三七愈伤组织的培养

在MS培养基中加入不同浓度的KT和2,4-D,综合考虑三七愈伤组织生长缓慢兼顾皂甙含量,较合适的KT浓度为0.7ppm,较合适的2,4-D浓度在2—3ppm之间。在培养基中补充各种添加剂,结果以椰子乳和水解乳蛋白较好。综合生长和皂甙含量以20％的椰子乳和0.7％的水解乳蛋白较合适。从21个三七愈伤组织无性繁殖系中筛选山了5个较优的无性系,特别是其中04号无性系更优,无论生长速率还是总皂甙含量都更高。通过以上研究,使三七愈伤组织的生长速率达220毫克/升/天,是原初培养愈伤组织(54.0mg干重/升/天)的4倍。愈伤组织中总皂甙含量高达13％,是原初培养愈伤组织(5.37％)的2.4倍,为原植物的3倍。从而证明了三七培养组织次级代谢的全能性是可调节的,为三七细胞工程的工业生产应用打下了初步基础。     

寡糖素对西洋参和人参愈伤组织培养的影响

红花、人参和黑节草寡糖素(简称CO、GO和DO)分别加入到培养基中,均能影响西洋参和人参愈伤组织生长和皂甙的合成。CO、GO和DO促进西洋参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、15ppm和10ppm,皂甙产率分别为14.89mg/flask、11.24mg/flask和14.53mg/flask,均明显高于对照(8.22mg/flash).CO、GO和DO促进人参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、20ppm和5ppm,皂甙产率分别为11.79mg/flask、11.20mg/flask和10.48mg/flask,均明显高于对照(6.65mg/flask),它们在适度浓度下对人参愈伤组织的生长均有促进作用。     

西洋参细胞大量培养的研究

当西洋参细胞培养在Ms培养液中,KN0₃含量提高一倍而去掉NH₄NO₃。时细胞生长速率和皂甙产量分别比在正常培养液中提高65．1％和166．2％。黑节草寡糖素和人参寡糖素均有利于西洋参细胞的生长和皂甙含量的提高,尤其能增加Rg组皂甙的含量。西洋参细胞悬浮培养以生产皂甙收获的最佳时期为培养25天以上,其合成皂甙的高峰在细胞生长的对数期稍后出现。细胞悬浮培养和发酵培养过程中均未见pH值回升的现象。pH值稳定的发酵培养和pH值任其变化的培养相比,其皂甙含量,生长速率和生物量均要高。最后对细胞的培养方式进行了比较。     

三七地下部分皂甙成分的HPLC比较研究

应用HPLC定量分析方法,对三七(Panax notoginseng)地下部位的皂甙成分进行分析,通过比较人参皂甙Rg1,Rb1,Re,Rd和三七皂甙R1等5种主要皂甙成分和总皂甙的含量变化,探讨不同部位和组织中皂甙成分的分布规律。结果表明在三七药材的不同商品等级中,人参皂甙Rg1和Rb1的含量以主根60头为最高,5个主要皂甙的总含量也明显高于其他的等级;根茎的生物产量只为全根的18%,皂甙含量占25%以上;主根和根茎中韧皮部的生物产量和总皂甙的含量均高于木质部;二年生三七的生物产量及皂甙含量均较三年生三七低得多。不同表型三七的皂甙组成也有区别。     

人参悬浮细胞系的建立及其生长特性的研究

从人参幼叶的培养中,筛选出了质地松疏、生长迅速、易于分散、可以长期进行继代培养的淡黄色半透明状愈伤组织系。将这种愈伤组织接种在液体培养基中进行振荡培养．建立起分散程度好的人参悬浮细胞系。在此基础上,测定了人参细胞悬浮培养物的生长曲线。实验表明,水解酪蛋白（ＬＨ）对人参悬浮细胞的生长有利。滋养培养可以使人参悬浮细胞的愈伤组织形成率提高,并在低密度下达到较高的植板率。这为有效地筛选出适合于工业化生产的高产人参细胞株提供了方便。     

西洋参细胞液体培养及动力学研究

文对西洋参细胞在改良MS培养液中发酵过程和发酵动力学进行了研究。结果表明,细胞生长动力学为：dXdt=μmax·s Ksx,式中μmax=o．1613d^-1,Ks=47．59g／L,基质消耗动力学为。-dsdt=1．75dXdt。西洋参细胞液体培养收获最佳期23天以上,皂甙累积的高峰期为25天以后。液体培养时,细胞中大部分皂甙释放到培养液中,经薄层层析后仅含R_g1;而愈伤组织中则含Rg₁、Rb₁、Re、Rd、Re五种,其总皂甙含量比人工栽种西洋参提高23％。     

茉莉酸甲酯和水杨酸对西洋参愈伤组织生长和皂苷形成的影响CSCD

本文旨在探究不同诱导子对西洋参愈伤组织生长、相关酶活性及其人参皂苷含量的影响,在西洋参愈伤组织中,应用HPLC检测了添加诱导子茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)和水杨酸(salicylic acid,SA)后西洋参愈伤组织皂苷生物合成的变化。结果显示,MeJA抑制生长,但SA对其生长影响较小;2种诱导子均可以显著激活西洋参愈伤组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;培养基中MeJA浓度为100μmol/L时,愈伤组织中总皂苷含量和产量均达到最大值,人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)、Rc的含量最高,在SA诱导子试验组中,当SA浓度为300μmol/L时,西洋参愈伤组织中总皂苷含量和产量均达到最大值,人参皂苷Rb_(1)的含量最高。结果表明,在西洋参愈伤组织中添加适当浓度MeJA和SA诱导子会提高人参皂苷化合物含量,其中以MeJA诱导人参总皂苷的效果最好,同时也会影响西洋参愈伤组织的生长量。说明在培养过程中添加外源诱导子,有利于提高西洋参愈伤组织中皂苷含量。     

三叶橡胶(Hevea brasiliensis)愈伤组织和液体悬浮培养细胞的生长、组织解剖以及形态发育潜力

利用三叶橡胶(Hevea brasiliensis)幼苗的茎作外植体业已分化出愈伤组织培养物,并通过在30℃下用每升含有2毫克2,4-D与0.5毫克激动素的MS培养基进行连续再培养能使它得到长期保存。新分化出的愈伤组织培养物能自然地分化了根。但是,在连续再培养过程则丧失了这种特性,且培养物变得具有异质性(即包含着具有繁殖能力颜色很淡的部位和无繁殖能力颜色较深而紧密的部位)。连续繁殖多次的培养物继续分化了同根部乳管相类似的含有颗粒物质的少数而零散的乳管。这种愈伤组织(O愈伤组织)移植到振荡液体培养基并不能产生具有生长能力的悬浮细胞。但是,经在液体培养基两次移植培养而得到恢复的大细胞团,再移到固体培养基培养即产生非常疏松、色淡、生长迅速的同质性愈伤组织(R愈伤组织),这种愈伤组织在再培养过程中仍然保持它特有的特征。将R愈伤组织再移植培养到振荡液体培养基便产生生长很迅速的细胞悬浮培养液,它可以用同样培养基在3℃下连续地繁殖,像一般愈伤组织培养的作法那样。O与R培养物都需要2,4-D,但两者对浓度的反应有差异。它们在连续繁殖过程中都保持二倍特性;而连续繁殖的细胞悬浮液则含有一定比例的多倍细胞。当细胞悬浮培养液不经再培养而保存几个月之后形成的大细胞团便可成胚状结构。促使这些胚状结构进一步发育成小苗的许多尝试尚未获得成功。     

柑桔裂皮病类病毒一爪哇三七悬浮细胞的生长特性

爪哇三七(Gvnura aurantlaca Dc)是柑桔裂皮病类病毒(Citrus Exocortis Viroid简称CEV)敏惑的指示植物。用CEV感染的柑桔叶研磨汁液机械接种健康爪哇三七植株,以此作为CEV感染的外植体采源。在MS和B,琼脂培养基上诱导和继代培养健康、CEV感染的爪哇三七叶片的愈伤组织,在MS、B,液体培养基中建立健康、CEX’感染的爪哇三七悬浮细胞系统。从愈伤组织和悬浮细胞培养物中抽提核酸,经5％双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染分析：在健康爪哇三七愈伤组织和悬浮细晦中不出现特异的CEV电泳带,而CEV感染的爪哇三七的所有培养物中都含有类病毒。cEV可在有丝分裂征盛的爪哇三七悬浮细胞中复制。散伤组织和悬浮细胞很容易继代培养和保存。     

土人参的组织和单细胞培养及试管苗开花结实

以土人参的花梗、茎和叶片为外植体在ＭＳ培养基上诱导出愈伤组织,诱导率为７５％－９０％。愈伤组织经分化和生根培养再生了完整植株。由组织培养再生苗的幼茎诱导的愈伤组织建立悬浮系。由悬浮系分离的单细胞在２／３ＭＳ液体培养基中振荡培养或振荡培养３周后转入双层培养均再生了愈伤组织,再生率分别为０．２８％和０．４１％。愈伤组织在含有较低浓度６－ＢＡ的培养基上分化出苗。幼苗生长迅速,每３周扩增６．７倍,再生植株     

Studies on Fermentation Culture of Cells of Panax notoginseng

The saponin content of Panax notoginseng cell cultures-was 11.14% of dry weight, the saponin yield was 1513.3mg· L-1, and yield of cell cultures was 13.58g dry wt · L-1 per month in fermentation culture, which were all better than those obtained from in suspension culture. Increasing inoculum quantity could obviously increase growth rate, saponin content and yield of cell cultures. An aeration rate of 0.8vvm was optimal for fermentation culture of the cells. The pH value of the culture broth went down from 5.80 to 3.92 gradually and never returned in fermentation culture of P. notoginseng cells.     

真菌诱导子对悬浮培养西洋参细胞的生理效应

报道了不同真菌诱导子对悬浮培养的西洋参（Ｐａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ）细胞生长、皂甙和多糖合成,以及细胞内和培养液中过氧化物酶活性的生理效应。悬浮培养的西洋参细胞经刺盘孢菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｎｉｃｏｌｔｉａｎａｅ）丝体诱导子处理后,总皂甙产率可由对照的２９６ｍｇ／Ｌ增加到６７９ｍｇ／Ｌ（约占细胞干重的（１６．３％）,比对照提高约１．３倍,而且总皂甙的８５％排放在培养液中;经黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｒａｎ）诱导子处理后,细胞多糖含量可达到１１．７９％（细胞干重）,比对照增加１倍多。初步纯化的刺盘孢菌丝体诱导子和尖孢镰刀菌（Ｆｕｓｕｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）滤液诱导子在诱导处理前期能明显促进西洋参细胞生长,同时细胞内及培养液中过氧化物酶活性显著增加;随时间延长,细胞生长和酶活性逐步受到抑制。     

Effects of oligosaccharins on callus growth and saponin content of Panax notoginseng

This work provides some evidences for the saponinproduction of Panax notoginseng callus by using biologi-cally active,wall-related oligosaccharins.In anappropriate concentration,three kinds of oligosaccharinsstimulated saponin formation or callus growth.Theconcentration of DO,GO and CO for saponin productionof Panax notoginseng callus culture were 15ppm,15ppmaud 20ppm respectively by comparing saponin yield.Itwas very obvious for DO to increase saponin contentwhen the concentration was 10ppm,and for GO tostimulate callus growth when the concentration was20ppm.It would be a good way to produce saponin byusing oligosaccharins in large scale culture in thefuture.     

Studies on Cell Suspension Culture of Panax notoginseng

The optimum period of harvesting in cell suspension culture of Panax notoginseng was 30 days. The time course of sap.nih formation proceeded almost in parallel with the cell growth. An appropriate concentration of oligosaccharms from Panax ginseng, precursor fames.l, mannffol and lysozymum which were added into tbe culture broth 10 days before harvesting, all induced saponin biosynthesis significantly. Oligosaecharins at a concentration of 15ppm(it increased 1 fold of saponin yield, and increased 22.7%(of cell growth rate compared with those of the control) and farnesol at 200ppm(it increased 70.5% of sap.nih yield and stimulated cell growth compared with those of the control) were more effective.     

三七细胞在气升式反应器中的扩大培养研究

三七细胞在5升外循环、内循环气升式反应器中能正常生长并累积三七皂甙及多糖。外循环反应器中三七总皂甙含量最高可达9.48%;内循环反应器中三七多糖含量则可高达24%。但三七细胞生长比较缓慢的问题有待进一步研究。     

人参寡糖素对三七悬浮培养细胞生长的效应

从人参培养细胞的细胞壁中分离纯化到不同分子量的单体人参寡糖素。试验结果表明命名为人参寡糖素Ⅶ和人参寡糖素Ⅷ的两种寡糖素对三七悬浮培养细胞的生长具有明显的促进作用,其增长率分别为１９．３４％和１０．５８％,人参寡糖素Ⅶ的适宜浓度为５—１０ｍｇ／ｌ。在高浓度下（大于２５ｍｇ／ｌ）稍抑制培养细胞生长。在细胞培养２２天（指数生长期）后．加入１０ｍｇ／ｌ的人参寡糖素Ⅶ．然后再培养２天。其生长速率即提高,加入人参寡糖素Ⅷ后．缩短了三七细胞悬浮培养生长的延缓期．提前进入对数生长期和指数生长期,并在对数生长期和指数生长期作用最明显,因而最终收获时培养细胞的产率增加。     

寡糖素对红花及三七培养细胞的生理作用

三种寡糖素,即来自人参(Panax ginseng)培养细胞的人参寡糖素、红花(Carthamus tinctorius)培养细胞的红花寡糖素、黑节草(Dendrobium candidum)植物的黑节草寡糖素对红花及三七 (Panax notoginseng)的培养细胞的生长及代谢产物的含量均有显著的促进作用。寡糖素可耐高温高压(121℃、1.2bs／cm2)灭菌15分钟而不失活,其对植物培养细胞的影响与利用过滤方法灭菌的效果相似。红花寡糖素对红花悬浮培养细胞作用的适宜浓度是5-10mg/L,而在愈伤组织中为15mg/L,在三七培养细胞进入生长旺盛(培养至22天)时加入黑节草寡糖素,再培养2天后其生长即提高。黑节草寡糖素均能缩短红花及三七培养细胞生长的延缓期,提前进入对数生长期及指数生长期。并且使红花培养细胞中a-生育酚在细胞生长最活跃的指数生长期大量积累,最终增加了培养细胞及代谢产物的产率。