N─糖链在细胞粘附中的作用

参与细胞与细胞,细胞与基质相互作用的细胞粘附分子均为含N─糖链的糖蛋白,N─糖链在细胞的识别、粘附过程中起一定的作用。本文就纤连蛋白、层粘连蛋白、整合蛋白、选择蛋白和凝集素受体等分子中N─糖链与细胞识别和粘附关系加以讨论。     

细胞生长和表面精蛋白的N－糖链中核心岩藻糖的关系

细胞生长和表面精蛋白的Ｎ－糖链中核心岩藻糖的关系董素才,杨小平,陈惠黎（上海医科大学生物化学教研室,２０００３２）关键词精蛋白Ｎ—糖链,核心岩藻糖,小扁豆凝集素,细胞生长细胞表面精蛋白Ｎ一糖链的结构与细胞生长、分化、恶变有密切关系,除糖链的类型和天线...     

N-糖链合成抑制剂对NIH3T3细胞粘附作用和整合蛋白表达的影响

研究了Ｎ－糖链合成抑制剂——Ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（ＤＭＭ）和衣霉素（ＴＭ）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞粘附作用和细胞表面α５β１整合蛋白含量的影响．研究结果发现甘露糖苷酶Ⅰ抑制剂－ＤＭＭ处理ＮＩＨ３Ｔ３细胞后,３Ｈ－甘露糖（３Ｈ－Ｍａｎ）参入ＮＩＨ３Ｔ３细胞较对照细胞增加一倍,多天线复杂型糖链增加１８％,而细胞表面α５β１整合蛋白与纤连蛋白粘附能力却下降１７％,但对膜整合蛋白α５和β１亚基表达量无明显影响,提示不成熟的糖链对整合蛋白参与的细胞粘附功能有一定影响,但不影响糖蛋白运输及整合到膜上．十四糖二磷酸长萜醇合成抑制剂——ＴＭ为０．５μｇ／ｍｌ时,Ｎ－糖链合成显著抑制,３Ｈ－Ｍａｎ参入减少了５２％,细胞粘附能力下降了３７％,细胞表面膜整合蛋白α５亚基下降了２２％,而β１亚基无明显变化,提示ＴＭ的脱糖基化作用可引起α５亚基转运至细胞膜表面下降,以至影响了细胞的粘附能力．此外,脱糖整合蛋白与纤连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）的结合力下降也是原因之一．     

双丁酰环烯酸腺苷对人肝癌细胞株SMMC—7721表面N—糖…

本文采用系列凝集素柱层析法,并配合外切糖苷酶研究了在双丁酰环磷酸腺苷（ｄＢ－ｃＡＭＰ）作用１－５过程中人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ－糖链类型及复杂型糖链天线数的变化。结果表明,ｄＢ－ｃＡＭＰ促进＾３Ｈ－Ｍａｎ参人细胞表面Ｎ－糖链,使高甘露糖型Ｎ－糖链的百分比下降,并促进二天线Ｎ－糖链的生物合成,使多天线特别是四天线和Ｃ２Ｃ２Ｃ６三天线Ｎ－糖链的百分比减少。结果提示,Ｎ－糖链结构的这些变     

佛波酯能改变细胞表面糖蛋白N－糖链的结构

利用标记Ｎ－糖链的凝集素亲和层析法研究了佛波醇肉桂酸乙酸酯（ＰＭＡ）对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１表面糖蛋白上Ｎ－糖链结构的影响,发现１００ｎｍｏｌ／Ｌ的ＰＭＡ处理５天后,可使细胞表面Ｎ－糖链中高甘露糖型和杂合型以及四天线、Ｃ２Ｃ２,６三天线复杂型的比例增高,而二天线复杂型降低。此结果与我们曾报道的视黄酸（ＲＡ）和双丁配环磷酸腺苷（ｄｂ－ｃＡＭＰ）对该细胞表面Ｎ－糖链的影响相反。因ＲＡ和ｄｂ－ｃＡＭＰ是ＳＭＭＣ－７７２１细胞的分化诱导剂,可抑制细胞生长;而ＰＭＡ是该细胞的增殖促进剂,故细胞表面Ｎ－糖链的变化与细胞的分化和增殖密切相关。     

双丁酰环磷酸腺苷耐人肝癌细胞株SMMC－7721表面N－糟链类型及天线数的影响

本文采用系列凝集素柱层析法,并配合外切精苷酶研究了在双丁酰环磷酸腺苷（ｄＢ－ｃＡＭＰ）作用１～５天过程中人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ－糖链类型及复杂型糖链天线数的变化。结果表明,ｄＢ－ｃＡＭＰ促进３Ｈ—Ｍａｎ参入细胞表面Ｎ－糖链,使高甘露糖型Ｎ－糖链的百分比下降,并促进二天线Ｎ－糖链的生物合成。使多天线特别是四天线和Ｃ２Ｃ２Ｃ６三天线Ｎ－糖链的百分比减少．结果提示,Ｎ－糖链结构的这些变化可能是ｄＢ－ｃＡＭＰ诱导ＳＭＭＣ－７７２１细胞向正常方向分化的结果。     

N－糖链在纤连蛋白分泌及纤连蛋白受体与配体结合中的作用

应用能阻断糖蛋白Ｎ－糖链合成的衣霉素（ＴＭ）,研究了Ｎ－糖链缺失对ＨＴ１０８０细胞分泌纤连蛋白（Ｆｎ）以及纤连蛋白受体（ＦｎＲ）与配体结合的影响。结果发现,１μｇ／ｍｌ的ＴＭ可抑制Ｎ－糖链的合成（此时,３Ｈ－甘露糖掺入下降６３％）,但细胞分泌Ｆｎ的量仅下降３３％,这主要是由于蛋白合成受ＴＭ抑制（２５％）而引起,因而,Ｎ－糖链缺失可能并不影响Ｆｎ的分泌。而在同样条件下,单个细胞结合１２５Ｉ－Ｆｎ的量显著下降,显示Ｎ－糖链的缺失可能导致了膜上ＦｎＲ总量或其与配体结合的亲和力的改变。ＴＭ处理组的ＦｎＲ的内吞率与对照组相比较无明显差异,提示受体分子中的Ｎ－糖链缺失不影响其内吞过程．     

佛波酯能改变细胞表面糖蛋白N—糖链的结构

利用标记Ｎ－糖链的凝集素亲和层析法研究了佛波醇肉桂酸乙酸酯对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１表面糖蛋白上Ｎ－糖链结构的影响,发现１００ｎｍｏｌ／Ｌ的ＰＭＡ处理５天后,可使细胞表面Ｎ－糖链中高甘露糖型和杂合型以及四天线,Ｃ２Ｃ２,６三天线复杂型的比例增高,而二天线复杂型降低,此结果与我们曾报道的视黄酸和双丁酰环磷酸腺苷对该细胞表面Ｎ－糖链的影响相反。因ＲＡ和ｄｂ－ｃＡＭＰ是ＳＭＭＣ－７７２１细胞的分化诱     

视黄酸对人肝癌细胞表面N糖链类型及天线数的影响

本文采用系列凝集素柱层析法,并配合外切糖苷酶处理研究了在视黄酸作用１－５天过程中人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ糖结构的变化。结果表明,ＲＡ促进＾３Ｈ－甘露糖参入细胞表面Ｎ糖链,使高甘露糖型Ｎ糖的百分比下降,复杂型百分比长升,并促进二天线Ｎ糖链的生物合成,使多天线特别是四天线和Ｃ２,Ｃ２１ｂ三天线Ｎ糖链的合成减少。结果提示,Ｎ糖链结构的这些变化可能是ＲＡ诱导ＳＭＭＣ－７７２１细胞向正常方向     

N—糖链在纤连蛋白分泌及纤连蛋白受体与配体结合的作用

应用能断糖蛋白Ｎ－糖链合成的衣霉素（ＴＭ）,研究了Ｎ－糖链缺失对ＨＴ１０８０细胞分泌纤连蛋白（Ｆｎ）以及纤连蛋白受体（ＦｎＲ）与配体结合的影响。结果表现,１μｇ／ｍｌ的ＴＭ可抑制Ｎ－糖链的合成（此时,３Ｈ－甘露糖掺入下降６３％）,但细胞分泌Ｆｎ的量仅下降３％,这主要是由于蛋白合成受ＴＭ抑制（２５％）而引起。因而,Ｎ－糖链缺失可能并不影响Ｆｎ的分泌,而在同样条件下,单个细胞结合１２５Ｉ－Ｆｎ的量显著     

衣霉素对纤连蛋白与HT1080细胞结合的影响

衣霉素对纤连蛋白与ＨＴ１０８０细胞结合的影响曹立环,查锡良（上海医科大学生物化学教研室,２０００３２）关键词纤连蛋白;纤连蛋白受体;衣霉素;Ｎ－糖链配体和受体分子上糖链的功能已成为近几年来复合糖领域研究的新热点之一。以Ｎ－糖链的合成抑制剂阻断或改变Ｎ...     

Swainsonine对胰岛素受体功能影响的研究

以Ｓｗａｉｓｏｎｉｎｅ（Ｓｗ）作为高尔基体Ｎ－糖链加工酶系中α－甘露糖苷酶ＩＩ的特异抑制剂。研究Ｎ－糖链结构和胰岛素受体（Ｉｎｓ－Ｒ）功能的关系,发现Ｓｗ不影响细胞生长和３Ｈ－亮氨酸参入ＳＭＭＣ７７２１细胞,但明显促进３Ｈ－甘露糖参入细胞总糖蛋白和表面糖蛋白,并使后者的ＣｏｎＡ强结合组分显著增加,提示Ｓｗ使Ｉｎｓ－Ｒ的Ｎ－糖链变成杂合型及高甘露糖型,胰岛素结合试验后作Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析,发现Ｓ     

地衣霉素对细胞膜表面运铁蛋白受体功能的影响

应用抑制糖蛋白Ｎ－糖链合成的地衣霉素处理ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞,３Ｈ甘露糖掺入实验显示细胞表面糖蛋白Ｎ－糖链的合成受到显著抑制,但细胞膜表面运铁蛋白受体内吞再循环的过程无显明变化,进一步的研究表明受体与运铁蛋白的亲和力亦无改变,但细胞膜表面运铁蛋白受体数减少。结果提示用地衣霉素处理细胞后,在内质网合成的无Ｎ－糖链的运铁蛋白受体影响其运输到细胞膜表面表达。     

钙依粘附蛋白和神经细胞粘附分子的结构与功能

钙依粘附蛋白和神经细胞粘附分子的结构与功能关键词Ｃａｄｈｅｒｉｎ,Ｎ－ＣＡＭ细胞－细胞粘附分子有两类,一类是钙依粘附蛋白（Ｃａｄｈｅｒｉｎ）,一类是不依赖钙的细胞粘附分子。１．Ｃａｄｈｅｒｉｎ脊椎动物的Ｃａｄｈｅｒｉｎ按发现其存在其中的主要组织分为三...     

肝癌细胞-胞外基质粘附性与粘附识别序列的相关性

以微管吸吮技术研究了人肝癌细胞在ＩＶ型胶原／层粘连蛋白（ＬＮ）／纤维连结蛋白（ＦＮ）裱衬表面的粘附性。进一步,用四种人工合成肽精－甘－天冬－丝（ＲＧＤＳ）、甘－精－甘－天冬－苏－脯ＧＲＧＤＴＰ）、酪－异亮－甘－丝－精（ＹＩＧＳＲ０和半胱－天冬－脯－甘－酪－异亮－甘－丝－精（ＣＤＰＧＹＩＧＳＲ）研究了肝癌细胞粘附性对两种粘附识别序列ＲＧＤ和ＹＩＧＳＲ的依赖性。为了归纳和整理实验结果,根据竞争性抑制的     

人胎盘纤维蛋白N糖链结构研究

分离纯化了人胎盘纤连蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,纯化Ｆｎ仍保持其搞原性,得率为３８．７％。根据植物凝集素识别专一糖链结构的原理,应用斑点印迹法。亲和层析法和Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳研究糖链结构,结果证实：１．人胎盘Ｆｎ分子中含有复杂Ｎ糖链（包括二天线和大于二天线的结构）以及高甘露糖型和／或杂合型Ｎ糖链;复杂型Ｎ糖糖链中含有平分型ＧｌｃＮＡｃ,糖链末端也可连有唾液酸;２．胰糜蛋白酶水解而获得     

Swainsonine对胰岛素受体功能影响的研究

以Ｓｗａｉｓｏｎｉｎｅ（Ｓｗ）作为高尔基体付糖链加工酶系中α－甘露糖苷酶Ⅱ的特异抑制剂,研究Ｎ－糖链结构和胰岛素受体（Ｉｎｓ－Ｒ）功能的关系．发现Ｓｗ不影响细胞生长和３Ｈ－亮氨酸参入ＳＭＭＣ７７２１细胞,但明显促进３Ｈ－甘露糖参入细胞总糖蛋白和表面糖蛋白,并使后者的ＣｏｎＡ强结合组分显著增加,提示Ｓｗ使Ｉｎｓ－Ｒ的Ｎ－糖链变成杂合型及高甘露糖型。胰岛素结合试验后作Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析：发现Ｓｗ不改变Ｉｎｓ－Ｒ的结合容量和每个细胞表面的结合位点数,也不改变结合动力学。再用部分纯化的Ｉｎｓ－Ｒ研究自身磷酸化和对外源底物的酪氨酸蛋白激酶活力,也未发现Ｓｗ处理和对照细胞间的明显区别,表示Ｓｗ也不影响Ｉｓｎ－Ｒ的跨膜信息传递,结合已报道的衣霉素使细胞表面Ｉｎｓ－Ｒ减少的结果,提示Ｉｎｓ－Ｒ运送至细胞膜需要Ｎ－糖链存在,但糖链的类型对ＩＮＳ－Ｒ的代谢和结合动力学并不重要     

地衣霉素对细胞膜表面运铁蛋白受体功能的影响

应用抑制糖蛋白Ｎ－糖链合成的地衣霉素处理ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞,３Ｈ甘露糖掺入实验显示细胞膜表面糖蛋白Ｎ－糖链的合成受到显著抑制,但细胞膜表面运铁蛋白受体内吞再循环的过程无显明变化,进一步的研究表明受体与运铁蛋白的亲和力亦无改变,但细胞膜表面运铁蛋白受体数减少。结果提示用地衣霉素处理细胞后,在内质网合成的无Ｎ－糖链的运铁蛋白受体影响其运输到细胞膜表面表达。     

人胎盘纤连蛋白N糖链结构研究

分离纯化了人胎盘纤连蛋白（Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,纯化Ｆｎ仍保持其搞原性,得率为３８．７％。根据植物凝集素识别专一糖链结构的原理,应用斑点印迹法,亲和层析法和Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳研究糖链结构,结果证实：１．人胎盘Ｆｎ分子中含有复杂型Ｎ糖链（包括二天线和大于二天线的结构）以及高甘露糖型和／或杂合型Ｎ糖链;复杂型Ｎ糖链中含有平分型ＧｌｃＮＡｃ,糖链末端也可连有唾液酸;２．胰糜蛋白酶水解而获得的明胶结合片段（４４ｋＤ）含有二天线和多天线复杂型糖链,也可接有平分型ＧｌｃＮＡｃ;３．肝素结合片段（３０ｋＤ）以及明胶、肝素均不结合的Ｆｎ片段不含有多天线复杂型Ｎ糖链。     

糖链结构不同的纤连蛋白与HT1080细胞结合研究

人血浆纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）与人胎盘纤连蛋白两者在肽链结构上基本相同,但人血浆Ｆｎ的Ｎ－糖链结构为二天线结构,而人胎盘Ｆｎ不仅Ｎ－糖链的数量增加,同时还含有多天线结构,分别用~（１２５）Ｉ标记这两种具有不同糖链结构的Ｆｎ,观察两者与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合的亲和性,结果发现,在４℃,人血浆Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１２９ｎｇ／１０~５细胞,解离常数为２．８３×１０~（－８）ｍｏｌ／Ｌ,人胎盘Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１３３ｎｇ／１０~６细胞,解离常数为２．６４×１０~（－８）ｍｏｌ／Ｌ．因而,人血浆Ｆｎ与人胎盘Ｆｎ上Ｎ－糖链的不同并未影响其与受体的结合．