索拉菲尼联合阿霉素对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用

目的：探讨索拉非尼（Sorafenib）和阿霉素（adriamycin）联合用药对肝癌细胞株nepG2的作用及可能的机制。方法：以不同浓度索拉非尼和不同浓度阿霉素分别组成单药组和索拉非尼＋阿霉素联合用药组作用于HepG2细胞,MTT法检测增殖抑制率、流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果：索拉非尼、阿霉素单药与联用均能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量依赖效应,两药联用有协同效应（P〈0.01）。索拉非尼、阿霉素单药与联用均能诱导HepG2细胞凋亡,并以联合组更为明显,与对照组比较有显著的统计学意义（P〈0.01）。索拉非尼及阿霉素单药作用均可使细胞周期阻滞于G0-G1期,联合用药组G0/Gl期细胞比率低于索拉非尼及阿霉素单药组,S期细胞比率高于单药组;阿霉素能抑制HepG2细胞Survivin mRNA表达诱导细胞的凋亡。结论：索拉非尼与阿霉素联合作用于人肝癌HepG2细胞具有协同作用,其机制可能是通过多途径共同抑制HepG2细胞增殖及诱导细胞凋亡。     

长链非编码RNA UCA1在胃癌多药耐药中的作用研究

目的:研究胃癌耐药细胞及其亲本细胞中长链非编码RNA UCA1的表达差异,探讨UCA1在胃癌多药耐药中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测胃癌耐药细胞SGC7901/ADR、SGC7901/VCR及其亲本细胞SGC7901中UCA1的表达差异;通过si RNA转染降低SGC7901/ADR中UCA1表达,MTT法检测细胞半数抑制浓度(IC50)的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡变化。结果:QRT-PCR结果显示,UCA1在SGC7901/ADR和SGC7901/VCR胃癌耐药细胞表达显著高于SGC7901胃癌亲本细胞;MTT实验表明,干扰UCA1的SGC7901/ADR相对于阴性对照(NC)组的IC50显著降低;凋亡检测结果显示,在相同剂量化疗药物作用下,干扰UCA1后SGC7901/ADR凋亡率显著高于NC组;Western blot证实,干扰UCA1表达可显著降低BCL-2蛋白表达。结论:长链非编码RNA UCA1在胃癌耐药细胞表达显著升高,干扰UCA1表达可明显逆转胃癌耐药,UCA1可作为治疗胃癌耐药的重要分子靶标。     

SAHA与顺铂联合用药对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响

该文研究了组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合顺铂(cisplatin,DDP)对骨肉瘤细胞的作用。骨肉瘤143B细胞分别经不同浓度的SAHA、DDP、SAHA+DDP作用48 h。利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;分别采用MTT法、流式细胞术、细胞划痕实验、克隆形成实验检测SAHA、DDP及二者联用对143B细胞活力、细胞凋亡、细胞迁移和集落形成能力的影响。利用Western blot检测143B细胞中cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP蛋白表达水平。结果显示,SAHA+DDP组143B细胞大量坏死,抑制细胞增殖的现象明显高于单药组;中低剂量SAHA与DDP联用表现为协同作用,而较高剂量的联用表现为单纯相加作用;SAHA+DDP组较单药组细胞早期凋亡率增加、迁移率明显降低,且SAHA+DDP组的细胞集落形成能力明显降低;SAHA+DDP组能够促进cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP的蛋白表达。以上结果表明,SAHA联合顺铂对骨肉瘤细胞143B细胞有协同增敏作用,能够明显抑制其增殖和迁移并促进其凋亡。     

利用lncRNA和mRNA表达谱揭示热疗对胃癌耐药细胞SGC-7901/DDP增敏的机制（英文）

药物耐药导致胃癌(gastric cancer, GC)细胞对化疗的敏感性降低,而热疗(hyperthermia, HT)可以增加化疗的敏感性并引起细胞内基因发生特异性表达。然而,热疗增强细胞SGC-7901/DDP对顺铂(cisplatin,diaminedichloroplatinum, DDP)敏感性的分子机制研究尚缺乏报道。在本研究中,利用MTT实验和流式细胞术分析了对照组、DDP组、HT组和DDP联合HT组细胞SGC-7901/DDP的增殖与凋亡情况。采用高通量微阵列分析和实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析热疗增敏的分子机制。结果显示,与DDP组相比,HT组与DDP联合HT组的细胞增殖被显著抑制(P0.001),而与DDP联合HT组细胞相比,HT组细胞增殖受抑制更为显著(P0.05);与DDP组相比,HT组、DDP联合HT组细胞发生早期凋亡的比例显著增加(P0.001),且DDP联合HT组明显高于HT组(P0.05),表明HT增强了顺铂对细胞SGC-7901/DDP的敏感性。相比对照组,在DDP联合HT干预后,LINC00161和TCONS_00018082上调(P0.01),LINC00473和TCONS_00015171下调(P0.01);另外,DDP联合HT组比对照组中的差异表达mRNA显著富集在凋亡信号通路、TGF-β信号通路和Notch信号通路(P0.05)。本研究提示,热疗可能通过调控上述lncRNA和相关通路增强细胞SGC-7901/DDP对顺铂的敏感性。     

华蟾素联合顺铂对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究华蟾素联合顺铂对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡的影响,并探寻联合治疗增敏的可能分子机制。方法:采用不同浓度的华蟾素、顺铂单药和华蟾素联合顺铂处理人骨肉瘤U2OS细胞1-3天,通过CCK-8法检测其对U2OS细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测其对U2OS细胞集落形成能力的影响;流式细胞仪检测其对U2OS细胞凋亡的影响;RT-PCR及Western blotting检测Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9等凋亡相关分子mRNA及蛋白水平的表达。结果:单用华蟾素或顺铂均可以浓度和时间依赖的方式抑制骨肉瘤U2OS细胞的增殖并诱导其凋亡,两药联合应用具有协同效应,并可以上调促凋亡基因Bax下调抑制凋亡基因Bcl-2的表达;联合用药组凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9的表达较单药组明显增加。结论:华蟾素联合顺铂与单一用药相比能够显著抑制人骨肉瘤细胞U2OS细胞的增殖,促进其凋亡,两药联合应用对骨肉瘤细胞的杀伤效应具有一定的协同效应,其机制可能与激活凋亡通路有关。     

慢病毒介导的siRNA联合紫杉醇抑制胃癌细胞增殖的研究

目的:探讨慢病毒介导的靶向血管内皮生长因子(VEGF)的RNAi对人胃癌细胞SGC7901增殖、细胞凋亡及紫杉醇药物敏感性的影响.方法:慢病毒VEGF-RNAi-LV感染SGC7901细胞后,MTT法检测RNAi及RNAi联合紫杉醇对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化,Hoechst33258染色观察细胞的凋亡.结果:MTT结果显示:与未感染病毒的SGC7901细胞及感染阴性病毒对照NC-LV的胃癌细胞比较,VEGF-RNAi-LV感染后的胃癌细胞生长缓慢,对紫杉醇的敏感性增加;流式细胞周期分析结果表明VEGF-RNAi-LV转粢后的细胞GO/GI期比例升高,S期和G2/M期比例降低;Hoechst33258染色结果证实VEGF-RNAi-LV组细胞核出现典型的凋亡形态学改变.结论:慢病毒介导的RNAi可明显抑制人胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,提高胃癌细胞对紫杉醇的敏感性.     

吴茱萸碱不同加药时序对胃癌SGC7901细胞放射敏感性的影响北大核心CSCD

在前期实验证实吴茱萸碱(Evodiamine,EVO)对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞有放射增敏的作用,为进一步研究EVO作为放射增敏剂应用的可能性,并探讨不同加药时序对放射增敏作用的影响是否有差异,采用EVO联合射线作用于胃癌SGC7901细胞探讨EVO对其放射敏感性的影响。采用MTT法检测不同时间点、浓度EVO对SGC7901细胞增殖的抑制率,并检测低浓度EVO不同加药顺序联合射线后对SGC7901细胞增殖的抑制率;克隆形成实验分析联合作用对SGC7901细胞克隆形成能力的影响,拟合存活曲线并计算各组细胞放射增敏比;流式细胞术分析EVO联合放射线作用后细胞周期分布变化;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase3的表达水平。通过上述实验方法得到EVO对SGC7901细胞的生长抑制作用呈时间、剂量依赖,并且不同加药顺序对细胞增殖的抑制效果不同(P<0.05)。克隆形成实验中求得联合作用组各放射剂量下的存活分数、放射生物学敏感参数均低于单独放射组,且联合作用组中先加药组的增敏效果优于后加药组(P<0.05)。流式细胞术检测EVO联合不同放射剂量使细胞周期阻滞在G2/M期的比率明显高于单独放射组及单独加药组(P<0.05)。Western blot结果提示联合作用组中凋亡蛋白caspase3的表达高于单独放射组及单独加药组(P<0.05)。综上所述,EVO对SGC7901细胞有放射增敏作用,并且不同加药顺序对放射增敏作用的影响不同,联合作用中先加药后放射的效果优于先放射后加药组,其增敏效果的作用机制可能与联合作用导致细胞G2/M期阻滞、凋亡蛋白caspase3表达增加有关。     

重组骆驼蓬脂转移蛋白与顺铂联合抑制黑色素瘤B16细胞增殖效应的研究

旨在探讨重组骆驼蓬脂转移蛋白(Recombinant Peganum harmala lipid transfer protein,r Ph LTP)与顺铂(DDP)联用对鼠黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。MTT法检测r Ph LTP、顺铂单独及联用后对鼠黑色素瘤B16细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡,活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(Δψm)的变化情况。结果显示,r Ph LTP和DDP联用后细胞生长抑制率和凋亡率显著高于DDP单独处理组(P0.01);而且胞内ROS升高的水平均高于单独处理组(P0.01),胞内Δψm水平均低于单独处理组,但无显著性差异。r Ph LTP可增强顺铂对B16细胞的生长抑制并促进细胞凋亡,与顺铂具有协同作用。     

吴茱萸碱不同加药时序对胃癌SGC7901细胞放射敏感性的影响

在前期实验证实吴茱萸碱(Evodiamine,EVO)对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞有放射增敏的作用,为进一步研究EVO作为放射增敏剂应用的可能性,并探讨不同加药时序对放射增敏作用的影响是否有差异,采用EVO联合射线作用于胃癌SGC7901细胞探讨EVO对其放射敏感性的影响。采用MTT法检测不同时间点、浓度EVO对SGC7901细胞增殖的抑制率,并检测低浓度EVO不同加药顺序联合射线后对SGC7901细胞增殖的抑制率;克隆形成实验分析联合作用对SGC7901细胞克隆形成能力的影响,拟合存活曲线并计算各组细胞放射增敏比;流式细胞术分析EVO联合放射线作用后细胞周期分布变化;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase3的表达水平。通过上述实验方法得到EVO对SGC7901细胞的生长抑制作用呈时间、剂量依赖,并且不同加药顺序对细胞增殖的抑制效果不同(P0.05)。克隆形成实验中求得联合作用组各放射剂量下的存活分数、放射生物学敏感参数均低于单独放射组,且联合作用组中先加药组的增敏效果优于后加药组(P0.05)。流式细胞术检测EVO联合不同放射剂量使细胞周期阻滞在G2/M期的比率明显高于单独放射组及单独加药组(P0.05)。Western blot结果提示联合作用组中凋亡蛋白caspase3的表达高于单独放射组及单独加药组(P0.05)。综上所述,EVO对SGC7901细胞有放射增敏作用,并且不同加药顺序对放射增敏作用的影响不同,联合作用中先加药后放射的效果优于先放射后加药组,其增敏效果的作用机制可能与联合作用导致细胞G2/M期阻滞、凋亡蛋白caspase3表达增加有关。     

紫草素逆转埃克替尼对肺癌EGFR-TKI 耐药及其机制的研究

目的:观察紫草素联合埃克替尼对肺腺癌耐药细胞H1975增殖的影响,探讨克服耐药可能的作用机制。方法:应用MTT法检测紫草素(1.25~20μmo/L)、埃克替尼(5~100μmol/L)及两药联合干预对H1975细胞生长的抑制作用;流式细胞术观察紫草素(1.25μmol/L)、埃克替尼(10μmol/L)及联合使用对H1975凋亡作用;Western blot检测不同干预对H1975细胞EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK和凋亡相关蛋白PARP表达水平的影响。结果:MTT检测结果显示,与单药组相比,联合用药组细胞H1975增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P0.05);流式细胞术结果显示,联合用药组细胞的凋亡率达到(52.45±3.04)%,较紫草素组细胞凋亡率(22±1.17)%和埃克替尼处理组细胞凋亡率(15.35±5.85)%明显提高,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,单药组下调了p-EGFR、p-Akt蛋白水平的表达,而联合用药组显著抑制了p-ERK、PARP蛋白水平的表达,差异有统计学意义(P0.05),EGFR、AKT、ERK蛋白表达无差异(P0.05)。结论:紫草素联合埃克替尼能明显抑制H1975细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡;抗肿瘤机制可能与调节EGFR信号通路相关蛋白表达有关。