油菜离体培养与芥酸微量测试相结合的育种新技术Ⅰ.芥酸测定新方法及其在不同组织中的分布

以Folch法为基础,汲Bligh和常规二法所长,建立了植物鲜组织类脂提取新方法,并用新方法同Bligh及常规法进行了相对含量与绝对含量比较。结果表明,新方法在重复性及准确度方面都较后二者好。利用新方法,测定了4种组织和器官,发现只有种子和花粉胚状体含有较高含量的芥酸。萌发5天的子叶中,芥酸含量较低。愈伤组织中没有芥酸。表明芥酸的形成与胚结构的形态分化相一致。此外有可能进行低或零芥酸胚状体的筛选。通过对发育中的花粉胚状体芥酸含量变化的研究,发现自花药接种日期算起,通常需要35—40天后,花粉胚状体中的芥酸含量达最高值并保持稳定。这是为低或零芥酸单倍体育种对胚状体进行筛选的适宜时期。     

芥菜(Brassica juncea)花粉胚状体与离体种胚脂肪酸的变化

在油菜改良品质育种中,利用单个花粉胚状体筛选低或无芥酸株系,需要了解花粉胚状体在发育过程中芥酸含量的变化及与其他脂肪酸变化的关系。Gurr(1972),Dasgupta等(1973)和黄尚琼(1980)研究了不同种、不同品种种子发育过程中脂肪酸组成的变化,但均未曾对离体花粉胚状体和离体种胚进行研究。本文在于探索离     

白菜型油菜,芥菜型油菜与诸葛菜的属间杂交合子胚的组织培养

TissueCultureofZygoticEmbryosofIntergenericHybridizationAmongBrassicacampestris,B．junceaandOrychophragmusviolaceusWUYan－You,JIANGJiu－Yu（InstituteofGeochemstry,TheAcademyofScience,Guiyang550002）1植物名称白菜型油菜（Brassicacampestris）品种川油8号（2n=20）、芥菜型油菜（B.juncea）品种沪州四棱（2n=36）和诸葛菜（Orychophragmusviolaceus,2n=24）。2材料类别白菜型油菜和芥菜型油菜作母本,诸葛菜作父本,人工授粉22d“萝卜”角果中的未成熟杂种胚。3培养条件分化培养基为MS＋6-BA2mg／L（单…     

甘蓝型油菜花粉离体培养

通过对甘蓝型油菜花粉发育阶段和活力的检测确定花粉发育的时期,分离出单核晚期花粉进行离体培养.结果表明,(1)筛选出适合油菜小孢子花粉离体培养的液体培养基为T_1+怀特维生素(White's vitamins)+2%椰子汁+0.5 mol/L麦芽糖,在此培养基上花粉的成熟率可达25.1%,萌发率达6.3%.(2)筛选出适合成熟花粉离体萌发液体培养基为0.6 mol/L麦芽糖+1.6 mmol/L硼酸+2.9 mmol/L硝酸钙+29.6 μmol/L VB_1,在此培养基上,自然成熟花粉的萌发率可达75.2%.将离体培养成熟的花粉培养在萌发培养基,萌发的花粉占成熟花粉的66.3%.     

芥菜型油菜芥酸和廿碳烯酸的遗传

本试验研究了芥菜型油菜种子油中芥酸和廿碳烯酸含量的遗传。结果表明,芥菜型油菜芥酸含量 和廿碳烯酸含量的遗传行为与甘蓝型油菜十分相似。二者均受种子的胚基因型控制,与母体植株的基 因型无关。芥酸含盘受两对显性效应很小的加性基因控制,廿碳烯酸受两对具有重叠作用的显性基因 控制。低芥酸总是与低廿碳烯酸相联系。世代均值分析表明,芥酸符合加性显性模型,以加性效应为 主。廿碳烯酸不符合加显模型,但符合二基因互作模型,基因效应以显性作用为主。     

油菜小孢子胚发生的超微结构和胚状体形态

应用透射电镜和扫描电镜分别研究油菜游离小了包子培养后细胞的超微结构和胚状体的形态。单核晚期小孢子经培养后,具有胚状体发生能力的细胞中央液泡消失,积累淀粉,含丰富细胞器。     

甘蓝型油菜小孢子胚状体发生的细胞学观察

应用甘蓝型油菜ＤＨ系保６０４为材料研究小孢子胚发生过程,结果表明,在小孢子离体培养１～５ｄ内,随培养天数增加,小孢子的存活率迅速下降,部分小孢子培养后出现细胞膨大和分裂,并沿２－细胞。“ｆ”形３细胞,多细胞原体,胚柄球形胚,心形胚最终发育成鱼雷形胚,一般在心形胚阶段,胚柄脱离胚主体部分游离到培养基中,大多数膨大的细胞不能分裂或分裂后停止发育或发育异常。     

甘蓝型油菜小孢子胚状体发生的细胞学观察

应用甘蓝型油菜ＤＨ系保６０４为材料研究小孢子胚发生过程,结果表明,在小孢子离体培养１～５ｄ内,随培养天数增加,小孢子的存活率迅速下降,部分小孢子培养后出现细胞膨大和分裂,并沿２－细胞。“ｆ”形３细胞,多细胞原体,胚柄球形胚,心形胚最终发育成鱼雷形胚,一般在心形胚阶段,胚柄脱离胚主体部分游离到培养基中,大多数膨大的细胞不能分裂或分裂后停止发育或发育异常。     

黄瓜成熟胚离体培养中的胚状体诱导和植株再生（简报）

以10个黄瓜品种为材料,取成熟胚外植体先经MS 2,4—D 1.0mg/L(单位下同) KT0.5诱导后转入MS IAA 0.1 KT0.5上分化,胚状体发生频率高并有植株再生。材料的基因型差异显著,“农大春光”分化率最高(40％)。双层培养有效地促进畸形胚状体的正常发育,5％蔗糖和1.0mg/L ABA促进胚性愈伤组织的继代增殖和胚性保持。     

金花茶子叶在离体培养中胚状体的发生和小植株的形成

研究了金花茶(Camellia chrysantha(Hu)Tuyama)子叶在离体培养中体细胞胚状体发生的条件。在MS基本培养基中附加苄基嘌呤(BA)或苄基嘌呤与萘乙酸(NAA)组合,诱导了胚状体发生。组织学观察表明,胚状体起源于子叶的表皮细胞。在增添细胞分裂素和生长素的MS或改良B_5液体培养基里振荡培养,明显地促进了胚状体根的生长和茎的发育。胚状体在继代培养中能保持旺盛的再生能力。已得到两个繁殖率较高的胚状体无性系。在合适的条件下,胚状体能长成正常的小植株。     

乔纳金叶片培养胚状体发生体系的建立

利用乔纳金无菌苗叶片培养,成功地诱导出胚状体并获得再生植株。具体步骤如下:Ⅰ.在MS BA2.0mg.L-1 IAA6.0mg.L-1 2,4-D0.3mg.L-1培养基上预诱导6d;Ⅱ.在MS BA2.0mg.L-1培养基上胚性细胞发生胚状体;Ⅲ.在MS BA0.5mg.L-1 IAA0.1mg.L-1上壮苗培养20d;Ⅳ.在MS IBA0.8mg.L-1 IAA0.7mg.L-1培养基上小植株生根。     

枸杞悬浮培养条件下的胚状体发生

在MS培养基上诱导宁夏枸杞下胚轴切段形成愈伤组织,并进行细胞悬浮培养。观察了悬浮培养条件下胚状体的发生过程。<1>观察发现,细胞经悬浮培养几天以后,先形成胚性细胞团,再有胚性细胞团块形成一个或几个胚状体。较大的胚状体也可以形成新的次生胚状体。<1>影响胚状体形成的关键因素是激素的种类及其含量。实验采用的基本培养基为MS,比较适宜胚状体发生的激素是0.2mg/L 2,4-D。同样浓度的2,4-D,会抑制胚状体的进一步发育,用0.2mg/L6-BA代替2,4-D, 则胚状体可以进一步发育并形成小植株。     

芥菜型油菜脂肪酸含量的变异、相关性分析及芥酸调控基因FAE1特异引物设计

芥菜型油菜是我国芸苔属的三大油料作物之一,具有耐旱、抗病虫等优良特性;而我国是芥菜型油菜的重要起源中心,具有丰富的种质资源.该研究从全国各地搜集了34份芥菜型油菜,在贵阳环境条件下种植,其脂肪酸含量(芥酸、油酸、硬脂酸、亚麻酸和亚油酸)表现出丰富的变异,并呈正态分布.结果表明:这些芥菜型油菜种质资源的不同脂肪酸含量间的相关性发现,芥酸和油酸间呈极显著负相关,亚麻酸和硬脂酸呈极显著的正相关,亚麻酸和亚油酸呈现负相关.利用这些材料的脂肪酸含量进行主成分分析,发现绝大部分材料(30份,占88.2%)集中在二维图的特定区域,只有少数其它材料散落在图中其它区域,他们分别是SL63、棱角油菜、T6342和长阳黄芥,这些变异较大的材料在芥菜型油菜的育种中可以发挥特殊作用.此外,运用来自甘蓝型油菜和甘蓝的芥酸调控基因FAE1的已知序列,并设计了FAE1特异引物,而引物在全部34份芥菜型油菜种质资源中均表现出了较好的扩增效果.因此证实芥菜型油菜中至少含有一个FAE1拷贝.该研究结果对于芥菜型油菜育种在我国的开展及其未来的分子育种具有重要的指导意义.     

普通小麦与鸭茅状摩擦禾的远缘杂交：Ⅱ.未成熟胚的培养

培养了由２６个小麦品种（系）用鸭茅状摩擦禾的花粉授粉１４天后获得６４５个未成熟的胚。结果表明,未成熟胚培养的植株再生频率与胚的小麦基因型的杂交亲和性无关,胚的发育程度直接影响胚培养的结果,离体时分化完全的未成熟胚在无激素的培养基上可以迅速萌发成工轩,而分化未完全的小胚在无激素的培养基上分化进程不能继续,而且在无激素补充的情况下,萌发过程一旦起动,即使将这些胚转至补加了激素的胚分化培养基上,分化过程     

金花茶胚状体中游离氨基酸的含量及花氨酸、丝氨酸对胚状体发育的影响

本文报道金花茶Camellia chrysantha(HU)Tuyama胚状体培养中,具有正常产生次级胚能力的材料(第一类)和产生次胚能力差的材料(第二类)的游离氨基酸测定结果,以及脯氨酸、丝氨酸对胚状体发生的培养结果。所检出的氨基酸含量,第一类材料为第二类材料的1—5倍;且第二类材料中未能检出脯氨酸,苯丙氨和酪氨酸。在此基础上培养发现:脯氨酸和低浓度(50mmol、100mmol)的丝氨酸促进胚状体发生与鲜重增加,脯氨酸、丝氨酸和苯丙氨酸以50mmol混合使用效果最好,而且除色氨酸外,这些外加氨基酸对胚体形成频率、数目和鲜重的影响之间都有平行关系。     

芥菜型油菜与白菜正反杂交的胚胎学研究

利用荧光技术对芥菜型油菜(Brassica juncea)与白菜(B. pekinesis)种间正反杂交后花粉萌发和花粉管生长过程进行了观察。结果显示: 芥菜型油菜与白菜正交授粉后, 花粉在柱头上能正常萌发, 多数花粉管沿花柱到达胚珠完成受精, 且受精方式有珠孔受精、合点受精和中部受精, 少量花粉管生长不正常, 出现花粉管顶端膨大扭曲, 花粉管分支等异常现象; 反交授粉后, 花粉在柱头上萌发时柱头乳突细胞产生强烈胼胝质反应, 影响花粉管生长, 只有少量花粉管通过花柱到达胚珠完成受精。用石蜡切片技术观察了正反杂交后杂种的胚胎发育, 正交杂种胚胎发育较早, 胚和胚乳生长较正常, 杂种胚一般均能发育至成熟; 反交杂种胚发育至心型期便不能继续发育, 胚乳也停滞在游离核阶段并最终败育。综合分析 表明, 芥菜型油菜与白菜正反杂交都存在一定程度的受精不亲和性。     

芥菜型油菜与白菜正反杂交的胚胎学研究

利用荧光技术对芥菜型油菜（Brassica juncea）与白菜（B．pekinesis）种间正反杂交后花粉萌发和花粉管生长过程进行了观察。结果显示：芥菜型油菜与白菜正交授粉后,花粉在柱头上能正常萌发,多数花粉管沿花柱到达胚珠完成受精,且受精方式有珠孔受精、合点受精和中部受精,少量花粉管生长不正常,出现花粉管顶端膨大扭曲,花粉管分支等异常现象;反交授粉后,花粉在柱头上萌发时柱头乳突细胞产生强烈胼胝质反应,影响花粉管生长,只有少量花粉管通过花柱到达胚珠完成受精。用石蜡切片技术观察了正反杂交后杂种的胚胎发育,正交杂种胚胎发育较早,胚和胚乳生长较正常,杂种胚一般均能发育至成熟;反交杂种胚发育至心型期便不能继续发育,胚乳也停滞在游离核阶段并最终败育。综合分析表明,芥菜型油菜与白菜正反杂交都存在一定程度的受精不亲和性。     

向日葵未受精胚珠培养时胚状体发生的显微观察

由开花前1—4天的向日葵子房中取出胚珠,在液体培养基上进行漂浮培养,诱导了未受精的卵细胞发育为单倍体的胚状体.亦诱导了珠被绒毡层产生胚状体。对两种胚状体的发生和发育过程及其形态发生特点作了显微观察与描述。     

桉树胚状体再生与遗传转化的研究进展

文章综述了桉树胚状体发生过程中基因型、外植体材料、培养基、光照、植物生长调节剂种类与配比以及其他添加物对外植体胚性愈伤组织诱导以及胚状体发生的影响,探讨了影响桉树遗传转化体系建立的因素,并对近年来桉树胚状体再生和转基因研究进展进行了介绍。