肺癌病人血清中U1-A snRNP自身抗体的发现与鉴定

许多研究表明, 肺癌病人存在自身免疫现象. 为了寻找肺癌病人血清中具有潜在诊断价值的自身抗体, 采用免疫荧光染色, 免疫印迹和蛋白质芯片技术对10例肺癌病人和10例正常人血清进行了检测. 筛选中发现1例来自64岁男性肺鳞癌(Ⅲb期)病人的血清呈现特异性的细胞核染色, 并在31 kD处有一个明显的细胞核蛋白免疫印迹条带. 进而采用该病人的血清进行免疫沉淀, 对所捕获的蛋白组分进行质谱分析和数据库查询后确认31 kD条带为核内小核糖体蛋白U1-A(small nuclear ribonucleoprotein U1-A, U1-A snRNP). 进一步对36例鳞癌、26例腺癌、31例小细胞肺癌和20例健康对照血清样本进行了免疫荧光染色和免疫印迹验证, 结果显示50%的鳞癌、26.9%的腺癌、54.8%的小细胞肺癌病人血清中有抗U1-A snRNP抗体. 上述结果报道了在肺癌病人血清中出现Anti-U1-A snRNP自身抗体.     

用热处理法从自体血浆中分离白蛋白

在利用血浆交换治疗病人的血浆中分离白蛋白的一种简易技术已被发展起来。 这种白蛋白可以给病人还输以维持病人体内的胶体渗透压而没有传染疾病的危险。病人血浆用单采法获得。将其在70℃下加热60分钟便自身抗体、免疫复合物和异常球蛋白变性而被去除。结果低浓度的白蛋白溶液(LCAS)保持了其自然特性。凝胶扩散的免疫学分析显示出它与人血清白蛋白完全一致的反应模式。醋酸纤维     

严重急性呼吸综合征(SARS)病人血清抗体水平的初步探讨

为了了解严重急性呼吸综合征(SARS)病人血清中的抗体产生规律,对56份病人血清和36份健康人血清,分别采用间接酶联免疫吸附试验(EIA)检测IgG抗体和捕获法检测IgM抗体。结果显示：56份病人血清中有48份IgG抗体阳性,7份IgM抗体阳性。     

伤寒杆菌感染后IgG和IgM抗体消长规律的初步观察

本文报道了以试管凝集、SpA菌体吸收和2ME处理血清的方法对感染动物和部分伤寒病人血清中的IgG和IgM抗体的消长规律的观察结果。初次注射伤寒杆菌在3～30天中均为IgM抗体,再次注射后仍然以IgM抗体首先回升,然后才有IgG抗体的出现。在再次注射后所观察的期间,IgM抗体仍然维持较高的滴度。在观察的10例伤寒病人(6至30日病程)中,其抗体类型也是IgM。伤寒病人的血清学诊断,目前主要用肥达氏反应。本文以试管凝集、SpA菌体吸收和2ME处理血清的方法对感染动物血清和部分伤寒病人血清中的IgG和IgM抗体的消长规律进行了初步观察。     

血中检测SARS冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用

为明确严重急性呼吸综合症(SARS)冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用,通过微量中和试验及酶联免疫方法、间接免疫荧光法检测疑似病人恢复期血清(大于28天)中SARS-IgG抗体,确诊SARS患者。同时收集发病不同时期SARS及普通发热病人血清,利用酶联免疫方法检测SARS-CoVN蛋白,并与荧光定量PCR早期诊断方法相比较。共检测：广州地区2003年12月～2004．年1月新发4例确诊SARS患者不同时期的血液和咽漱液标本;恢复期血清SARS-CoV中和抗体阳性病人不同时期的血清46份;广州地区2003年1月～4月临床确诊SARS患者159例的血清和56例疑似患者血清;非SARS普通发热病人血清97份;正常人体检血清100份。结果：4例新发SARS患者的不同时期标本中,3例患者急性期血均检出N蛋白,优于常用的荧光定量PCR检测方法。46份SARS-CoV中和抗体阳性的血清标本,N蛋白检出率为100％。159例临床确诊病例中,发病早期5天以内SARS-CoVN蛋白的检出率为92．3％,随后呈现逐步下降的趋势,在发病第18天仍可检出。56例临床疑似患者发病早期也有23．2％检出率。而97例普通发热病人及100份正常人血清中均未能检测出SARS-CoVN蛋白。表明在血清中检测SARS冠状病毒N蛋白的方法敏感性和特异性都好,对SARS实验室早期诊断具有重要作用。     

利用蛋白质组学方法筛选及确定喉癌诊断的标志分子

采用蛋白质芯片和生物信息学方法从喉癌患者血清中筛选标志蛋白. 采用SELDI(surfaced enhanced laser desorption/ionization)蛋白质芯片技术对33例喉癌(12例声门癌, 18例声门上癌, 3例声门下癌)病人血清和31例正常人血清蛋白质谱图进行了检测. PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据, 获得的结果采用Ciphergen 公司的Biomarker Wizard和Biomarker Pattern软件分析. 结果显示与正常人血清蛋白质谱相比时, 喉癌病人血清中有16个差异蛋白, 其中8个标志分子在病人血清中高表达, 8个标志分子在病人血清中低表达. Biomarker Pattern软件在设定条件下自动选取上述标志分子中的两个蛋白质8153和2035 Da用于建立喉癌诊断的分类树模型. 此分类树具有两层3个叶结点, 可将96.9%的喉癌病人和96.7%正常人正确划分出来. 实验证明利用蛋白质组学和生物信息学方法可从血清中筛选出喉癌相关的标志蛋白, 而且蛋白质芯片技术对于发现和筛选血清中的喉癌标志蛋白是一种有效、快速的工具.     

应用蛋白质芯片技术从血清中筛选肺癌标志蛋白

探讨用蛋白质芯片技术筛选肺癌病人血清中的特异性标志蛋白. 采用SELDI (surfaced enhanced laser desorption/ionization)蛋白芯片技术检测了30例肺癌(15例原发癌, 9例转移癌, 6例化疗后)病人血清和12例正常人血清中的蛋白质谱. 选用阴离子交换柱处理血清样品, 用5个不同pH的洗脱液和有机溶剂洗脱柱床, 通过改变洗脱液的pH值得到6个具有不同pI的蛋白质组分. 每个组分用IMAC-Cu和WCX2两种芯片检测. 采用美国Ciphergen 生物公司研制的蛋白质芯片阅读机读取数据, 获得的蛋白质谱采用Ciphergen 公司的Biomark Wizard软件分析. 结果显示, 肺癌病人与正常人的血清中有15个差异蛋白(标志分子)表达. 与正常人血清相比, 6个蛋白质在肺癌病人血清中高表达, 9个蛋白质在肺癌病人血清中低表达. 采用单一标志分子检测时, 敏感性为44.82%~93.1%, 特异性为85%~94.4%. 其中5个标志分子在两种芯片上被检测出来. 实验证明与肺癌相关的特异性标志分子可从病人血清中检测出来, 而且蛋白质芯片技术对于发现和筛选血清中的肺癌标志蛋白是一种有效、快速的工具.     

应用血清学方法鉴别急性和慢性病毒性乙型肝炎

本文用ELISA间接法检测急性和慢性乙型肝炎病人血清特异性抗HBcIgG,用ELISA捕捉法检测特异性抗HBcIgM。11例急性乙肝病人急性期抗HBcIgM100％阳性,抗HBcIgG全部阴性;恢复期抗HBcIgM 81.8％阴转,抗HBcIgG则100％阳转。17例慢性乙肝病人抗HBcIgM82.35％阳性,抗HBcIgG 100％阳性。被检血清经密度梯度超速离心,证实抗HBcIgM和抗HBcIgG两类抗体反应在急性和慢性乙肝病人血清中具有不同的动态规律。     

EB病毒DNA聚合酶基因的表达与纯化及其在鼻咽癌病人诊断中的应用

以Epstein-Barr病毒(EBV)DNA聚合酶为抗原,建立了简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌诊断方法.构建原核表达载体pRSET-DNA聚合酶及其亚克隆pRSET-A1和pRSET-A2,在BL21(DE3)中表达的产物,经Western-blot检测其抗原性并用于检测鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)病人血清中的抗体.在NPC病人血清中存在抗EB病毒DNA聚合酶的IgG抗体,并证明DNA聚合酶的抗原性主要集中于后2/3片段(A2)上.Western-bolt检测A2/IgG抗体的敏感性和特异性分别为80%和100%.对46份NPC病人血清和46份非NPC头颈癌症病人血清,用ELISA检测A2/IgA,敏感度为89%,特异度为93%.初步建立了ELISA检测NPC病人血清中A2/IgG抗体的方法,获得较高的敏感性和特异性.     

早期胃癌血清特异标志物过氧化物酶4核酸适配体的筛选、鉴定与应用

胃癌是世界上死亡率第三的重大疾病,而在早期阶段却有着良好的治愈率和生存率。因此,找到针对早期胃癌的特异性标志物从而提高早期胃癌的检出率,是目前亟待解决的问题。在本实验室的早期研究中,发现过氧化物酶4（peroxiredoxin-4,PRDX4）有极大的潜能作为早期胃癌的特异性标志物,并且由于蛋白质结构的特殊性,能够分泌至血清中,为早期胃癌的无创化诊断提供了可能。本文为寻找血清中PRDX4蛋白的特异性适配体,通过消减-SELEX方法找到9种适配体。经特异性和亲和力分析后,证实其中Ap-EGACS-11在9种适配体中具有最高的特异性和亲和力。随后在适配体的验证研究中证实,相对于进展期胃癌病人血清、结直肠癌病人血清和正常人血清,Ap-EGACS-11对早期胃癌病人血清的检出率最高。该结果表明,PRDX4具有早期胃癌特异性血清标志物的潜能,且Ap-EGACS-11可直接作为早期胃癌的检测试剂。     

慢性肾衰病人血清和红细胞抗氧化能力的ESR研究

用电子自旋共振(ESR)自旋捕集技术研究了正常人和肾衰病人血清和红细胞对黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶体系产生的氧自由基的作用.结果发现:(1)正常人血清和红细胞能够有效地清除超氧阴离子自由基(O_2~-),而肾衰病人血清和红细胞清除O_2~-的能力明显比正常人血清和红细胞低;(2)正常人血清能有效地把黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶体系产生的O_2~-转化为·OH,病人血清在这方面与正常人血清有显著性差异.     

应用免疫-PCR检测癌症的初步研究

探索一种简便、灵敏度高、特异性强且易推广的血清中突变型p53蛋白检测方法,用于肿瘤早期诊断.用突变型p53蛋白的单克隆抗体,与特定DNA片段连接制成基因探针,用免疫-PCR技术,对117例病人血清样品进行检测 .在117例病人血清样品中,检测总阳性率为41.88%(49/117),在临床怀疑为癌症及肿瘤病人中阳性率达52.11%(37/71).     

血清中Epstein-Barr病毒膜抗原IgA抗体检测法的改进及应用

用萄葡球菌菌体A蛋白(SPA)预先处理被检血清,以去除抗体IgG部份的竞争性结合,提高了间接免疫荧光法检查鼻咽癌病人血清中EB病毒膜抗原IgA(IgA/MA)抗体的敏感性及特异性,检查48例鼻咽癌病人血清IgA/MA抗体,阳性率为100％,血清几何平均滴度为141;40例其它恶性肿瘤病人和46例正常人都检不出IgA/MA抗体,免疫荧光法测得IgA/MA抗体阴性的6例鼻咽癌病人血清,SPA吸收后呈阳性反应,此改进方法可用以追踪观察鼻咽癌病的病程及预后。     

应用免疫-PCR检测癌症的初步研究

探索一种简便、灵敏度高、特异性强且易推广的血清中突变型ｐ５３蛋白检测方法,用于肿瘤早期诊断。用突变型ｐ５３蛋白的单克隆抗体,与特定ＤＮＡ片段连接制成基因探针,用免疫－ＰＣＲ技术,对１１７例病人血清样品进行检测。在１１７例病人血清样品中,检测总阳性率为４１．８８％（４９／１１７）,在临床怀疑为癌症及肿瘤病人中阳性率达５２．１１％（３７／７１）。     

国内首次自患者标本中同时分离的登革2型和3型病毒的鉴定

采用间接免疫荧光方法 ,检测患者血清标本中的抗登革病毒IgM和IgG抗体 ;同时将病人急性期血清接种C6 36细胞进行病毒分离。从分离的病毒悬液中提取RNA ,进行RT PCR扩增和序列测定。结果显示 ,该患者血清中存在抗登革病毒的IgM和IgG抗体。从病人血清中分离的病毒 ,经RT PCR和序列测定证实为登革 2型和 3型病毒的特异序列。表明该患者为登革 2型和 3型病毒混合感染     

IFN-γ、IL-12及TNF-α在脊柱结核病人血清和病灶中的表达以及对疾病的影响

目的:检测IFN-γ、IL-12及TNF-α在脊柱结核病人血清和病灶中的表达水平,探讨血清和病灶中IFN-γ、IL-12及TNF-α的表达水平与脊柱结核的相关性。方法:2014年12月至2016年3月期间,纳入符合标准的脊柱结核病人46例为实验组,椎体骨折病人48例为对照组。应用ELISA检测两组人群血清中IFN-γ、IL-12、TNF-α的平均浓度;病灶标本免疫组化染色检测其IFN-γ、IL-12、TNF-α的平均光密度值。结果:实验组血清中IFN-γ,IL-12,TNF-α平均浓度分别为26.82±7.81 pg/mL,25.93±12.84pg/mL,68.13±16.24 pg/mL,对照组血清中平均浓度分别为46.89±7.81 pg/mL,49.45±22.38 pg/mL,26.65±10.11 pg/mL;实验组病灶中IFN-γ,IL-12,TNF-α平均光密度值分别为0.273±0.076,0.380±0.054,0.306±0.052,对照组病灶中平均光密度值分别为0.092±0.024,0.183±0.034,0.180±0.031。实验组与对照组血清及病灶中IFN-γ、IL-12及TNF-α的表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:脊柱结核病人的血清IFN-γ、IL-12浓度呈低表达,TNF-α浓度呈高表达;脊柱结核病人病灶中IFN-γ、IL-12及TNF-α表达增加;检测脊柱结核病人IFN-γ、IL-12及TNF-α血清水平含量能为其机体免疫力的状态、判断结核病情程度和进展及为临床诊断提供参考依据。     

新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况和分子流行病学研究

目的观察新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况、基因分型及其在肝病发生和发展过程中的作用。方法在日本株TTVORF1保守区设计了两对套式引物,采用巢式聚合酶链反应扩增血清TTVDNA,并对产物进行分子克隆和部分基因序列分析。结果在非甲-戊型和非庚型肝炎病人、血清HBsAg阳性的肝炎病人、正常献血员、肝炎肝硬化病人、原发性肝癌病人、静脉内吸毒者和女性与男性性乱者中,血清TTVDNA阳性率分别为43.2％(16/37)、28.8％(15/52)、9.3％(4/43)、51.9％(14/27)、38.5％(5/13)、35.0％(14/40)、17.3％(8/45)和18.8％(3/16)。其中非甲-戊型和非庚型肝炎病人、血清HBsAg阳性肝炎病人的ALT平均为(472士276)u·L-1和(385士218)u·L-1;肝炎肝硬化病人TTVDNA阳性率显著高于HBsAg阳性肝炎病人。同时,从非甲-戊型和非庚型肝炎病人、血清HBsAg阳性肝炎病人、正常献血员、静脉内吸毒者和女性性乱者中,分别获得6份TTVDNAORF1克隆,其基因序列与日本株TTVORF1部分基因核苷酸序列同源性为97％～99％,均属于TTV1a型。结论TTV感染和ALT升高存在一定的关系;我国各类高危人群感染TTV以1a型为主,TTV基因型与疾病发生和传播方式关系不大。国内首次报导性传播的TTVDNA基因型。     

血小板计数在五步蛇咬伤中的临床意义

目的探讨血小板计数在五步蛇咬伤临床治疗中的指导意义。方法对2006年3月至2009年12月我院收治的77例五步蛇咬伤病人在运用抗蛇毒血清治疗时对病人的血小板计数进行动态监测。蛄果患者入院时的血小板计数越低,抗蛇毒血清用量越大,呈负相关。结论在五步蛇咬伤治疗中,血小板计数可指导抗蛇毒血清的应用剂量。在应用抗蛇毒血清后血小板计数仍较低者．常提示抗蛇毒血清的用量不足,需追加剂量。     

抗白蛋白抗体(AAA)

1974年Lenkel发现肝病病人血清能凝集聚合人血清白蛋白(PHSA)包被的红细胞。这现象已由许多学者所证实。产生这一现象的原因有二。1,与PHSA结合的是HBsAg(包括Dane颗粒、小球形和管形颗粒)颗粒上存在PHSA受体,2,乙肝病人血清中存在抗自身变性白蛋白的抗体(AAA),介导了HBV感染的病人的HB_sAg和Dane颗粒与PHSA包被的红细胞起反应。     

冠心病病人血清脂联素与可溶性细胞间黏附分子-1的变化及意义

目的：探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）病人血清中脂联素与可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）水平的变化及临床意义。方法：选择冠心病病人59例,其中急性冠脉综合征（ACS）31例,稳定性心绞痛（SAP）28例,采用ELISA法检测病人血清脂联素、sICAM-1的浓度并与20例健康对照比较。结果：ACS组病人血清脂联素的浓度显著低于SAP组和对照组（P〈0．05）．sICAM-1浓度显著高于SAP组和对照组（P〈0．05）,血清脂联素的浓度与sICAM-1水平呈负相关（r=-0．295,P〈0．05）。结论：血清脂联素与sICAM-1水平的变化与冠脉病变的稳定性有关,检测血清中脂联素与slCAM-1对于冠心病的辅助诊断、病情判断、及预防治疗有重要临床意义。