GM—CSF和IL—3对脐带血CD34＋细胞植入骨髓基质的促进作用

利用抗ＣＤ３４单克隆抗体吸附磁性微球的方法分离纯化脐带血ＣＤ３４＾＋细胞,将其种入照射后的成年骨髓基质。比较ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３及两者的联合对植入效率的促进作用。结果表明：经２ｈ铺展贴壁后,对照组只有３６％的ＣＤ３４＾＋细胞植入基质,而生长因子预处理组则有６８－８９．６％的ＣＤ３４＾＋细胞植入基质。在长期液体培养体系中则显示了植入ＣＤ３４＾＋细胞多的处理组造血重建快速而持久。表明ＧＭ－ＣＳＦ     

利用IL－3／GM－CSF融合蛋白（PIXY－321）扩增脐血造血细胞方法的初步建立

利用单克隆抗体免疫磁珠吸附方法分离脐血ＣＤ３４＋细胞,并观察了ＩＬ３／ＧＭＣＳＦ融合蛋白（ＰＩＸＹ３２１）对脐血ＣＤ３４＋细胞的刺激作用。ＰＩＸＹ３２１对脐血ＣＤ３４＋细胞扩增作用大于ＩＬ３和ＧＭＣＳＦ单独及联合应用。在液体培养条件下,每毫升２０ｎｇＰＩＸＹ３２１可有效地扩增脐血造血祖细胞,适宜扩增时间为５－８天,扩增后造血祖细胞的数量可达扩增前的８－１０倍,从而初步建立了一种简单可行的脐血造血细胞扩增方法。     

利用IL—3／GM—CSF融合蛋白（PIXY—321）扩增脐血造血细胞方…

利用单克隆抗体免疫磁珠吸附方法脐血ＣＤ３４＋细胞,并观察了ＩＬ－３／ＧＭ－ＣＳＦ融合蛋白（ＰＩＸＹ－３２１）对脐血ＣＤ３４＋细胞的刺激作用。ＰＩＸＹ－３２１对脐血ＣＤ３４＋细胞扩增作用大于ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦ单独及联合应用,在液体培养条件下,每毫升２０ｎｇＰＩＸＹ－３２１可有效地扩增脐血造血祖细胞,适宜扩增时间为５－８天,扩增后造血细胞的数量可达扩增前的８－１０倍,从而初步建立了一种简单可行的脐     

人骨髓CD34^＋造血细胞体外扩增形成HPP—CFC造血祖细胞的能力

目的和方法：高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰＣＦＣ）是表达ＣＤ３４＋ＤＲＬｉｎ－的最早期造血祖细胞之一,它在体外的增殖分化能力可反映造血干细胞的某些特征。结果：本文研究了人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞在体外扩增和形成ＨＰＰＣＦＣ的能力。利用ＣＩＭＳ１００免疫磁性分离术首先获得＞９０％的ＣＤ３４＋造血细胞以富集ＨＰＰＣＦＣ。在含有Ｅｐｏ＋ＧＭＣＳＦ＋ＩＬ３＋ＩＬ６＋ＳＣＦ（简ＥＧＩＩＳ）的无基质液培条件下,ＣＤ３４＋造血细胞在四周内可持续产生单个核细胞和ＨＰＰＣＦＣ,并使其总量最高可达１７７０倍和８倍,以第２和３周为最佳时期,但不同个体ＣＤ３４＋造血细胞的这种能力差别较大。结论：高度纯化的人骨髓ＣＤ３４＋造血细胞能够在含有最佳组合造血生长因子的无基质液培条件下持续扩增,为临床应用提供了重要依据。     

外源性神经节苷脂对人－肝癌培养细胞内钙的作用及其方式

本工作采用荧光探针Ｆｕｒａ－２ＡＭ观察了外源性神经节苷脂ＧＭ３和ＧＤ３对ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌培养细胞钙的影响,证明ＧＭ３和ＧＤ３均能升高细胞内钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）,但程度上有极大差异。１０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＭ３或１．０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＤ３可使［Ｃａ２＋］ｉ上升高是明显,与对照相比［Ｃａ２＋］ｉ分别增加２１５～２５０％和４２％。进一步用Ｖｅｒａｐａｍｉｌ阻断钙通道和内质网钙释放、去除细胞外Ｎａ＋以抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换以及去除细胞外Ｃａ２＋在无外钙内流等系统观察了ＧＭ３和ＧＤ３的作用方式,结果提示ＧＭ３升高［Ｃａ２＋］ｉ的机制是一个同时增加内质网钙释放、激活钙通道并伴有质膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶激活的综合结果;而ＧＤ３则主要抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换系统。     

人重组GM－CSF／HAS－D3嵌合蛋白（GM－HSA）在大肠杆菌中的表达及其产物稳定性的研究

将人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人血清白蛋白第三功能区（ＨＡＳ－Ｄ３）的基因串联后,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获高效表达,表达量占菌体蛋白的３２．６％．利用ＴＦ－１体外细胞活性测定表明,ＧＭ－ＨＳＡ的活性单位为１．０４×１０~６Ｕ／ｍｇ,虽然其比活性低于ＧＭ－ＣＳＦ,但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性．     

FL对脐血造血细胞长期液体培养的影响

用脐血进行干细胞移植有许多优点,但有一个主要的缺点是可获得的细胞数量有限,因此脐血干细胞的体外扩增对于其临床应用具有重要意义。考察了Ｆｌｔ－３配体（ＦＬ）和干细胞因子（ＳＣＦ）,白介素３（ＩＬ－３）,ＩＬ－６,粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）,粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）的组合对脐血细胞扩增和分化的影响,培养４２ｄ,总细胞最多扩增了３８５．３０±１６３．５１倍（ＦＬ＋ＳＣＦ＋Ｇ－ＣＳ     

重组IL－6与IL－3或／和GM－CSF合用对正常BN大鼠粒单系体外造血的调控效应

本研究探讨了重组人ＩＬ－６与大鼠ＩＬ－３和／或小鼠ＧＭ－ＣＳＦ结合对正常ＢＮ大鼠粒单系体外造血的调控效应。结果表明,ＩＬ－６在１０００－４０００Ｕ／ｍｌ呈剂量依赖性刺激粒系造血祖细胞集落形成及骨髓细胞的ＤＮＡ合成,集落以ＧＭ型为主,其刺激活性低于ＩＬ－３或ＣＭ－ＣＳＦ。ｌＬ－６与ＩＬ－３和／或ＧＭ－ＣＳＦ的结合对粒单系集落形成及ＤＮＡ合成无协同或相加作用,甚至出现拮抗效应,但却显著增大集落。提示ＩＬ－６可能具有双向调控作用,促进早期造血细胞的增殖,拮抗其它因子对晚期粒单系造血的刺激作用;具有重叠生物效应的这３种细胞因子在调控造血时,它们之间的相互作用应是顺序的而不是同时的。     

小鼠胎肝基质细胞系MFLC自发分泌多种细胞因子

在无外源刺激条件征,我室所建小鼠胎肝基质细胞系ＭＦＬＣ可自发分泌多处类型细胞因子,其中ＩＬ－６及化学趋化因了水平较高,ＧＭ－ＣＳＦ较低,但示检测到ＩＬ－３及ＩＬ－７活性,引细胞上清对小鼠骨髓造血干细胞有明显的促集落形成效应。并呈现剂量依赖关系,所形成的集落以ＣＦＵ－ＧＭＭ及ＣＦＵ－ＧＭ为主,此细胞上清还促进５－Ｆｕ耐受小鼠骨髓造血干细胞的集落形成,提示上清中存在ＳＣＦ样活性成份。上述结果表明,ＭＦ     

小鼠胸树突状细胞系自发分泌多种类型细胞因子

建成小鼠胸腺基质细胞系，命名为ＭＴＳＣ４，经鉴定分析认为是ＤＣ来源。在无外来刺激条件下，ＭＴＳＣ４细胞可自发分泌多种类型细胞因子，已检测到的有ＩＬ－１，ＩＬ－６，ＩＬ－７，ＣＳＦ，ＩＦＮ及趋化因子（ＣＦ）等。其中ＩＬ－６，ＩＦＮ为较高水平分泌量，ＩＬ－１、ＣＦ为中等水平，ＩＬ－７、ＣＳＦ为较低水平分泌量。ＭＴＳＣ４不能自发分泌ＩＬ－３及ＴＮＦａ。ＭＴＳＣ４的建立有利于分析胸腺选择特别是阴性选择的机     

锂对小鼠高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞体外增殖的影响

本文观察了锂对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）和粒巨噬系祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ体外增殖的影响。ＨＰＰ－ＣＦＣ集落由ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＷＥＨＩ３条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ,含有ＩＬ－３）及Ｌ９２９条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ,含有Ｍ－ＣＳＦ）所支持,而ＣＦＵ－ＧＭ由ＷＥＨＩ３－ＣＭ所支持。结果显示,ＬｉＣｌ浓度在０．４－２ｍｍｏｌ／Ｌ时呈现剂量依赖性抑制ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖;而在０．４－１ｍｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内,则对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖起剂量依赖性促进作用。这些结果提示ＬｉＣｌ对ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ的作用不同,可能锂有诱导ＨＰＰ－ＣＦＣ向成熟细胞分化的作用     

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子／白细胞介素—3融合蛋白的表达研究

利用ＰＣＲ扩增得到粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素－３（ＩＬ－３）完整基因片段,将其分别克隆ｐＧＥＭ－Ｔ构建成ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合蛋白基因,ＤＮＡ序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对７２ＲＮＡ聚合酶表达载体ｐＴ７ｚｚ,得到表达质粒ｐＦｕ,经转化至表达宿主Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）,在ＩＰＴＧ诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴     

重组IL—6与IL—3或／和GM—CSF合用对正常NB大鼠粒单系体外…

本研究探讨了重组人ＩＬ－６与大鼠ＩＬ－３和／或小鼠ＧＭ－ＣＳＦ结合对正常ＢＮ大鼠粒单系体外造血的调控效应。结果表明,ＩＬ－６在１０００－４０００Ｕ／ｍｌ呈剂量依赖性刺激粒系造血祖细胞集落形成及骨髓细胞的ＤＮＡ合成,集落以ＧＭ型为主,其刺激活性低于ＩＬ－３或ＧＭ－ＣＳＦ。ＩＬ－６与ＩＬ－３和或ＧＭ－ＣＳＦ的结合对粒单系集落形成及ＤＮＡ合成无协同或相加作用,甚至出现拮抗效应,但却显著增大集落,提示ＩＬ     

血小板第四因子保护造血前体细胞及其作用机制的研究

我们曾报道血小板第四因子（ＰＦ４）是巨核细胞形成的有效的抑制因子,它可以保护干细胞免遭５－ＦＵ的毒性作用。本研究中试比较ＰＦ４和ＴＧＦ－β１对人脐带血ＣＤ３４＾＋来源的ＭＫ的作用。ＰＦ４（５ｕｇ／ｍｌ）和ＴＧＦ－β（１ｎｇ／ｍｌ）在半固态凝块培养和悬浮培养中明显抑制人脐带血ＣＤ３４＾＋来源的ＭＫ的生长。用ＰＦ４处理的ＣＤ３４＾＋细胞在撒去ＰＥ４后仍能再生成集落,说明ＰＦ４的抑制作用的可逆性的。相反     

IL－7对早期胸腺细胞发育的作用

胸腺基质细胞分泌白细胞介素７（ＩＬ－７）。ＩＬ－７是早期Ｔ细胞的重要生长因子之一。它能选择性促进ＣＤ４－ＣＤ８－和ＣＤ４＋ＣＤ８－／ＣＤ４－ＣＤ８＋细胞增殖。ＩＬ－７主要维持早期前体Ｔ细胞存活,同时保持其Ｔ前体细胞潜能。ＩＬ－７对胸腺细胞分化的作用目前仍有争议。     

人GM—CSF cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达

从诱导的人胚肺细胞ＨＦＬ株中提取总ＲＮＡ．经ＲＴ－ＰＣＲ反应获取了人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ,ＤＮＡ序列测定表明其顺序与文献报道完全一致。为了获得高效表达,应用ＰＣＲ改造了人ＧＭ－ＣＳＦ的ｃＤＮＡ５’端核苷酸序列,并将改造的人ＧＭ－ＣＳＦ基因插入含Ｔ７启动子的质粒ｐＥＴ－１１ｄ构建成表达质粒ｐＥＴＣ－５,将此质粒转化大肠杆菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）得到表达菌株ＢＬＥＣ４。表达菌株用０．５ｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导２小时后,产生大量重组蛋白并形成包涵体。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳图谱扫描结果表明,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ产量占菌体总蛋白量的１６％。ＥＬＩＳＡ和ＴＦ－１细胞培养测定表明,初步纯化和复性的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ具有天然的ｈＧＭ－ＣＳＦ生物活性。     

锂对小鼠高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞体外增殖…

本文观察了锂对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ体外增殖的影响。ＨＰＰ－ＣＦＣ集落由ＩＬ－１,ＩＬ－６,ＷＥＨＩ３条件培养液及Ｌ９２９条件培养液所支持,而ＣＦＵ－ＧＭ由ＷＥＨＩ３－ＣＭ所支持。结果显示,ＬｉＣｌ浓度在０．４－２ｍｍｏｌ／Ｌ时呈现剂量依赖性抑制ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖;而在０．４－１ｍｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内,则对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖起剂量依赖性促进作用。     

人胎肝中一种35kD成分的造血调控研究

３－５月胎龄人肝脏造血异常活跃。其中造血干细胞约有３０－４０％处于细胞周期Ｓ期,远高于成年骨髓中约１０％的比例。胎肝中存在活性很高血的造血干细胞增殖刺激因子可能是这一活跃功能的分子基础。基于这种事实,本文用小鼠ＣＦＵ－Ｓ“自杀”率对这种活性进行了检测。经过多步分离纯化,获得一分子量约３５ｋＤ的单一活性组分,定名为ＦＬＳ－４。ＦＬＳ－４作用于脐带血ＣＤ３４细胞,使其＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率提高近１倍,与     

外源性GM3／GD3对人肝癌培养细胞原癌基因表达的研究

应用原位分子杂交技术及细胞图像分析证实了人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１细胞经１０μｇ／ｍｌ的ＧＭ３／ＧＤ３处理后,ＧＤ３处理组织内Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号弥漫分布于整个细胞,而经ＧＭ３处理组和对照组阳性信号集中于核模,ＧＭ３／ＧＤ３处理组及对照组ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号均集中核膜,但ＧＭ３处理组信号强度最大,上述结果提示,ＧＤ３可使某些肿瘤细胞向更加恶性的方向发展,而ＧＭ３则可使某些     

GM_3、GD_3作用下SMMC－7721肝癌细胞内磷脂酰肌醇（1，4，5）三

外源性ＧＭ３（１０ｎｍｏｌ／ｍＬ）、ＧＤ３（１ｎｍｏｌ／ｍＬ）可使ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌培养细胞内钙浓度呈快速的短暂升高,其到达峰值时间为４５秒,一次作用后,内钙水平于２－３ｍｉｎ内恢复至对照水平。在一定时间间隔中连续几次加入ＧＭ３或ＧＤ３后内钙水平的变化表明,ＧＭ３所引起的［Ｃａ２＋］ｉ的增加依赖于内质网钙贮的释放和细胞外钙的流入;而ＧＤ３增加［Ｃａ２＋］ｉ与此二系统无关。进一步研究表明,在细胞内钙达峰值时,１０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＭ３可使ＩＰ３（１,４,５）浓度增加９．３倍,ｃＡＭＰ浓度增加８２％;１ｎｍｏｌ／ｍＬＧＤ３反使Ｉｐ３浓度增加１．２倍,提示ＧＭ３、ＧＤ３升高内钙的不同机制。