新生猪缺氧后心肌连接蛋白Cx43表达的变化

目的探讨新生猪缺氧后心肌连接蛋白Cx43 mRNA和蛋白含量的变化。方法对照组(C组):新生猪6头,未吸入低氧;缺氧组(H组):新生猪6头,吸入低氧(FiO2=0.1)维持1 h。于缺氧结束后5 h,免疫荧光染色检测心肌组织细胞缝隙连接蛋白Cx43蛋白的表达,实时荧光定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测心肌组织Cx43 mRNA的表达。结果H组心肌组织Cx43蛋白的表达显著低于C组(P<0.01),但两组心肌组织Cx43 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论缺氧可导致心肌Cx43蛋白的表达或分布发生变化。     

正加速度重复暴露后大鼠心室肌缝隙连接蛋白43表达及分布的改变

本文旨在探讨不同水平的一周重复多次正加速度( Gz)暴露后大鼠心室肌缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)表达及分布的改变.36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、 6Gz组和 10Gz组,每组12只. Gz组大鼠分别暴露于 6Gz和 10Gz各3min,1次/d,共1周,分别于末次暴露后即刻、1d、3d、7d(各3只)取心室肌作免疫组织化学染色和Western blot分析,检测Cx43的表达和分布.免疫组织化学结果显示, Gz重复暴露可引起大鼠心室肌Cx43分布方式明显紊乱,Cx43在心肌细胞侧-侧连接处的表达明显增加,在心肌细胞端-端连接处的表达减少.Western Blot结果显示, 6Gz组与 10Gz组的Cx43蛋白表达量于末次暴露后即刻、1d、3d、7d与对照组相应时刻相比均明显减少(P<0.001),以暴露后即刻减少最为明显,且随着 Gz暴露时间的延长,表达逐渐恢复,但在暴露后7d,两组的Cx43表达量仍未恢复至对照组水平.Cx43蛋白表达的上述改变在 10Gz组比 6Gz组更为显著.以上结果提示 Gz重复暴露可引起大鼠心室肌Cx43表达量的一过性减少,分布方式明显紊乱,这种改变很可能是 Gz致心律失常发生的重要原因之一.     

初生与成年牦牛心肌的组织学结构比较

为探究牦牛心肌发育过程中组织学结构的变化,采用组织学、组织化学和免疫组织化学方法对初生和成年牦牛心肌的组织学结构、心钠素（ANP）和缝隙连接蛋白43（Cx43）的表达情况进行了观察。结果显示,初生牦牛心肌细胞数量少且细短,闰盘为直线型或V型,心肌细胞间以Ⅲ型胶原纤维为主,Ⅰ型胶原纤维较少;成年牦牛心肌细胞粗长,其数量是初生牦牛的2倍,闰盘呈竹节样吻合或阶梯状,心肌细胞间以Ⅰ型胶原纤维为主。初生和成年牦牛,ANP在心房肌细胞中均表达强烈,且右心房表达量显著高于左心房,心室肌细胞中不表达。ANP在普肯耶纤维中有少量表达。初生牦牛心房肌细胞ANP表达量高于成年牦牛。在心肌细胞膜和胞质内,初生牦牛Cx43表达强于成年牦牛,但在闰盘内,成年牦牛Cx43表达强于初生牦牛。Cx43在初生和成年牦牛的普肯耶纤维中均呈膜阳性。结果提示,初生与成年牦牛相比,成年牦牛的心肌细胞变粗长且数量增多,ANP在心房肌表达减弱,Cx43在闰盘表达更显著,说明成年牦牛较初生牦牛适应循环变化的代偿能力呈进行性减弱;细胞间牢固性增加,有助于实现心肌收缩信号的迅速传导。     

大鼠出生后发育期心肌闰盘装配的动态过程

心肌细胞闰盘由黏着连接、桥粒与缝隙连接三种结构组成,它们的跨膜蛋白分别是N-cadherin(N-cad)、desmoglein-2(DSG2)与connexin 43(Cx43)。本文旨在研究大鼠心肌在出生后的发育过程中,这三种蛋白之间两两共定位的特征。用组织免疫荧光染色法观测出生后1天(P1,postnatal day 1)、P7、P14、P28、P90大鼠左室心肌N-cad、DSG2与Cx43的分布与两两之间共定位的动态变化。结果显示,出生1 d心肌细胞,N-cad、DSG2与Cx43在细胞膜呈弥散分布;出生7 d组N-cad与DSG2在心肌细胞长轴两端集聚,Cx43亦有少量集聚,标示闰盘形成。从14 d到90 d,三种蛋白在闰盘处集聚逐步增多;而在侧面的分布表现出一种相反的趋势:N-cad与DSG2在细胞侧面的分布大幅减少,Cx43虽在细胞侧面的分布降低,但至90 d仍有Cx43分布于细胞侧面。采用体视学方法进行定量分析表明,在出生第1天,N-cad与DSG2总的共定位为33.5%;第7天总共定位升高为38.6%,其中闰盘处共定位占9.4%,细胞侧面共定位为29.2%。从14 d到90 d,随着N-cad与DSG2总共定位增加至65.7%,在闰盘处的共定位亦增加到60.5%,在细胞侧面的共定位却降低至5.2%。N-cad与Cx43的总共定位从1 d的10.3%,逐步增加到90 d的37.1%;在闰盘处的共定位逐步增加,而细胞侧面的共定位保持在5%左右。DSG2与Cx43共定位特征及百分比类似于N-cad与Cx43共定位。N-cad与DSG2共定位百分比明显高于N-cad与Cx43或DSG2与Cx43的共定位。上述结果提示,大鼠心肌在出生后的发育过程中,构成细胞力学连接的N-cad与DSG2先于构成细胞电化学连接的Cx43在闰盘处集聚,即心肌细胞生长首先需形成稳定的力学环境。     

心肌肥厚大鼠心肌Cx43的表达及法舒地尔的干预作用

目的：研究腹主动脉缩窄大鼠心肌缝隙连接蛋白Cx43的变化及法舒地尔的干预作用。方法：腹主动脉缩窄建立心肌肥厚大鼠模型,随机分假手术组,腹主动脉缩窄组、腹主动脉缩窄＋10mg／kg法舒地尔（ip,每天1次,8周）组、腹主动脉缩窄＋40mg／kg（ip,每天1次,8周）。病理切片观察心肌组织学变化;免疫组化法检测心肌Cx43蛋白表达。结果：模型组大鼠心肌细胞排列紊乱,肥大,间隙增宽,Cx43蛋白表达量明显低于正常组;Fas治疗后,死亡率下降,cx43蛋白表达量高于模型组,差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论：Fas可能通过调高Cx43蛋白表达,治疗大鼠心肌肥厚。     

异氟烷预处理对电磁脉冲辐射所致脑损伤的保护作用研究

目的:探讨异氟烷预处理对电磁脉冲辐射所致脑损伤的保护作用。方法:选取成年雄性SD大鼠48只,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12),分别为:假辐照组(CON组)、电磁辐照组(EMP组)、异氟烷预处理组(IP组)和异氟烷预处理+电磁辐照组(IP+EMP组)。EMP组场强为400 KV/m,脉冲为200次,连续辐照3天;IP组吸入2.0%异氟醚2h;IP+EMP组吸入2.0%异氟醚2 h,24 h后制备EMP损伤模型。于辐照后24 h处死大鼠,每组随机抽取3只大鼠,取脑组织,采用ELISA法检测大鼠海马IL-6和TNF-α的表达变化;尼氏染色法观察大鼠海马区神经元的凋亡;采用Western blot法检测大鼠海马区BDNF蛋白的表达情况;采用免疫荧光法检测大鼠海马区BDNF细胞水平的表达。结果:与CON组比较,EMP组、IP组、IP+EMP组的IL-6和TNF-α的表达增高,尼氏小体减少,BDNF蛋白及细胞水平的表达均下调(P0.05);与EMP组比较,IP组和IP+EMP组IL-6和TNF-α的表达降低,尼氏小体增多,BDNF蛋白及细胞水平的表达上调(P0.05)。结论:异氟烷预处理可减轻电磁脉冲辐射所致脑损伤,其机制可能与减轻大鼠炎症反应有关。     

贯叶连翘提取物对扩张型心肌病大鼠缝隙连接蛋白Cx43的影响

目的:研究贯叶连翘提取物(HPE)对扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌缝隙连接蛋白Cx43表达的作用。方法:以腹腔注射阿霉素建立DCM大鼠模型为基础,分析心肌缝隙连接蛋白(Cx43)表达差异性。结果:治疗组大鼠Cx43蛋白以及Cx43mRNA显著高于模型组。结论:HPE可能通过对Cx43受体敏感性的调节而改变Cx43表达,改善DCM大鼠心功能。     

不同类型幽门螺杆菌对GES-1细胞Cx32、Cx43表达的影响

目的观察不同类型幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）对人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞间隙连接蛋白（Connexin,Cx）32和43表达的影响,探讨与Cx32、Cx43表达异常有关的H.pylori菌株类型。方法将临床培养分离的不同H.pylori菌株类型包括东亚型CagA＋H.pylori、西方型CagA＋H.pylori及CagA-H.pylori与GES-1细胞共培养24 h及48 h,对照组不加H.pylori培养24 h及48 h。采用间接免疫荧光方法（IIF）及计算机图像分析技术检测GES-1细胞Cx32、Cx43表达。结果对照组24 h和48 h及加H.pylori各组24 h GES-1细胞Cx32、Cx43表达阳性率均为100%,东亚型CagA＋H.pylori组48 h Cx32、Cx43表达阳性率均低于对照组、CagA-H.pylori组和西方型CagA＋H.pylori组（P〈0.05）;对照组24 h和48 h Cx32、Cx43绿色荧光位于细胞膜,西方型CagA＋H.pylori组和东亚型CagA＋H.pylori组24 h和48 h Cx32绿色荧光大部分位于细胞膜,少部分位于细胞浆,Cx43绿色荧光大部分位于细胞浆,少部分位于细胞膜;东亚型CagA＋H.pylori组和西方型CagA＋H.pylori组24 h及48 hCx32、Cx43表达强度低于对照组和CagA-H.pylori组（P〈0.05）,且东亚型CagA＋H.pylori组较西方型CagA＋H.py-lori组减弱更明显（P〈0.05）。结论 H.pylori下调GES-1细胞Cx32、Cx43表达,以CagA＋H.pylori菌株特别是东亚型CagA＋H.pylori菌株作用更明显。     

U50,488H对缺血期间心肌电耦联的影响及其机制研究

目的:研究κ-阿片受体特异性激动剂U50,488H对心肌缺血后电耦联特性的影响,并探讨其作用的可能机制。方法:采用雄性SD大鼠心脏Langendorff离体灌流模型和四电极法,观察U50,488H对全心停灌缺血期间心肌整体阻抗和电脱耦联参数(电脱耦联时间、平台时间、电脱耦联最大速率和阻抗倍数)的影响。采用免疫组化染色法检测U50,488H对左心室心肌细胞缝隙连接结构蛋白Cx43的影响,并同时观察U50,488H特异阻断剂nor-BNI(5×10-6mol/L)和PKC抑制剂chelerythrine(3×10-6mol/L)预处理对U50,488H作用的影响。结果:U50,488H可浓度依赖地延迟电脱耦联时间和平台时间,降低电脱耦联最大速率;nor-BNI或chelerythrine预处理均可明显减弱U50,488H对心肌缺血后电耦联特性的作用;与空白对照组比较,单纯缺血组心肌闰盘处Cx43蛋白显著减少,U50,488H处理可明显增加缺血心肌闰盘处Cx43蛋白含量;nor-BNI和chelerythrine预处理均可明显减弱U50,488H对心肌Cx43蛋白表达的作用。结论:κ-阿片受体激动剂U50,488H明显延迟缺血诱导的心肌电脱耦联,其作用涉及κ-阿片受体-PKC途径,其作用靶点可能为心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43。     

1840 MHz射频辐射对大鼠血脑屏障通透性的影响

目的:探讨环境射频辐射暴露对雄性SD大鼠血脑屏障通透性的影响。方法:36只成年雄性SD大鼠随机分为暴露组和假暴露组,对暴露组大鼠进行频率为1840 MHz、比吸收率(SAR值)为2 W/kg、每日1 h、连续7 d的全身辐照。硝酸镧示踪透射电镜法和白蛋白免疫组化法观察暴露后大鼠脑皮质血脑屏障超微结构和通透性,免疫印迹法检测血脑屏障紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平。结果:透射电镜结果显示,假暴露组镧颗粒仅出现在大鼠脑微血管管腔内;而在暴露组,除微血管管腔外,在局部脑皮质微血管内皮基底膜处和周围脑实质间亦可见镧颗粒沉积。免疫组化染色显示,假暴露组大鼠脑皮质微血管周围未见白蛋白渗出,而暴露组大鼠脑皮质微血管周围有明显白蛋白沉积。上述结果提示,射频辐射暴露可能增加血脑屏障通透性。免疫印迹结果显示,与假暴露组相比,暴露组大鼠脑皮质ZO-1蛋白表达水平明显降低(P0.001),差异具有统计学意义。结论:1840 MHz射频辐射可诱导血脑屏障发生一定程度地开放,紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平的改变可能参与该过程。