利用程度基本相同,食物变化量对艾虎的取食行为没有明显影响,艾虎对食物变化量是不敏感的。产生这种结果的主要原因可能是艾虎的能量代谢水平较低,在食物受到限制时主要采用降低活动使单位活动时间内所获得的能量值达到最大的取食对策增加自身的存活机率。     

在中国云南发现狒狒化石

现存狒狒类(Papionin)生活于非洲(如Papio和Theropithoan)、 亚洲(如Macaca)和北非(M. sylvanas)。 在上新世和更新世，Theropithecus经历了从非洲到亚洲的扩散过程， 在印度发现了类似化石。 这次在云南中甸金沙江附近发现的下更新世狒狒化石(Papio)证明， 如同亚洲猕猴和现代人类祖先一样， 非洲狒狒类(Papio和Theropithecus)在同一时期从非洲扩散到亚洲。 所不同的是它们没有像猕猴和人类一样生存下来。 这次化石的发现对于研究以下生物学问题提供了重要依据： 1) 探讨旧大陆猴类在上新—更新世从非洲到亚洲的扩散过程； 2) 研究不同旧大陆猴类的进化和环境适应性； 3) 为现代人类祖先在非洲—亚大陆的扩散研究提供证据； 4) 由于化石产地包括有人类祖先和其他动物的化石， 因此， 狒狒在亚洲的生态适应研究将为探讨人类在同一时期的生态适应提供证据。     

黄腹角雉人工种群生存力初步分析

黄腹角雉（Tragopan caboti）为我国特有珍稀雉类。目前，其野生种群仅分布于湖南东南部、浙江南部和西南部、江西、福建、广东北部和广西东北部，估计数量约为4000只。湖南省雉类繁殖基地自1997年通过对执法检查中获得的黄腹角雉个体进行收容、救护以及驯养繁殖工作以来，该人工种群已经成功繁殖4年，至2004年年底种群数量为131只。本文利用8年的驯养繁殖过程中获得的种群生态学参数，借助漩涡模型（Vortex9.51）对该种群100年内的动态进行了模拟。结果显示，按照过去8年的生存情况，该种群在100年灭绝的概率为97%。成年雌性的高死亡率和频繁的灾害是影响种群长期存活的两个关键因素。如果成年雌性的死亡率降低到饲养后3年（2002—2004年）时的水平，种群的灭绝概率降低至5%，如果同时控制灾害的发生，其灭绝概率降至0。增加环境容纳量没有降低种群的灭绝概率和增加其增长速度，但增加环境容纳量对100年后的种群数量和基因杂合度有明显的影响。在降低成年雌性死亡率和杜绝灾害发生的情况下，可以考虑对种群进行收获（用作向野外放养），每次收获的数量应该控制在5只成年雄性和5只成年雌，开始收获时间为种群连续繁殖10年以后。降低成年雌性的死亡率、杜绝食物中毒和火灾等灾害的发生以及增加环境容纳量是该人工饲养种群长期存活和发展壮大的重要管理手段。     

斜带石斑鱼囊胚期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的筛选及克隆

以斜带石斑鱼囊胚期胚胎和尾芽期胚胎分别作为检验组和驱动组，构建了石斑鱼囊胚期胚胎和尾芽期胚胎的抑制性差减杂交cDNA文库。以α-tubulin作为检测指标，显示差减效率分别高达2 ⁸和2 ⁷。分别取囊胚期胚胎和尾芽期胚胎各192和960个PCR阳性克隆进行斑点杂交，得到15个囊胚期和131个尾芽期的斑点杂交阳性克隆。测序和数据库比对分析表明，囊胚期15个阳性克隆中有11个已知基因的cDNA片段和没有同源性的4个cDNA片段；而在尾芽期的131个阳性克隆中，有123个已知基因的cDNA片段和8个没有同源性的cDNA片段。用半定量RT-PCR技术分析了部分基因片段在胚胎发育过程中的表达规律和和组织分布情况。这些差异表达片段的呈现为进一步揭示石斑鱼胚胎发育、早期性别决定和性腺分化的分子机制奠定了基础。     

温度对江黄颡鱼性分化的影响

通过组织学方法观察江黄颡鱼原始生殖细胞(PGCs)迁移、生殖嵴生成和性腺分化，并且探讨在不同温度培育下性腺分化的差异。实验结果显示：1日龄仔鱼PGCs位于鱼体中肠背方的脏壁中胚层中；5日龄时，PGCs迁移到背方的腹膜上皮；8日龄时，生殖嵴形成；14日龄时，原始性腺形成；23日龄时，性腺开始分化。从孵化后的第10天开始，分别用(20±0.5)、(24±1.0自然水温、对照组)、(30±0.5)和(34±0.5)℃4种水温培育仔鱼达25天。实验结束后统计结果显示：对照组和(20±0.5)℃组的雌、雄性比接近1∶1(分别为1∶1.09和1.22∶1)；(30±0.5)℃组的为1∶4.89，雄性率达(83.3±0.7)%；(34±0.5)℃组的为2.85∶1，雄性率仅为(26.4±0.4)%。提示(30±0.5)℃可使幼鱼性腺发育趋向雄性，(34±0.5)℃则使幼鱼性腺发育趋向雌性。实验结果表明，江黄颡鱼的性分化是属于温度依赖型性别决定。     

群体规模对越冬灰鹤警戒行为的影响

2005年1—3月，在云南丽江拉市海就群体规模对越冬灰鹤(Grus grus)警戒行为的影响进行了研究。用扫描取样记录群体的规模和警戒个体的数量、用焦点取样记录群体中个体警戒行为的频次和持续时间，结果显示：灰鹤群体和个体的警戒力均随群体规模增加而降低，但集群个体数超过30只后，群体警戒力便不会再下降(P>0.05)、成体的警戒持续时间也会增加(P<0.01)；当群体规模超过50只后，成体的警戒频次也会上升(P<0.05)。推测亚成体维持低警戒的群体规模上限值要高于成体，单从警戒行为分析，20—30只个体的集群可能代表越冬灰鹤的最适群体大小。     

气候变化对鸟类影响：长期研究的意义

过去一个多世纪全球气候发生了明显变化，地球表面温度正在逐渐变暖。已有大量研究结果表明，鸟类已经在种群动态变化、生活史特性以及地理分布范围等方面对全球气候变化作出了相应的反应。根据全球范围内气候变化对鸟类影响的研究资料，尤其是北美和欧洲的一些长期研究项目的成果，综述了气候变化对鸟类分布范围、物候、繁殖和种群动态变化等方面的可能影响。这些长期研究项目为探讨气候变化在个体和种群的水平上如何长时间地影响鸟类提供了独特的机会，对未来中国鸟类学研究也会有所裨益。     

林麝微卫星座位的分离和鉴定

利用改进的磁珠富集法从林麝(Moschus berezovskii)的基因组中分离到10个新的(AC)n重复微卫星座位，并分析其在24个林麝个体(取样于中国四川金凤山群体)中的多态性。其中，5个位点在24个林麝个体中具有4—13个等位基因，观察杂合度和期望杂合度分别是0.429—0.957和0.587—0.902，平均多态信息含量是0.730。表明这5个微卫星位点具有高度的多态性，可以用于林麝遗传多样性研究，对林麝的保护具有很重要的意义。