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用基因工程重组的HBcAg免疫,得到五株分泌抗HBC的单克隆抗体细胞株,特异性结合效价1:200000以上,抗体活性在56℃8小时及pH2.8~9.6稳定。用此单抗制备的ELISA抗HBc检测试剂盒,其灵敏度及特异性均达到中国药品生物制品检定所标准。 相似文献
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目的:建立一种检测重组抗CD20单克隆抗体的新的ELISA方法,以便快捷、简便、灵敏地检测生物体液中的重组抗CD20单抗。方法:采用双抗夹心ELISA法对重组抗CD20单克隆抗体进行定量检测,包被抗体用猴血清吸附的羊抗人IgG,检测抗体用猴血清吸附的羊抗人IgG-HRP,最后加底物显色剂,终止后在酶标仪450 nm下读数。结果:按照新药临床前药代动力学中方法学确认的要求进行验证,获得了检测重组抗CD20单克隆抗体的高灵敏度和稳定的ELISA方法。结论:该ELISA方法简便、稳定、灵敏度高,可用于重组抗CD20单克隆抗体的检测。 相似文献
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抗人重组肿瘤坏死因子(rHTNFα)单克隆抗体的研制 总被引:6,自引:0,他引:6
肿瘤坏死因子(TNF)对许多肿瘤细胞具有细胞毒和抑制生长的作用。为进一步研究TNFα的结构和功能,并为临床研究提供rHTNFα纯品。本实验应用杂交瘤技术制备了一组抗rHTNFct单克隆抗体3、H2、B3,B5、E6、Zl2、Z8和Z20)。ELISA结果证实它们鼻rlL-1、rlL-2、rlFNγ、rlFNα1及E.Coli菌裂解液(MM294)无均交叉反应,仅与rHTNFα有反应。Western blot结果进一步证实这组抗体对rHTNFα的特异性。这组抗体具有不同程度中和rHTNFα细胞毒能力。用抗rHTNFα抗体制备的亲和层析柱纯化rHTNFα,可以得到在SDS-PEAG上分子量为17000道尔顿的rHTNFα纯品。 相似文献
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建立能稳定分泌特异性抗重组人表皮生长因子(rhEGF)单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,制备出高效价的 ,具有生物学活性的抗重组人表皮生长因子单克隆抗体 ,为EGF及其单克隆抗体在肿瘤生长调节中的作用研究 ,为肿瘤的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具。此外 ,为EGF的亲和层析纯化提供材料。以BALB/c小鼠脾细胞为饲养细胞 ,运用细胞杂交瘤技术制备 ,间接ELISA法筛选出能稳定分泌针对人表皮生长因子的单克隆抗体细胞株 ;对杂交瘤细胞进行染色体核型分析并以体内诱生法产生腹水以获得大量单克隆抗体 ,并采用HiTrapProteinAHP柱对其纯化… 相似文献
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目的:建立定量检测血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体(HuMabs)NM57的间接ELISA法,为药代动力学研究提供一种简单快速的方法。方法:采用狂犬病毒糖蛋白包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测HuMabsNM57的间接ELISA法,并对其特异性、灵敏度、精密度及准确度进行检测。结果:间接ELISA法检测HuMabsNM57的灵敏度为5ng/mL,组内及组间精密度分别为2.6%-6.0%、8.5%-11.3%。结论:建立了灵敏度高、特异性强的检测HuMabs NM57的间接ELISA法,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中HuMabsNM57的检测。 相似文献
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通过乙型肝炎病毒核心基因5''''端的修饰使核心抗原在大肠杆菌中高效表达 总被引:4,自引:0,他引:4
为了使乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)在大肠杆菌中获得高效表达,本文首次采用一种新方法对核心基因前区进行改造与修饰,即用限制性内切酶Taq I从核心基因内部5′端切开,去除核心基因起始信号ATG及ATG 5′端上游的全部前核心区(Precore),再化学合成一段既包含核心基因起始信号又具有多种功能的DNA片段。将两者拼接重组到表达载体pUC9上,转化受体菌,成功地获得高效表达HBcAg的菌株。用ELISA法检测,表达滴度为1:80000。表达产量占菌体总蛋白的16%。其菌体裂解液经免疫电镜观察,可见到成堆聚集的典型HBcAg颗粒。抗原单体分子量约为22000道尔顿,双体为44000。与目前国内外所普遍采用的方法比较,本文的方法有许多明显的优点,可用于其它基因改造。 相似文献
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邻氯青霉素单克隆抗体的制备及特性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
采用碳化二亚胺法,将邻氯青霉素(cloxacillin)与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术获得了一株能稳定分泌抗邻氯青霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H8-B1-F4。间接ELISA方法测定,抗体亚类为IgG1,其细胞上清抗体效价为1:1000,腹水效价为1:4×105。与其结构类似物苯唑青霉素、双氯青霉素的交叉反应率为21.3%和19.6%,和氨苄青霉素、羟氨苄青霉素和苄青霉素无交叉反应。体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定。为进一步研制检测邻氯青霉素的 ELISA试剂盒奠定基础。 相似文献
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利用单克隆抗体对乙型脑炎病毒不同毒株抗原分析的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
实验发现,应用动物免疫血清(多克隆抗体,PcAb)进行抗原分析时,我国分离到的乙型脑炎病毒SA14、P3、A2和高株的抗原性无明显差别,与从日本分离到的中山株有些差别,但仍被PcAb所中和;而用单克隆抗体(McAb)进行分析,情况就明显不同:SA14和P3株抗原性相似,高株和中山株不能被51-8McAb所中和,A2株则介于两者之间。A2和高顺生株的寡核苷酸指纹图谱分析表明,高株比A2株多两个斑点,但大多数斑点是一样的,证实了上述结果。实验还发现不同毒株的保护效果不同,A2株的免疫效果明显优于高株。 相似文献
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本文以人脑胶质瘤细胞系SHG-44为抗原,利用杂交瘤技术建立了一株恒定地分泌抗胶质瘤细胞单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株SZ-38。McAb SZ-38与9/10胶质瘤细胞系发生强结合反应。而与淋巴细胞、ABO型红细胞等所有正常血液细胞及绝大多数被检测肿瘤细胞系无反应。经免疫转移电泳及免疫沉淀法鉴定,该McAb识别抗原为胶质瘤细胞膜上Mw47,000糖蛋白。应用SPA-Sepharose 4B提纯MeAb SZ-38,再把纯化抗体交联于Sepharose 4B,以McAb亲和层析法提取SZ-38抗原,经SDS-PAGE证实其有较高的纯度。 相似文献
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