半乳甘露聚糖胶酶法改性研究进展

由于半乳甘露聚糖的水溶液在低浓度下仍具高黏性以及它的凝胶性质,因此在工业上具有很多重要的应用。半乳甘露聚糖聚糖的酶法改性主要包括脱去支链和切断主链两种方式。相对于化学改性来说,酶法改性具有易控制、反应条件温和等很多优点,因此成为改变半乳甘露聚糖分子结构以获得所需特性的最具潜力的改性方法。α－半乳糖苷酶和 β－甘露聚糖酶是半乳甘露聚糖改性和水解中最常用的酶。简要介绍了有关这两种酶的来源和新型制备菌株的近期研究概况。在医药和食品等工业中,酶法改性后的半乳甘露聚糖具有很广阔的应用前景。     

枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶活性中心氨基酸的化学修饰

运用化学修饰方法对枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶活性中心的结构进行了研究。结果表明,除了色氨酸和巯基(Cys)外,羧基(Asp/Glu)和丝氨酸残基亦是该酶活性必需氨基酸残基;尽管组氨酸残基对酶活性的维持有重要作用,但不位于酶的活性中心。     

槐种子发育中胚乳细胞半乳甘露聚糖积累的研究

槐 ( Sophora japonica L.)开花约 60 d至种子成熟 ,为胚乳半乳甘露聚糖积累期。用组织化学方法 ,对储藏于胚乳细胞壁上的半乳甘露聚糖的形成积累进行了观察 ,结果表明 ,半乳甘露聚糖最先在邻近胚的胚乳细胞的粗面内质网的囊泡腔内形成 ,并通过细胞质膜分泌至细胞壁周围。此后 ,半乳甘露聚糖的积累逐渐向种皮方向扩展 ,及至种子成熟时 ,除糊粉层外 ,所有胚乳细胞几乎全由多糖所填充。此外 ,对半乳甘露聚糖发生部位及其积累过程的消长变化进行了讨论     

(1,3)-β-D-葡聚糖检测和半乳甘露聚糖抗原检测在侵袭性真菌病诊断中的价值探讨

目的 探讨(1,3)-β-D-葡聚糖检测和半乳甘露聚糖抗原检测在侵袭性真菌病诊断中的价值.方法 回顾性研究北京大学第一医院2008年1月～2010年7月临床疑诊侵袭性真菌病的住院患者.根据诊断标准确定是否诊断侵袭性真菌病.分析非培养诊断方法血清半乳甘露聚糖(GM试验)和血浆(1,3)-β-D-葡聚糖(G试验)的敏感度和特异度,以及二者联合应用后诊断的敏感度和特异度.结果 GM试验灵敏度为70％,特异度为84％;G试验灵敏度为50％,特异度为92％.GM试验和G试验二者联合试验时,其灵敏度和特异度分别为93％和78％.结论 GM试验和G试验均对侵袭性真菌病具有诊断价值,二者联合应用使其应用价值进一步提高.     

曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体,并基于获得的抗体建立用于快速准确检测曲霉菌感染的双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),以期可用于侵袭性曲霉菌病的临床诊断。方法:提取曲霉菌半乳甘露聚糖后免疫BALB/c小鼠,筛选与制备抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体,通过间接ELISA法与Western Blot方法开展单克隆抗体检测性能分析,使用获得的单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA方法,并初步应用于曲霉菌感染血清检测。结果:获得抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体5株,均可特异性识别曲霉菌半乳甘露聚糖,以其中性能最佳的3C9抗体和辣根过氧化物酶标记的3C9抗体配对为基础,建立了双抗体夹心ELISA方法,通过初步评价确定该方法可应用于临床侵袭性曲霉菌病血清检测,并且该方法与现有商品化试剂盒相比检测背景值较低,可更有效区分曲霉菌感染阴阳性血清。结论:本研究筛选获得针对曲霉菌半乳甘露聚糖的特异性单克隆抗体,以该抗体为基础建立双抗体夹心ELISA方法具有潜在转化应用前景,可为侵袭性曲霉菌病的临床诊断提供支持。     

侵袭性肺曲霉菌患者血清半乳甘露聚糖动态变化及与CT影像学关系

目的观察侵袭性肺曲霉菌感染患者抗真菌治疗前后肺泡灌洗液及血清中半乳甘露聚糖(GM)的水平变化、CT影像学特征及血清中性粒细胞数与GM试验阳性率之间的关系,患者血清中性粒细胞值与GM试验阳性率之间的关系。方法连续性纳入60例确诊侵袭性肺曲霉菌感染患者,观察抗真菌治疗前后肺泡灌洗液和血清GM试验动态水平变化。单因素Logistic回归分析CT侵犯肺叶数、空气新月征、晕轮征、血清中性粒细胞值与GM的关系。结果抗真菌治疗前患者肺泡灌洗液GM平均值均高于血清GM平均值(0.62±0.08mg/L,60.0%;0.51±0.07mg/L,31.6%)。同抗真菌治疗前比,患者抗真菌治疗后1个月、2个月、3个月、6个月肺泡灌洗液GM值快速降低(P0.05),而血清GM数值缓慢降低,仅在第3个月、第6个月降低(P0.05)。患者CT侵犯肺叶数、晕轮征与肺泡灌洗液、血清中性粒细胞值GM试验阳性率显著相关。结论肺泡灌洗液及血清GM试验可作为IFD疾病诊断及治疗的重要辅助指标。CT影像学特征、血清中性粒细胞值与GM试验阳性率显著相关。     

血清(1,3)-β-D葡聚糖试验与血清半乳甘露聚糖试验对马尔尼菲篮状菌病的诊断价值CSCD

目的探讨血清(1,3)-β-D-葡聚糖检测(G试验)、血清半乳甘露聚糖试验(GM试验)及联合检测对艾滋病(AIDS)患者中合并马尔尼菲篮状菌病(TSM)的诊断价值。方法回顾性研究住院艾滋病患者中有明确病原学检查确诊马尔尼菲篮状菌(TM)感染且有完善G试验及GM试验的患者45例,及同期住院AIDS患者中有完善G试验、GM试验及病原学检查,明确排除TM感染的219例患者,比较各组G试验、GM试验结果、检测时间,通过对比G试验、GM试验及联合检测方法(联合检测一:G试验和GM试验检测均为阳性为联合检测阳性,一种阳性或均阴性视为阴性结果;联合检测二:单独G试验或GM试验检测为阳性或二者均阳性,即为联合检测阳性,均阴性视为阴性结果)的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、误诊率、漏诊率,并绘制ROC曲线。结果G试验及GM试验的敏感度及特异度差异有统计学意义(P<0.05),G试验敏感度为36.36%,特异度为78.14%,ROC曲线下面积AUC为0.602,95%的置信区间为0.539~0.662。GM试验敏感度为55.56%,特异度为96.80%,ROC曲线下面积AUC为0.819,95%CI为0.767~0.864。联合检测一敏感度27.27%,特异度99.53%,ROC曲线下面积AUC为0.634,95%CI为0.572~0.693。联合检测二敏感度65.91%,特异度76.74%,ROC曲线下面积AUC为0.713,95%CI为0.654~0.768,约登指数为0.4265。结论G试验、GM试验是AIDS合并TSM早期辅助性诊断指标,其中GM试验敏感度、特异度均高于G试验,相比病原学检查,有缩短诊断时间的优点,但不是诊断金标准。在G试验、GM试验及联合检测中,联合检测一可以提高特异度,联合检测二可以提高敏感度。     

国产血清半乳甘露聚糖检测试剂对侵袭性肺曲霉菌病的诊断价值评估

目的：评估国产血清半乳甘露聚糖（Galactomannan,GM）检测试剂对侵袭性肺曲霉菌病的诊断价值。方法根据血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则（第四次修订版）[1]收集临床确诊侵袭性肺曲霉菌病（inva-sive pulmonary aspergillosis,IPA）、临床诊断IPA、拟诊IPA、排除IPA四组病例。采用天津贻诺琦公司酶联免疫吸附法（ELISA）试剂检测纳入的86例患者血清标本的GM浓度,分析其敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）。结果86例病例中,临床诊断27例、拟诊12例、排除47例。在3种不同的阳性判断标准下,敏感性：9444%、9630%、6296%;特异性：5625%、4576%、6441%;PPV：4474%、4483%、4474%;NPV：9643%、9643%、7917%。统计学分析证实标准1（即血清GM值〉095μg/L为阳性,〈075μg/L为阴性,075~095μg/L为灰区,未将灰区加入计算）在3种判断标准中最优,故选择其为最终判断标准。结论该血清GM检测试剂盒诊断性能较好,可以用于侵袭性肺曲霉菌病的辅助诊断。     

短小芽孢杆菌β-1，4-甘露聚糖酶的酶学性质及其在干酪乳杆菌中的表达

摘要:【目的】干酪乳杆菌广泛的应用于食品加工和饲料行业,本研究拟构建表达甘露聚糖酶的重组干酪乳杆菌并进行相关评价。【方法】利用干酪乳杆菌表达载体pELX1和pELSH,将短小芽孢杆菌的β-1,4-甘露聚糖酶成熟肽的基因克隆到上述两个载体中,构建的重组质粒电转化到干酪乳杆菌宿主中,分别构建能够胞内表达和分泌表达甘露聚糖酶的重组干酪乳杆菌。【结果】重组干酪乳杆菌菌株经培养后,胞内表达的β-1,4-甘露聚糖酶在重组细胞总蛋白中最高可达23 U/mg,分泌表达培养基上清的β-1,4-甘露聚糖酶最高达到8.8 U/mL。【结论】本研究首次实现了甘露聚糖酶在干酪乳杆菌中的表达,结果表明该重组干酪乳杆菌具有较大的应用前景,值得进一步研究。     

阴道乳杆菌耐热β-半乳糖苷酶的鉴定

利用改良的MRS培养基,从鸡粪样本中分离到多株产β-半乳糖苷酶的乳酸菌菌株。酶学性质分析发现,菌株1-1产生的β-半乳糖苷酶在37℃~60℃相对稳定,37℃酶活力达到183.9NLU/g菌体干重。进一步分析16S rRNA基因序列,确定菌株1-1为阴道乳杆菌(Lactobacillus vaginalis)。扩增分析β-半乳糖苷酶编码基因lacL和lacM,结果发现LacL亚基有642个氨基酸,LacM亚基有321个氨基酸,与罗伊氏乳杆菌MM2-3相应蛋白的相似性分别为86%和84%。     

癌基因ras对β-1,4-半乳糖基转移酶活性的调节

 研究癌基因ras对细胞表面的 β 1,4 半乳糖基转移酶活性的调节 构建Ha ras表达载体并转染NIH 3T3细胞株 ,测定细胞表面和细胞内 β 1,4 半乳糖基转移酶活性和其mRNA的水平 结果发现ras使NIH 3T3细胞表面的 β 1,4 半乳糖基转移酶活性降低 ,而高尔基体内的活性不变 此外用Northern印迹检测后发现 ,ras不能改变细胞内 β 1,4 半乳糖基转移酶的mRNA水平 这说明癌基因ras能够调节细胞表面β 1,4 半乳糖基转移酶活性 ,但不能改变其转录水平     

β-甘露聚糖酶发酵液絮凝条件的统计学筛选与响应面优化

采用Plackett-Burman(PB)和中心复合设计(Central Composite Design)对影响地衣芽孢杆菌TJ-101发酵生产β-甘露聚糖酶粗发酵液絮凝操作的8个条件进行筛选优化。PB实验设计与统计学分析表明:加水量、阳离子聚丙烯酰胺(C-PAM)和阴离子聚丙烯酰胺(A-PAM)的体积分数是影响酶活收率的3个关键因素。以酶活收率为响应目标,对3因素进行中心复合设计,并经响应面法优化分析得到影响酶活收率的二阶模型,确定了β-甘露聚糖酶发酵液絮凝实验的最优操作条件为:加水量体积分数240.55%,C-PAM体积分数14.13%,A-PAM体积分数16.97%,絮凝后发酵液的酶活收率达70.42%。     

人类β-1,4-半乳糖苷转移酶Ⅲ基因的分离与克隆

以人、牛、鼠、鸡、蜗牛的β-1,4-半乳糖苷转移酶催化区的编码核苷酸序列为探针,在NCBI GenBank EST数据库中进行同源搜寻,获得若干有高度同源的EST.在拼接序列的两端设计引物,以从人胎盘cDNA文库中PCR扩增获得的片段为探针,在人胎盘cDNA分子库中步移获得一个长1,907bp的cDNA片段,包含一个长1,179bp的开放阅读框(ORF,open reading frame),编码393个氨基酸残基。该基因与已知的人类β1,4-GalTI的氨基酸同源性为43.8%,在蛋白质催化区的同源性更高达60.9%。表达谱分析发现该基因在人体16种组织中均有不同程度的表达,转录本大小约为2.4kb.通过该cDNA人/啮齿类杂种细胞株DNA Southern杂交将该基因定位在1号染色体。     

β-甘露聚糖酶AuMan5A/Af酶学性质的改善与其Asp320的相关性分析

【目的】为改善宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(AuMan5A)的酶学性质,本实验室前期将AuMan5A底物结合凹槽内一个7肽(~(316)KSPDGGN~(322))组成的loop替换为烟曲霉5家族β-甘露聚糖酶对应的氨基酸片段(PSPNDHF),得到loop替换突变酶AuMan5A/Af。为揭示AuMan5A/Af酶学性质显著改善与其Asp~(320)的相关性,定点突变构建突变体AuMan5A/Af~(D320G)。【方法】采用大引物PCR技术将AuMan5A/Af基因(Auman5A/Af)中编码Asp~(320)的密码子GAC突变为Gly~(320)的GGT,构建出突变体基因Auman5A/Af~(D320G),并在毕赤酵母GS115中进行表达,分析表达产物AuMan5A/Af~(D320G)的酶学性质。【结果】AuMan5A/Af~(D320G)的最适温度T_(opt)为70.0℃,变性温度T_m为71.5℃,介于AuMan5A(T_(opt)=65.0℃,T_m=64.5℃)和AuMan5A/Af(T_(opt)=75.0℃,T_m=76.6℃)之间;在70.0℃的半衰期为40 min,高于AuMan5A的10 min,但较AuMan5A/Af的480 min显著缩短;比活性分别是AuMan5A和AuMan5A/Af的2.7和0.3倍;催化效率(k_(cat)/K_m)分别是AuMan5A和AuMan5A/Af的3.9和0.3倍。【结论】将Asp~(320)突变为Gly~(320)显著影响了AuMan5A/Af的酶学性质,证明了Asp~(320)对AuMan5A/Af温度特性改善、比活性和催化效率显著提高的重要作用。     

细胞诱导分化剂对HL60细胞β-1,4-半乳糖基转移酶活性的影响

用荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ）,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞β－１,４－半乳糖基转移酶的活性检测方法．研究了ＨＬ６０细胞在体外低血清培养后不同的时间其酶活性的变化,发现１２至２４ｈ酶活性达到一个高峰,为５０．１４ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（１０６ｃｅｌ）,此时细胞处在分裂间期,其它各测定时间变化不大．用ＰＭＡ,ＲＡ等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其活性发生了较明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其酶活性在２４ｈ变化最大,升高到对照的１．３２倍;而ＲＡ处理的细胞其酶活性在７２ｈ变化最大,升高到对照的２．１５倍．     

β-1,4半乳糖基转移酶-I在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化

目的分析β-1,4半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)mRNA在正常和损伤坐骨神经髓鞘上的定位及其表达变化.方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-I在小鼠坐骨神经中的表达水平.将RT-PCR扩增的β-1,4-GalT-I片段,克隆到pGEM-T载体中.采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针.通过原位杂交及图像分析的方法,分析β-1,4-GalT-I mRNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的定位及其表达变化.结果检测到β-1,4-GalT-I在大鼠坐骨神经的髓鞘中有表达,并在坐骨神经损伤后1～2d内表达最高,随后表达下降.结论提示β-1,4-GalT-I可能在周围神经最主要的胶质细胞-施万细胞中表达,并在周围神经损伤后发生表达变化,这样为进一步分析β-1,4-GalT-I在周围神经再生中的调控机制奠定基础.     

冷藏方式对桃采后果胶含量和β-半乳糖苷酶活性的影响

以采后包装和不包装的'大久保'桃果实为材料,分别测定了其在8℃冷藏(A)、8℃冷藏10 d后转入0℃贮藏(B)和0℃冷藏(C)方式下的硬度、出汁率、果胶含量和β-半乳糖苷酶活性的变化.结果表明:在A、B冷藏方式下,包装较不包装处理显著抑制了果实的硬度下降、原果胶含量减少和可溶性果胶含量增加,降低了果实出汁率和β-gal活性;与冷藏期比较,货架期后冷藏方式A和B果实表现为硬度下降、原果胶含量减少、可溶性果胶含量增加,以及出汁率和β-gal活性升高.与冷藏方式A和B比较,冷藏方式C果实的硬度和原果胶含量较高,出汁率和可溶性果胶含量较低;货架期后,不包装的果实硬度和原果胶含量增加,可溶性果胶含量和β-gal活性降低,但包装处理却能减缓上述现象的发生.研究表明,桃采后用30 μm聚乙烯袋包装、于8℃冷藏10 d后转入0℃贮藏处理,能使桃果实在贮藏期保持较低的可溶性果胶含量和较高的原果胶含量和出汁率,并能使桃在货架期正常后熟软化,是贮藏桃的一种较好方式.     

β-1，4半乳糖基转移酶-Ⅰ在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化

目的分析β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferaseⅠ,β-1,4-GalT-Ⅰ)mRNA在正常和损伤坐骨神经髓鞘上的定位及其表达变化。方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-Ⅰ在小鼠坐骨神经中的表达水平。将RT-PCR扩增的β-1,4-GalT_I片段,克隆到pGEM-T载体中。采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-ⅠRNA探针。通过原位杂交及图像分析的方法,分析β-1,4-GalT-ⅠmRNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的定位及其表达变化。结果检测到β-1,4-GalT-Ⅰ在大鼠坐骨神经的髓鞘中有表达,并在坐骨神经损伤后1～2d内表达最高,随后表达下降。结论提示β-1,4-GalT-Ⅰ可能在周围神经最主要的胶质细胞一施万细胞中表达,并在周围神经损伤后发生表达变化,这样为进一步分析β-1,4-GalT-Ⅰ在周围神经再生中的调控机制奠定基础。     

半乳凝集素-3与肿瘤形成和转移的关系研究进展

半乳凝集素-3是β-半乳糖苷凝集素家族的蛋白,广泛分布于各种正常组织和肿瘤组织,在不同的生理及病理条件下发挥着多种生物功能。目前有关半乳凝集素-3与肿瘤细胞的黏附、增殖、血管生成、肿瘤组织的发展及转移的研究取得了较大的进展,并成为疾病诊治特别是癌症治疗的很有前景的靶标。简要综述了半乳凝集素-3与癌症相关性的研究进展。     

3,4-二羟基苯乙酮胁迫对天山云杉种子萌发过程中内源植物激素含量变化的影响

3,4-二羟基苯乙酮(DHAP)是天山云杉(Picea schrenkiana ssp. tianschanica)叶和凋落物中存在的主要自毒物质, 是导致天山云杉林天然更新障碍的原因之一。为了解释自毒物质发生作用的生理机制, 该文设计多个浓度梯度的DHAP溶液处理天山云杉种子, 以发芽率和发芽势为种子萌发参数, 运用反相超高效液相色谱(UPLC)分析技术, 检测了种子萌发过程中内源植物激素玉米素(ZT)、赤霉素(GA₃)、吲哚乙酸(IAA)和脱落酸(ABA)含量水平的变化。研究结果表明: DHAP处理对天山云杉种子萌发影响具有浓度效应, 表现为5.0 mmol·L^-1 > 0.1 mmol·L^-1 > 1.0 mmol·L^-1 >对照, 即5.0 mmol·L^-1 DHAP处理组对种子萌发的抑制作用最强、0.1 mmol·L^-1 DHAP处理组次之、1.0 mmol·L^-1 DHAP处理组最弱; DHAP处理组的种子内源ZT、GA₃浓度水平降低, ABA含量升高, GA₃浓度峰值出现时间延迟, IAA浓度在高浓度(5.0 mmol·L^-1 DHAP)处理组短时间内(3-6天)过量积累, 1.0和5.0 mmol·L^-1 DHAP处理组的种子内源ABA浓度峰值出现时间延迟; DHAP处理种子萌发1-6天时, ZT/(GA₃+IAA)比值降低, IAA/ZT、ABA/ZT比值增大; ABA/(ZT + GA₃ + IAA)比值在0.1 mmol·L^-1 DHAP处理组增大, 在5.0 mmol·L^-1 DHAP处理组降低。DHAP处理引发种子内源激素含量水平及激素含量间比值变化, 可能是抑制、延迟天山云杉种子萌发的主要原因。