镉离子诱导BA／F3β细胞发生奇特的细胞调亡

细胞调亡一般都伴随着有ＤＮＡ片段化,活性氧含量增加,并能被过量的Ｂｃｌ－２所抑制。以ＢＡ／Ｆ３β细胞为模型,利用ＭＴＴ检测、Ｈｏｃｈｅｓｔ染色以及透射电镜检测等技术却发现,镉离子虽然可以诱导该细胞调亡,但是这种调亡没有ＤＮＡ片段化,也没有活性氧含量增加。此外,过量Ｂｃｌ－２对这种凋亡也没有保护作用。因此,可以确认镉离子诱导ＢＡ／Ｆ３β细胞发生了奇特的细胞调亡。     

ste20基因突变抑制葡萄糖诱导的酿酒酵母细胞凋亡

近年来,酿酒酵母的细胞调亡研究取得了很大进展。多种因素可以诱导其调亡,譬如过氧化氢（H2O2）、醋酸、高渗透压和高盐浓度等。葡萄糖是酿酒酵母生长所必须的重要营养物质之一。同时,在其他营养元素缺乏的条件下,只用葡萄糖培养将迅速的诱导酿酒酵母的细胞凋亡。Ste20是PAK（p21 activated kinase）家族的成员,它参与酿酒酵母的信息素应答、假菌丝生长和侵入生长等途径。有研究表明,ste20突变株能抵抗由信息素和过氧化物诱导的细胞调亡。我们发现STE20基因突变也能抑制葡萄糖诱导的凋亡,用葡萄糖处理时,与野生型相比,ste20突变株细胞能保持完整的细胞膜和细胞核结构。H2O2诱导酿酒酵母细胞凋亡时,需要Ste20激酶磷酸化组蛋白H2B第十号丝氨酸（S10）。因此,葡萄糖诱导的酿酒酵母细胞凋亡作用可能通过类似于过氧化氢诱导的酿酒酵母细胞凋亡的途径进行的。     

线粒体与细胞凋亡调控

细胞凋亡是一个受到一系列相关基因严格调控的细胞死亡过程。线粒体是细胞凋亡调控的活动中心。在凋亡因子的刺激下,线粒体释放出不同促凋亡因子如细胞色素C、Smac／Diablo等,激活细胞内凋亡蛋白酶Caspase。我们发现,活化后的Caspase可以反过来作用于线粒体,引发更大量线粒体细胞色素c的释放,构成细胞色素c释放的正反馈调节机制,从而导致电子传递链的中断、膜电势的丧失、胞内ROS的升高以及线粒体产生ATP功能的完全丧失。Bcl-2家族蛋白在细胞色素C释放和细胞凋亡调控中起关键作用。     

流感病毒感染诱导MDCK细胞凋亡的研究

用荧光染色、DNA凝胶电泳等方法检测了A型流感病毒株A1／京防86－1和B型流感病毒株B/沪防93－1诱导狗肾体代细胞(MDCKcells)的凋亡情况,并采用MTT法和流式细胞仪比较了这2株病毒对MMCK细胞的毒力和凋亡诱导能力水平。结果显示：病毒感染6h后,细胞DNA发生断裂,病毒感染12h后,可见明显的染色质凝聚;在一定范围内,细胞凋亡强度表现出明显的时间和剂量依赖关系;并且,A型流感病毒株的毒力和调亡诱导能力均强于B型流感病毒株。实验结果表明：流感病毒感染引起的细胞死亡主要是通过调亡实现的,毒力不同的流感病毒株诱导细胞调亡的能力不同。     

TRAJKIL及其受体在细胞调中的作用

ＴＲＡＩＬ是最近发现的ＴＮＦ家族的新成员。它在结构和功能方面和ＴＮＦ家族的另一成员－Ｆａｓ／ＡＰＯ－１Ｌ很相似。ＴＲＡＩＬ能够诱导多种转化细胞调亡,但对正常细胞没有这种作用。目前共发现了ＴＲＡＩＬ的５个受体。本文就ＴＲＡＩＬ及其受体的结构和功能以及可能存在的调控机制等方面进行了综述。     

凋亡和周期基因芯片研究As2O3对NB4细胞凋亡相关基因表达谱的影响

目的:利用细胞凋亡和周期基因芯片研究As₂O₃作用前后NB4细胞基因表达谱的差异性,寻找As₂O₃诱导NB4细胞凋亡的相关基因并分析其可能机制。方法:流式细胞仪检测细胞凋亡率,抽提对照及诱导组细胞的mRNA,通过逆转录将As₂O₃处理前后的NB4细胞cDNA进行生物素标记,用含269个目的基因的细胞凋亡和周期基因芯片进行杂交,GEArray软件分析,筛选出As₂O₃诱导前后表达有差异的基因。芯片结果用荧光定量聚合酶链反应(realtimepolymerasechainreaction)进行验证。结果:筛选出As₂O₃作用前后表达有差异的基因共100条(占芯片基因总数的37.2%),其中97条(97/100,97%)基因表达上调,3条(3/100,3%)基因表达下调。表达上调的基因主要包括肿瘤坏死因子配体和受体家族、bcl2家族、半胱氨酸家族、DNA损伤检测和P53途径以及细胞分裂周期蛋白和激酶等基因。结论:As₂O₃主要通过上调促凋亡基因表达来诱导NB4细胞凋亡,其中TNFSF15、Apaf1、Caspase3和p16等基因可能参与As₂O₃诱导的NB4细胞凋亡,As₂O₃诱导NB4细胞凋亡的可能机制主要涉及TNF途径、线粒体途径、Caspase途径、细胞周期抑制途径和P53途径等。     

TNF受体家族介导的细胞凋亡信号转导

肿瘤坏死因子（TNF）家族是一类多功能的细胞因子,具有诱导细胞凋亡、抗病毒、免疫调节等多种生物学活性.其中一些成员可以通过和细胞膜上相应受体（即TNF受体家族成员）结合,启动细胞内的凋亡机制,而诱导细胞凋亡.一些蛋白质（如TRADD、FADD、RIP、RAIDD等）参与这些信号传递过程.越来越多的TNF家族成员、TNF受体以及与细胞凋亡相关的Caspase蛋白酶家族成员被人们发现.     

Smac/DIABLO在过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡中的作用

为探讨Smac/DIABLO在过氧化氢 (H2 O2 )所致C2 C12 肌原细胞凋亡中的作用 ,采用Hoechst 3 3 2 58染色 ,观察H2 O2 (0 5mmol/L)处理C2 C12 肌原细胞不同时间后 ,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率 ,DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯状带 ,利用细胞成分分离后蛋白质印迹分析H2 O2 是否导致Smac/DIABLO从线粒体释放 ,采用Caspase检测试剂盒及蛋白质印迹分析Caspase 3和Caspase 9的活化 ,转染Smac/DIABLO基因 ,观察Smac/DIABLO过表达对H2 O2 所致的C2 C12 肌原细胞凋亡的影响 .结果表明 :H2 O2 处理 1h后 ,Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放入胞浆 ,2h更明显 ;H2 O2 处理 4h后 ,Caspase 3和Caspase 9活化 ,12h达高峰 ;H2 O2 处理 2 4h后 ,C2 C12 肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变 ,凋亡核百分率明显升高 ,DNA电泳出现明显“梯状”条带 .与单纯过氧化氢损伤组相比 ,Smac/DIABLO高表达的C2 C12 肌原细胞经过氧化氢损伤组的Caspase 3和Caspase 9的活化、凋亡核百分率的升高、“梯状”条带的出现均更明显 .结果表明 ,H2 O2 可导致Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放 ,促进Caspase 9和Caspase 3的活化而促进细胞凋亡的发生     

参与细胞凋亡的丝裂原活化蛋白激酶及其作用机制

丝裂原活化蛋白激酶家族（ＭＡＰＫｓ）参与细胞调亡的信号转导过程。在多数细胞中,ＪＮＫ／ＳＡＰＫｓ和ｐ３８诱导细胞调亡,ＥＲＫ促进细胞增殖;但在另一些细胞中则情况相反。ＭＡＰＫｓ途径与死亡受体途径之间存在一定的联系,它们间的交互作用尚待一步研究。     

Caspase 的活化机制

Caspase是一类与凋亡密切相关的蛋白水解酶家族,以Caspase前体酶原的形式存在大多后生动物的细胞中。Caspase在凋亡信号的作用下首先激活启动型Caspase引发Caspase级联反应,然后通过活化的执行型Caspase裂解特异性底物导致细胞凋亡。Caspase的活化是导致细胞凋亡的中心环节,位于Caspase级联反应上游的启动型Caspase的和下游的执行型Caspase有着明显不同的活化机制。     

神经酰胺诱导药物敏感型和耐药型细胞凋亡机制的探讨

以药物敏感型细胞株Ｋ５６２／Ｓ和耐药型细胞株Ｋ５６２／Ａ０２为对象．观察原癌基因Ｂｃｌ－２的表达量在两种细胞中的差异,以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力,并利用酪氨酸激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ,酪氨酸磷酸酯酶抑制剂ｖａｎａｄａｔｅ,观察酪氨酸可逆磷酸化与细胞凋亡间的关系．结果显示：在Ｋ５６２／Ａ０２中Ｂｃｌ－２的表达量明显高于Ｋ５６２／Ｓ;外源性神经酰胺能成功地诱导Ｋ５６２／Ｓ,Ｋ５６２／Ａ０２细胞凋亡,凋亡细胞具有典型的形态学改变和ＤＮＡ“Ｌａｄｄｅｒ”形成,ＦＣＭ检测出现凋亡细胞峰,但在同样的诱导条件下,Ｋ５６２／Ｓ细胞凋亡明显高于Ｋ５６２／Ａ０２细胞．ＦＣＭ检测ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能显著改变这两种细胞生长周期,但细胞阻滞于Ｇ２／Ｍ期,便对神经酰胺诱导的细胞凋亡无明显作用,ｖａｎａｄａｔｅ单独对细胞地明显作用,但与神经酰胺共同作用能明显提高细胞凋亡率．以上结果表明在药物诱导的细胞调亡中Ｂｃｌ－２基因起重要作用,神经酰胺能诱导Ｋ５６２／Ｓ和Ｋ５６２／Ａ０２细胞调亡．     

Caspase家族在细胞凋亡中的研究进展

半胱氨酸蛋白酶（caspase）家族成员是近两年来发现的在细胞凋亡过程中起关键作用的酶,对其深入研究有助于揭示细胞凋亡的发生机制,阐明不同疾病的发病机理。本文介绍了Caspase家族及其在细胞凋亡中的研究近况。     

家蚕Caspase家族基因 BmCaspase-X 的克隆与功能分析

【目的】本研究旨在克隆获得家蚕 Bombyx mori Caspase家族基因,并通过RNAi技术初步分析其在家蚕细胞水平细胞凋亡中的功能。【方法】 用cDNA末端快速扩增方法（rapid amplification of cDNA ends, RACE）克隆家蚕Caspase家族一个新基因,用RNAi和流式细胞术初步分析该基因在家蚕细胞凋亡中的功能。【结果】将克隆获得的家蚕Caspase家族基因命名为 BmCaspase-X,其全长为2 105 bp,开放阅读框长为1 494 bp,编码497 aa,分子量为57.8 kDa,等电点为5.29。BmCaspase-X含有Caspase特有的结构位点。系统进化分析表明,BmCaspase-X与家蚕ICE同其他昆虫Caspase-4同源物先聚在一起,再与具有长前体结构域的昆虫其他因子聚为一类。RNAi初步结果显示该基因干扰后没有出现明显的细胞凋亡。【结论】BmCaspase-X具有典型Caspase特征,属于Caspase家族成员。目前RNAi实验结果表明 BmCaspase-X 未能引起家蚕细胞凋亡的改变。本文为进一步研究该基因的功能奠定基础。     

肝星形细胞凋亡与凋亡相关因子

肝纤维化的本质是肝脏内纤维结缔组织的增生大于降解,致使其过度沉积所致.其中,活化的HSC是产生过量纤维结缔组织的主要细胞.诱导肝星形细胞凋亡成为阻止肝纤维化进程的途径之一.现有研究资料表明多种因素作用于HSC引起的凋亡经由线粒体依赖途径及死亡受体途径进行,参与凋亡的相关因子主要有死亡受体家族、Bcl-2家族部分成员以及Caspase家族.     

白细胞介素1β转化酶家庭与细胞凋亡

白细胞介素１β转化酶家族在细胞凋亡过程中起关键作用身心健康已发现５个成员：ＩＣＥ，ＣＰＰ３２，Ｎｅｄｄ－２／Ｉｃｈ－１，Ｉｃｈ－２ＩＣＥｒｅｌⅢ和ＩＣＥｒｅｌⅢ，它们的高表达能引起细胞调邙，同时也受一些物质的调控。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)cDNA的克隆与表达

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ,ＴＲＡＩＬ）是新近发现的肿瘤坏死因子家族成员,亦称凋亡素２配体（Ａｐｏ２ｌｉｇａｎｄ,Ａｐｏ２Ｌ）［１,２］．由于ＴＮＦ参与机体的免疫调节和炎症反应,并发挥细胞毒作用,因而为世人所瞩目［３,４］．研究表明,ＴＲＡＩＬ与ＴＮＦ和Ｆａｓ／Ａｐｏ１配体一样,为典型的Ⅱ型跨膜蛋白,Ｃ端细胞外区域形成同源三聚体的亚结构,而Ｎ端１５～４０氨基酸为疏水区域并形成跨膜结…     

流感病毒感染诱导MDCK细胞调亡的研究

用荧光染色、ＤＮＡ凝胶电泳等方法检测了Ａ型流感病毒株Ａ１／京防８６－１和Ｂ型流感病毒株Ｂ／沪防９３－１诱导狗肾传代细胞（ＭＤＣＫｃｅｌｌｓ）的凋亡情况,并采用ＭＴＴ法和流式细胞仪比较了这２株病毒对ＭＤＣＫ细胞毒力和调亡诱导能力水平。结果显示：病毒感染６ｈ后,细胞ＤＮＡ发生断裂,病毒感染１２ｈ后,可见明显的染色质凝聚;在一定范围内,细胞调亡强度表现出明显的时间和剂量依赖关系;并且,Ａ型流感病毒株的毒     

Caspase的非凋亡性作用CSCD

Caspase是一类胱天蛋白酶家族。大多数Caspase以半胱氨酸作为裂解底物的亲核基团,通过切割底物蛋白引起细胞凋亡。但是,研究发现Caspase存在非凋亡性作用,即Caspase活化后并不引发细胞凋亡,而是通过剪切不同底物或蛋白质互作,介导其他生物学事件,包括细胞增殖、分化、迁移、存活、形态重塑等。部分细胞的分化依赖于Caspase瞬时或位点局限的激活,细胞形态呈现类似于凋亡(不完全凋亡)的改变。Caspase对信号分子、转录因子的剪切灭活,可发挥转换细胞命运和分化进程的作用。在组织损伤时,应激细胞Caspase活化后,可提高自身防御能力,并通过旁分泌来指导邻近细胞进行补偿修复。因此,Caspase的活化不仅仅是一种细胞死亡信号,它的特定活化还是更改细胞形态、行为、命运的重要应激信号和效应分子。     

Caspase的非凋亡性作用

Caspase是一类胱天蛋白酶家族。大多数Caspase以半胱氨酸作为裂解底物的亲核基团,通过切割底物蛋白引起细胞凋亡。但是,研究发现Caspase存在非凋亡性作用,即Caspase活化后并不引发细胞凋亡,而是通过剪切不同底物或蛋白质互作,介导其他生物学事件,包括细胞增殖、分化、迁移、存活、形态重塑等。部分细胞的分化依赖于Caspase瞬时或位点局限的激活,细胞形态呈现类似于凋亡(不完全凋亡)的改变。Caspase对信号分子、转录因子的剪切灭活,可发挥转换细胞命运和分化进程的作用。在组织损伤时,应激细胞Caspase活化后,可提高自身防御能力,并通过旁分泌来指导邻近细胞进行补偿修复。因此,Caspase的活化不仅仅是一种细胞死亡信号,它的特定活化还是更改细胞形态、行为、命运的重要应激信号和效应分子。     

本期重点推介

正凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)是一类高度保守的内源性抗细胞凋亡因子家族,主要通过抑制Caspase活性和参与调节核因子NF-κB等而抑制细胞凋亡。为了验证家蚕Bombyx mori凋亡蛋白抑制因子(BmI AP)在家蚕细胞内的功能特征及在家蚕细胞凋亡中的作用,西南