辣根过氧化物酶生物传感器催化与抑制动力学研究

为研究固定化的辣根过氧化物酶降解酚类有机污染物及检测环境有毒物质过程的动力学机制 ,利用伴刀豆蛋白A与糖蛋白的特异性吸附性质将辣根过氧化物酶层层固定在玻碳电极表面 ,制备了一种灵敏度高、性能稳定的辣根过氧化物酶多层膜生物传感器 ,并推导出了辣根过氧化物酶对过氧化氢、对苯二酚的催化反应以及苯肼对该反应的抑制作用的动力学模型。运用酶传感器实验数据 ,对推导出的动力学模型进行了拟合与参数估计。     

中性辣根过氧化物酶制法新进展

中性辣根过氧化物酶制法新进展季钟煜,费锦鑫（上海普洛麦格生物产品有限公司,上海２００２３３）关键词中性辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）是生物检测中用得非常多的工具酶,其应用和经济价值都很大。因此,制备ＨＲＰ的技术和方法也是相关行业的一个重要研究...     

辣根过氧化物酶产品的测定

辣根过氧化物酶产品的测定季钟煜,陈佩颖（上海普洛麦格生物产品有限公司,上海２００２３３）关键词辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）,邻苯三酚辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）是从辣根植物块根中提取制造的。它的实用价值很高,在临床检验上用作为酶指示剂和酶标记,藉以检验体液和...     

植物组织培养的次生代谢产物Ⅶ.酶(过氧化物酶)

来自辣根(Armoracia rusticana)的过氧化物酶是用作临床检查用药剂,此外,由于酶反应灵敏的原故亦作为酶免疫测定及单克隆抗体的筛选测定(Screening assay)的检出用药剂,成为工业上各种用途的重要酶类之一。我们为考察用辣根植物细胞培养生产过氧化物酶的可能性,由辣根诱发出愈伤组织。     

辣根过氧化物酶同功酶C3基因在毕赤酵母中的表达

目的：克隆与表达辣根过氧化物酶同功酶C3（HRPC3）基因。方法：用PCR方法从辣根的总DNA中,扩增得到一种辣根过氧化物酶同功酶C3基因,将PCR产物连接到pMD18-T载体上,测序证明正确后,再将目的基因正确插入到巴斯德毕赤酶母表达载体pPIC9K中,含有目的基因的重组pPIC9K质粒在毕赤酶母中进行表达与分析。结果：应用毕赤酶母作为受体菌,成功表达了HRPC3基因,其活性为56IU/L。结论：毕赤酶母直接表达出了具有生物活性的辣根过氧化物酶同功酶C3。     

植物过氧化物酶的生理作用

过氧化物酶(EC·1·11·1·7)是一种以血红素为辅基的氧化酶。生物学研究中常用的过氧化物酶(POD)为辣根过氧化物酶(HRP),该酶为糖蛋白。 POD能催化H_2O_2氧化酚类物质、细胞色素C、维生素C、亚硝酸盐、无色染料、吲哚、胺,以及无机离子,特别是碘离子。可     

辣根过氧化物酶同工酶C基因在巴斯德毕赤酵母中的克隆与鉴定

目的：克隆辣根过氧化物酶同工酶C基因,为此基因的表达作准备。方法：用PCR方法从辣根的总DNA中扩增得到一种辣根过氧化物酶同工酶C基因HRPC2,通过PCR的方法去除内含子后连接到pMD18-T载体上,测序证明正确后,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成重组质粒pC2EX9K。再将辣根过氧化物酶同工酶C基因在毕赤酵母中进行克隆、鉴定。结果：重组质粒pC2EX9K转化毕赤酵母后,经PCR鉴定,证明形成了目的基因的克隆。结论：应用毕赤酵母作为受体菌,pPIC9K为载体,成功克隆了HRPC2。     

植物过氧化物酶研究进展

过氧化物酶 [peroxidase,POD,EC1 .1 1 .1 .7(X) ]是广泛存在于各种动物、植物和微生物体内的一类氧化酶。催化由过氧化氢参与的各种还原剂的氧化反应 :RH2 H2 O2 →2 H2 O R。植物过氧化物酶的研究可追溯到 1 80 9年用愈创树脂为底物进行的颜色反应。但直到一个世纪之后才开展此酶的分离和命名。已知的催化反应底物超过 2 0 0种 ,以及多种过氧化物和辅助因子。迄今被研究最深入的应首推辣根过氧化物酶 (horseradish pero-xidase,HRP)。早在 1 94 0年 ,Thorell即用电泳方法从部分纯化的辣根组织中区分出 2种不同的 HRP,之后此酶…     

辣根过氧化物酶同功酶C基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

无论从应用还是从理论研究角度,辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）是一种非常重要的酶．ＨＲＰ基因克隆与表达将有利于更深入研究ＨＲＰ的结构与功能．利用反转录ＰＣＲ从天然植物辣根中分离和克隆编码辣根过氧化物酶同功酶Ｃ（ＨＲＰ－Ｃ）一个ｃＤＮＡ,并测定其序列．结果发现,从基因推导出的氨基酸序列与Ｗｅｌｉｎｄｅｒ报道的辣根过氧化物酶序列有９０．６％的同源性．将该基因连接到表达载体ｐＥＴ－２４ｂ上,利用抗ＨＲＰ多克隆抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ,检测有少量目标产物表达．在诱导表达过程中,没有发现细菌生长受抑制或受明显的毒害     

辣根过氧化物酶模拟酶研究进展

辣根过氧化物酶 (HRP)是一种常用的工具酶 ,对其模拟酶的研究是近年来生物化学和有机化学的重要课题 ,具有重要的理论意义和应用价值。本文评述了近十年来HRP模拟酶的研究进展。     

生物酶催化聚合的研究进展

酶催化聚合反应是近年来的研究热点之一,氧化还原酶是应用广泛的一类催化聚合酶。概括总结了近年来酶促聚合反应的研究进展,重点叙述了辣根过氧化物酶(HRP)、大豆过氧化物酶(SBP)和漆酶(laccase)的结构、催化机理以及它们在酶催化聚合中的应用概况。     

HRP在模拟人体胃肠环境中的稳定性研究

以中国药典中的人工胃液和人工肠液模拟人体胃肠环境,对过辣根氧化物酶的稳定性进行了一系列单独及综合研究。结果表明,辣根过氧化物酶在人工胃液中受到很强的破坏,20min后,其活性仅存1.1%,主要由胃酸破坏,而在人工肠液中则较为稳定,1.5h后,其活性仍存在89%,同时还发现,天然结构的辣根过氧化物酶对胰蛋白酶具有较强的耐受力。     

环糊精交联固定酶的生物传感器及临床应用

通过交联方式将辣根过氧化物酶固定在Eastman-AQ-N-甲基吩嗪修饰电极上,制备成过氧化氢生物传感器.通过循环伏安法和计时电流法证明固定在Eastman-AQ阳离子交换树脂中的N-甲基吩嗪有效地在辣根过氧化物酶和玻碳电极之间传递电子.由于该生物传感器对过氧化氢具有良好的生物电催化还原的功能,所以将它与葡萄糖氧化酶和半乳糖苷酶结合,制备成双酶和三酶体系的生物传感器,用于葡萄糖和乳糖的测定.该生物传感器具有灵敏度高、响应快、响应范围宽及选择性好等优点.对糖尿病患者的血糖测定结果与采用葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶的分光光度法的结果一致.     

两种甲型肝炎病毒抗原快速检测方法的建立

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果。结果用生物素标记甲型肝炎病毒抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法,较双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高1～2个稀释度;两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高。结论甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中。而甲型肝炎病毒抗原双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定。     

辣根过氧化物酶的结构与作用机制

辣根过氧化物酶是一种重要的酶制剂,它已经有一个多世纪的研究历史了。近几年,有关它的结构、催化中间体、催化机制以及特殊氨基酸残基功能等又有了新的发现。     

聚乙二醇共沉淀物复溶萃取辣根过氧化物酶的条件优化

为了改进辣根过氧化物酶的提纯方法,在双水相萃取的基础上使用聚乙二醇(PEG6000)在高饱和度(NH4)2SO4中沉淀辣根提取液中的过氧化物酶,利用磷酸盐溶液复溶解共沉淀物形成的双水相萃取体系能高效回收高纯度酶蛋白。研究了pH、PEG浓度和(NH4)2SO4饱和度对酶活性的影响,并考察不同液固比、pH和NaCl浓度对目标酶在双水相体系中的分配行为,并通过响应面法优化出最优萃取条件。结果表明:在液固比0.3 m L/g、pH7.02和NaCl 42 g/L的优化萃取条件下,辣根过氧化物酶回收率达88.1%,酶纯度较优化前提高了21.7倍。该方法的建立对于微量蛋白质的高效率提纯具有重量的参考价值。     

人淋巴细胞低密度脂蛋白受体酶联测定法的研究

将辣根过氧化物酶与低密度脂蛋白交联,并将人淋巴细胞固定于酶标板上,成功地建立了淋巴细胞 LDL 受体酶联测定法.此法特异、灵敏、可靠,不需放射性同位素。     

辣根过氧化物酶标记抗体在免疫定位上的应用 Ⅰ.肝组织内乙型肝炎表面抗原的光学显微镜定位方法

本文报告在光学显微镜下采用辣根过氧化物酶标记抗体(间接法)对肝组织内乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的一种定位方法。此法专一性强,重复性好。     

大肠杆菌的β-半乳糖普酶高产菌株的组建

目前酶免疫测定法已成为医学及免疫学研究领域中一种新的重要测试手段^[7]。常用来作为酶标的酶主要有碱性磷酸醋酶^[3],辣根过氧化物酶β-半乳糖昔酶^[6]。     

辣根过氧化物酶标记技术的赝象

辣根过氧化物酶是目前研究神经生物学的重要工具之一,但利用它进行神经联系的追踪时,常会出现由于血液成分、血管内皮细胞、杂质、非特异性沉着物以及内源性过氧化物酶等造成的假象。本文报道了这些假象及其形成原因,并提出了相应的辨认方法,为正确区分外源性HRP所得到的结果提供了一定的形态依据。