杂交瘤细胞磁性颗粒筛选方法的建立及探讨

本文报道一种新的杂交瘤细胞分离法——磁性颗粒筛选法,探讨了磁性颗粒的蛋白偶联量,磁性颗粒与细胞的作用比例、体积和时间对细胞分离效果的影响。对磁性颗粒对杂交瘤细胞的影响所作的初步研究表明,游离抗原或抗原包被的磁性颗粒对细胞的生长与成活有抑制作用,但磁性颗粒筛选到的杂交瘤细胞具有显著高于普通杂交瘤细胞的抗体分泌能力。     

基于微量筛选模型的48种中草药提取物乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选及评价

采用微量筛选模型考察48种中药提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性。采用不同极性溶剂对中药材进行提取,采用微量筛选模型对不同浓度提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行考察,并采用Origin8.0计算其IC50值。结果表明,几种中药材的不同极性溶剂(水、80%乙醇、乙酸乙酯、石油醚)提取物有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性。其中黄柏、元胡的80%乙醇提取物,丹参的乙酸乙酯提取物的抑制率较高。当上述提取物在实验体系中的终浓度为76.92 mg/L时,抑制率分别为66.72±0.02%、52.67±0.04%、46.84±0.03%,其IC50值分别为295.12、229.09、1202.26 mg/L。本研究结果为从中草药中快速筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂提供了方法和数据支持。     

乙肝病毒核心抗原作为载体用于病毒样颗粒疫苗研究的主要进展

乙肝病毒核心抗原(Hepatitis B virus core antigen,HBcAg)是乙肝病毒的核壳结构蛋白,由183～185个氨基酸组成,大小约21～23kD。HBcAg由于其能自我组装成病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)、高表达、易纯化以及强免疫原性等特点,使其成为一个高效安全且应用广泛的VLP载体,可用于各种病原的疫苗研发。发展至今已有数十种病毒、细菌以及寄生虫的相关基因的抗原表位成功表达在HBcAg VLP颗粒上,成为新型疫苗研发的重要平台。     

乙肝病毒核心蛋白及核心颗粒的结构及功能研究进展

乙型肝炎是由嗜肝DNA病毒(Hepatitis B virus,HBV)引起的一种世界范围内的传染性疾病。受HBV慢性感染的人群罹患肝硬化和原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的相对危险性至少增加100倍,并最终导致死亡,给人们的健康造成极大的威胁和损害。鉴于此,世界上许多生物医学家早已把他们的研究目标集中到了乙肝病毒,     

乙肝病毒核心蛋白病毒样颗粒表面抗原密度对抗体应答水平的影响

【目的】为了探究乙肝病毒核心蛋白(HepatitisBviruscoreprotein,HBc)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)表面抗原密度对免疫后抗体应答水平的影响,制备了不同抗原密度的HBc VLPs疫苗,并检测了其在小鼠体内的抗体应答水平。【方法】首先制备了N端带有3个甘氨酸的人巨细胞病毒重组抗原域AD-4作为模式抗原,接着通过Sortase A的介导将AD-4连接到HBc VLPs表面上。将系列浓度梯度AD-4抗原在SortaseA介导下分别与相同浓度的HBcVLPs发生反应,制备不同抗原密度的HBc-AD-4 VLPs。将其分别免疫6–8周龄BALB/c小鼠3次,每次免疫间隔2 w,间接ELISA法检测被免疫小鼠血清的抗体应答水平。【结果】结果表明,当HBc VLPs表面抗原密度为44.4%时,即HBc反应浓度∶AD-4反应浓度为1:0.5时,不足以引起高滴度的抗体产生;当HBc VLPs表面抗原密度为64.2%时,即HBc反应浓度∶AD-4反应浓度为1:1时,HBc-AD-4 VLPs诱导的AD-4特异性抗体滴度与100%抗原密度的HBc-AD-4VLPs所引起的抗体滴度相当;当HBcVLPs表面抗原密度大于64.2%时,引起的抗体应答水平不因抗原密度增加而进一步增强。【结论】发现了HBcVLPs表面抗原密度与免疫后抗体滴度呈正相关,然而免疫64.2%抗原密度的HBc VLPs所产生的抗体滴度可达峰值,抗原密度进一步增加,抗体应答水平不会进一步加强。     

乙肝病毒核心蛋白病毒样颗粒作为载体在表位疫苗中的应用

乙型肝炎病毒核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV) C基因编码的病毒蛋白,是HBV的衣壳蛋白,主要存在于HBV核衣壳表面。乙肝病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)来源于HBcAg,由183或185个氨基酸组成。由于HBc本身具有高度的免疫原性,并且可携带自身或外源病原体的抗原/表位在体外自组装成病毒样颗粒,20世纪80年代开始HBc就被用于疫苗载体的研究。现对HBc近年来作为载体在表位疫苗中的应用作一概述。     

乙肝病毒核心蛋白及核心颗粒的结构及功能研究进展

乙型肝炎是由嗜肝DNA病毒(Hepatitis B virus,HBV)引起的一种世界范围内的传染性疾病.受HBV慢性感染的人群罹患肝硬化和原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的相对危险性至少增加100倍,并最终导致死亡,给人们的健康造成极大的威胁和损害.鉴于此,世界上许多生物医学家早已把他们的研究目标集中到了乙肝病毒,以期弄清楚该病毒的基本结构,致病机理、免疫原性、免疫逃避和生化分子遗传规律等方面的问题.而近来在这些研究中,对乙肝核心抗原(HBcAg)结构、功能及免疫逃避机制的研究又成了引人注目的焦点.本文综合了近年来国内外对乙肝核心抗原(HBcAg)及其核衣壳和核心抗原缺失突变体的研究资料,从以下几个方面对该领域的研究作了较为深入的分析和概述.     

表达乙肝病毒受体人ASGPR转基因小鼠的建立

目的：建立表达乙肝病毒受体人ASGPR的转基因小鼠。方法：克隆人的脱唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）两个亚基的cDNA,连入PCAGGS构建转基因表达载体,以显微共注射的方法将两种各3.9kb的转基因片段引入小鼠的受精卵。采用PCR、Southern印迹、RT-PCR、Western印迹的方法对转基因小鼠进行鉴定。结果与结论：获得了在小鼠肝脏组织中共表达有乙肝病毒（HBV）受体ASGPR H1和ASGPR H2的一个转基因小鼠系,可为HBV的研究提供一种良好的感染动物模型。     

小鼠烫伤模型及其在中草药抗菌作用研究中的初步运用

小白鼠经烫伤后在烫伤部位皮下立即接种极小量绿脓杆菌可以导致动物有规律地死亡。烫伤面积约为小鼠体表面积的6%,接种量1—2×10~4CFU。用胃膜素制成细菌悬液,接种量可以减少至40—50 CFU。庆大霉素及氯霉素能有效地保护动物。多粘菌素及所试的十多种中草药及其粗提物均未能显示保护作用。     

颗粒污泥的产甲烷细菌及结构模型初探

本文报道了颗粒污泥中不同形态的产甲烷细菌及其分布特征。电镜观察表明,颗粒表层主要是氢营养型产甲烷菌,如产甲烷短杆菌、产甲烷螺菌等。细菌的分布具有一定的“区位化”。颗粒内层则主要是乙酸营养型产甲烷菌,其中产甲烷丝菌是优势种群,并且与产氢产乙酸细菌之间存在互营共生关系。根据对产甲烷细菌的观察研究结果,作者提出了一个颗粒污泥的初步结构模型,同时对此进行了分析讨论。     

抗乙肝病毒药物研究的进展

对近年来抗乙肝病毒的化学成分 ,药理机制 ,活性评估及临床应用情况进行了综述。着重介绍了植物中抗乙肝病毒活性成分的研究现状并展望了其开发研究的前景。     

乙肝病毒YMDD基序变异的分子生物学检测方法

拉米夫定治疗乙肝6个月以上就会产生耐药性,这与HBV YMDD基序变异有关.目前检测YMDD变异的检测技术主要有直接测序法、限制性片断多态性分析（RFLP）、5＇-核酸酶检测法、基因芯片法、实时定量PCR、焦磷酸测序（pyrosequencing）技术、高效变性液相色谱法（DHPLC）等.这些方法各有利弊,并且有些弊端暂时还没有较好的解决方法.     

以串联式乙肝病毒核心颗粒呈递的基于多重保守抗原的甲型流感病毒病毒样粒子候选疫苗

现有的甲型流感病毒(IAV)疫苗是靶向病毒的不同部分,不同季节可能是不一样的。疫苗的设计依赖于预测的优势流感毒株,而当疫苗和流行毒株之间不匹配时功效欠佳。此外,目前方法制得的疫苗对有可能引起大流行病的新兴流感毒株只提供有限的保护。有一种解决方案是设计靶向流感病毒保守的蛋白结构区域的疫苗,这些结构域随着时间的推移基本保持不变,并可能存于在新兴变体中。     

单链抗体抑制乙肝病毒的研究

单链抗体已用于抗乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)的研究,目前已研制出作用于各种靶点,如HBV表面抗原pre-S1、核心蛋白(hepatitis B virus core antigen, HBc)、DNA聚合酶及X 蛋白的多种单链抗体。单链抗体对偶联的分子具有靶向定位作用,因此,对抗原的亲和性大小、对靶细胞内化(Internalization)的强弱及其自身结构的稳定性是影响单链抗体应用的主要因素。     

丙肝病毒核心蛋白与乙肝病毒核心抗原的融合表达及其性质研究

构建了丙肝病毒核心蛋白 ( 1～ 191)及其N端 ( 1～ 69)和 ( 1～ 40 )与乙肝病毒核心抗原 ( 1～ 14 4 )羧端的融合克隆 ,在大肠杆菌中进行了表达 .其表达产物B14 4C191,B14 4C69和B14 4C40同时具有乙肝核心抗原 (HBc)和丙肝核心蛋白 (HCc)的双重抗原性和免疫原性 .CsCl密度梯度超离心和电镜观察表明 ,融合蛋白能组装成颗粒 .比较等量的融合蛋白的抗原性和免疫原性后发现 ,融合的HCc长度对HBc的抗原性和免疫原性影响不大 .而B14 4C69和B14 4C40比B14 4C191免疫小鼠能产生更高的抗HCc抗体 .利用表达的融合蛋白建立了ELISA法 ,对人血清中抗HBc抗体和抗HCc抗体进行了检测 .     

中药大黄的综合研究XXXI．大黄蒽醌衍生物系统分离的改进方法

西宁大黄小碎片加到20％硫酸溶液和氯仿的混合液中,在水浴中回流以水解,提取,氯仿提取液相继以5％碳酸氢钾溶液,5％氢氧化钾溶液振荡提取,提取液分别以盐酸酸化,即分离得大黄酸,大黄素,芦荟大黄素及大黄酚和大黄素甲醚混合物等黄色沉淀物,后者再以硅胶柱层析分离,可得大黄酚和大黄素甲醚单体,上述五种蒽醌衍生物再经结晶即得纯品。     

醛糖还原酶抑制剂细胞筛选模型的建立

目的：将糖尿病慢性并发症相关基因醛糖还原酶 (aldose reductase, AR) 基因与腺相关病毒(adeno associated virus, AAV) 表达载体pSNAV2.0重组,使其在HEK293细胞中表达,以基因工程表达的AR为靶向,建立醛糖还原酶抑制剂 (aldose reductase inhibitor, ARI) 细胞筛选模型。方法：首先采用酶切、连接等方法构建含有人AR基因序列的AAV表达载体pSNAV-hAR,将重组质粒转染HEK293细胞,通过活性测定、Western blot和免疫荧光检测目的基因转染及表达的情况。结果：PCR、酶切、DNA测序均证实表达质粒pSNAV-hAR构建正确。转染HEK293细胞后,一系列分析结果显示,腺相关病毒表达载体介导的AR真核细胞表达产物是具有功能活性的目的蛋白。应用经典醛糖还原酶抑制剂 Sobinil 和 Zopolrestat 对此模型进行了验证。结论：AR高表达细胞模型的建立,为进一步筛选ARI、探讨多元醇通路学说在糖尿病慢性并发症发病机制中的作用奠定了基础。针对先后建立的酵母细胞与真核细胞模型的特点及三种AR活性测定方法中的注意事项进行了讨论。     

新型抗结核分枝杆菌药物筛选模型的建立

为建立基于酶水平和细胞水平的新型抗结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）药物的筛选模型,以M.tuberculosis H37Rv基因组DNA为模板,PCR特异性扩增异柠檬酸裂解酶（ICL）基因,构建表达载体,在E.coli BL21（DE3）中高效表达,使用N i2＋亲和层析柱纯化重组ICL,检测其活性。优化ICL酶反应条件,考察待筛选样品溶剂对酶活性的影响,建立ICL抑制剂酶水平筛选模型;考察与优化耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegma）在以乙酸盐为唯一碳源的培养基中的生长状况,建立基于M.sm egma的乙醛酸代谢途径抑制剂的细胞水平筛选模型;利用上述2种筛选模型对1 060种可能具有拮抗活性的微生物代谢样品进行初筛和复筛,两者筛选结果正相关性较好。     

武汉地区儿童乙肝病毒基因亚型感染的调查研究

１０４名武汉地区儿童乙肝病毒基因亚型感染调查结果显示：男性亚型Ⅰ感染率高于女性,而女性亚型Ⅱ感染明显高于男性。血清学标志物,俗称两对半,为大三阳时,病毒亚型Ⅰ感染远高于亚型Ⅱ（ｐ＜０．０１）。而小三阳中亚型Ⅱ感染率远高于亚型Ⅰ（ｐ＜０．０５）。说明乙肝病毒亚型易感性可能存在性别差异,不同ＨＢＶ亚型感染与特定血清学模式形成有关。不同乙肝基因亚型的Ｓ基因,Ｃ基因、Ｐ基因、Ｘ基因等碱基序列差异和其相互作用,可能是形成血清两对半模式多样性的物质基础。