阴道乳杆菌诱导细菌性阴道病患者β-防御素2表达及其抗菌活性的研究

目的 观察阴道乳杆菌诱导阴道黏膜细胞表达β防御素-2 (hBD-2) 的情况,检测其表达,观察hBD-2的体外抗菌活性.方法 分为3组,即健康对照组(n=10)、BV组(n=10)和阴道乳杆菌干预组(n=8).采用RT-PCR半定量法,检测阴道组织hBD-2 mRNA的水平.用琼脂糖弥散法检测其抗菌活性.结果 与健康对照组相比,BV组、阴道乳杆菌干预组hBD-2 mRNA的水平明显升高(P<0.05);阴道乳杆菌干预组hBD-2 mRNA的水平较BV组增高(P<0.05);琼脂糖弥散法显示,hBD-2对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌有明显的杀灭效应.结论 阴道乳杆菌干预对BV患者治疗可以使hBD-2 mRNA表达水平上调,提示其在维系正常妇女生殖道内环境稳定、宿主天然抗感染机制中起着重要的作用.     

TLR4在气道上皮细胞诱导的哮喘气道平滑肌细胞迁移中的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)的激活在气道上皮细胞诱导的哮喘气道平滑肌细胞(ASMCs)迁移中的作用。方法:细胞消化法培养原代哮喘ASMCs,TNF-α刺激上皮细胞系RTE细胞收集细胞培养上清液,检测上清液中IL-8和RANTES的含量,改良Boyden趋化小室检测哮喘ASMCs的跨膜迁移,以TLR4抗体作为工具药,观察其在上皮细胞诱导的哮喘ASMCs跨膜迁移中的作用。结果:各TNF-α组培养上清液中IL-8和RANTES水平均显著增高,20 ng/ml组较其他组显著增高(P<0.01)。各组哮喘ASMCs跨膜迁移较正常组均增加(P<0.01);哮喘组和TNF-α+TLR4抗体组哮喘ASMCs跨膜迁移数较TNF-α组显著减少(P<0.01)。TLR4抗体组哮喘ASMCs跨膜迁移数较哮喘组增加(P<0.05)。结论:气道上皮细胞可能通过分泌细胞因子激活哮喘ASMCs表面的TLR4,诱导增强ASMCs的跨膜迁移,在哮喘的气道重构中发挥一定的作用。     

黄体酮对3T3-L1脂肪前体细胞成脂分化后细胞中UCP2基因表达的影响

目的:观察体外培养条件下3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化成的成熟脂肪细胞中解偶联蛋白2(UCP2)mRNA表达水平及黄体酮对其表达的影响。方法:体外培养3T3-L1脂肪细胞,在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟后,经不同黄体酮浓度10μm/25μM/50μM/75μM/100μM刺激后,抽提总RNA,用RT-PCR检测UCP2 mRNA的表达。结果:黄体酮会促进成熟脂肪细胞中UCP2 mRNA的表达,(P<0.05)其中25μM浓度刺激下UCP2 mRNA表达量最高。结论:体外培养中,黄体酮对成熟脂肪细胞中UCP2 mRNA的表达与调控具有一定的影响。     

高氧抑制LPS/ATP诱导的骨髓源性巨噬细胞的焦亡

目的:研究不同浓度的氧气在LPS/ATP诱导的骨髓源性巨噬细胞焦亡中的作用。方法:提取C57BL/6小鼠的骨髓源性巨噬细胞,用1μg/ml脂多糖(LPS)刺激细胞24 h,用5 mM三磷酸腺苷(ATP)刺激细胞4 h,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β水平的变化。用5 mM ATP刺激细胞后,给予细胞40%、60%和100%的氧气处理1.5 h,ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β水平的变化。结果:1μg/mL LPS和5 mM ATP先后刺激下,骨髓源性巨噬细胞培养上清液中IL-1β的水平明显升高(P0.001),用caspase-1特异性抑制剂AC-YVAD-CMK刺激骨髓源性巨噬细胞后IL-1β水平明显降低(P0.001)。5 mM ATP刺激之后给予细胞不同浓度的氧气干预1.5 h后,细胞培养上清液中IL-1β的水平明显下降。结论:高氧抑制LPS/ATP诱导的骨髓源性巨噬细胞的焦亡。     

LO-2细胞上清诱导人脐血干细胞向类肝细胞分化

目的：探讨体外培养人脐血单个核细胞向类肝细胞的分化。方法：收集Lo-2细胞培养上清液加入培养基培养分离出的脐血单个核细胞,连续lOd检测甲胎蛋白（AFP）的表达情况,细胞传代后无诱导剂（LO-2细胞培养上清液）情况下检测白蛋白（ALB）表达情况。结果：培养6d后心P出现阳性结果,细胞传代后在无诱导剂的情况下AI卫检测阳性。结论：在L0-2细胞上清的诱导下,脐血单个核细胞能够分化为类肝细胞。     

IL-37对粉尘螨诱导气道上皮及固有免疫细胞产生IL-6的作用研究

目的探讨气道上皮细胞及固有免疫细胞经粉尘螨刺激后,白细胞介素37(interleukin 37,IL-37)对其产生细胞因子IL-6的影响。方法体外培养人肺泡上皮细胞系A549、小鼠肺上皮细胞系MLE-12、小鼠巨噬细胞系RAW264.7和原代小鼠固有淋巴样2型细胞(ILC2细胞),当细胞融合度达70%时,用IL-37预处理2 h,再给予粉尘螨粗提物刺激细胞,每种细胞均设PBS、IL-37及粉尘螨对照,并分别于不同时间点收集细胞沉淀和细胞培养液上清;用实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)法检测细胞因子IL-6在mRNA水平上的变化,用双抗体夹心ELISA检测细胞因子IL-6在蛋白水平的变化,用流式细胞术分选ILC2细胞并检测ILC2细胞表面IL-37受体的表达情况。结果粉尘螨粗提物可促进A549细胞、MLE-12细胞、RAW264.7细胞和ILC2细胞表达I L-6,且呈时间依赖的方式(P0.05)。IL-37可抑制粉尘螨粗提物所诱导的IL-6在A549细胞、MLE-12细胞和RAW264.7细胞表达(P0.05);但IL-37对粉尘螨粗提物刺激ILC2细胞分泌IL-6无明显抑制作用(P0.05)。结论IL-37可抑制粉尘螨诱导的气道上皮细胞和巨噬细胞产生IL-6,并可通过负向调控下调气道炎症反应,为IL-37在哮喘治疗中的潜在应用提供了实验依据。     

Ghrelin抑制H2O2诱导的肺泡上皮A549细胞中IL-8的产生

目的:通过细胞培养的方法,初步研究了生长激素释放肽Ghrelin在氧化应激相关的肺泡上皮细胞炎症反应中的作用.方法:首先是用双氧水(H2O2)刺激A549细胞建立肺泡上皮细胞炎症反应模型,分别加入不同浓度的Ghrelin及普通培养基培养A549细胞,用酶联免疫吸附技术(ELISA)从蛋白水平检测上清液中IL-8的含量,采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测炎性细胞因子IL-8mRNA的表达.结果:H2O2可以使A549细胞IL-8蛋白的释放及IL-8mRNA的表达明显升高(P＜0.05),而用Ghrelin干预后IL-8的释放及IL-8mRNA的表达被抑制,明显低于单纯H2O2刺激的模型组(P＜0.05),且随着浓度的增加Ghrelin的这种抑制作用逐渐增强.结论:分别从蛋白水平和基因水平证明了Ghrelin能够抑制H2O2诱导的肺泡上皮A549细胞中IL-8的产生,由此推测Ghrelin可能能够抑制以COPD、支气管哮喘为代表的氧化应激相关的肺部炎症反应.     

多表位肽抗原诱导特异性CTL抗慢性髓性白血病细胞的体外实验研究

目的：在应用基因工程技术人工表达获得多表位BCR-ABL融合蛋白的基础上,对该融合抗原在体外诱导对自血病细胞的特异性杀伤效应进行检测,探索慢性髓性自血病（CML）免疫治疗的新途径。方法：从外周血单个核细胞培养树突细胞（DC）,以BCR-ABL融合抗原脉冲刺激DC,诱导特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）产生;MTT法检测CTL对白血病靶细胞的特异性杀伤活性。结果：以BCR-ABL融合抗原刺激产生的CTL能特异性抑制b3a2＋的靶细胞生长,包括K562细胞（P〈0．01）和HIJA-A2＋／b3a2＋的CML原代细胞（P〈0．05）,而对HIA-A2-或b2a2＋靶细胞无明显抑制作用。结论：设计表达的多表位BCR-ABL融合抗原能在体外诱导特异性抗CML免疫反应,抑制b3a2＋自血病细胞生长,有望为进一步的体内实验奠定基础。     

Dlx1/2在经Kcl刺激脑皮质神经细胞中的表达研究

目的:观察Dlx1/2在经Kcl刺激大鼠E 17脑皮质神经细胞中的表达,揭示该对基因在核酸与蛋白水平的表达特点及其在大脑接受刺激后反应早期功能活动中的初步作用.方法:原代细胞培养获取SD大鼠E17脑皮质神经细胞;qRT-PCR分析2个基因的核酸在Kcl刺激0～24h中的表达变化情况;Western blot分析2个基因的蛋白在Kcl刺激0～24h中的表达变化情况.结果:原代细胞培养显示细胞状态良好.qRT-PCR显示Dlx1/2在经Kcl刺激细胞的24h内mRNA表达趋势均为先上升后下降,其中6h是高峰,24h出现下降.Western blot显示经Kcl刺激后,Dlx1的表达增高只出现在12 h内,24h出现明显下降;而Dlx2表达随时间延长而明显增高,24h稍有下降.结论:Dlx1/2的表达与Kcl刺激时间的长短有关,Dlx2表达整体高于Dlx1.Dlx1/2.表达升高对胚胎期脑皮质神经细胞早期反应中的活动功能具有重要作用,其中Dlx2的作用可能相对更大.     

脂质体介导人β防御素2基因转染膀胱上皮的实验研究

目的 探讨脂质体介导人β防御-2（humaβ-defensin2,hBD2）基因体内、外转染膀胱上皮细胞的可行性。方法采用脂质体法体外转染人膀胱上皮细胞株T24及膀胱灌注大鼠体内转染,ELISA检测细胞上清及大鼠尿液中hBD：的表达;RT—PCR及Western印迹检测细胞及大鼠膀胱中hBD：的表达;组织免疫荧光检测hBD,在膀胱黏膜的表达。结果RT—PCR及Western印迹检测显示,脂质体介导pCAGG—hBD2体、内外转染膀胱上皮细胞后均可表达重组hBD2;转染细胞上清及大鼠尿液中hBD2浓度分别为（36．5±3．2）ng／10。细胞和（4．77±1．4）ng／ml;转基因hBD2主要表达于膀胱黏膜上皮层。结论脂质体介导hBD2基因体内、外转染膀胱上皮细胞后均能获得高效表达,为泌尿系感染的防御素基因治疗提供了实验依据。