蝎毒对癫痫敏感性和海马GFAP释放的影响

目的和方法 :本工作用海人酸癫痫模型 ,通过对癫痫大鼠蝎毒治疗后行为变化及脑内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应活性的检测 ,对蝎毒抗癫痫反复发作的相关脑区及其机制做以初步探讨。结果 :癫痫大鼠蝎毒治疗三周后 ,能明显减少癫痫发作的例数 ,减轻癫痫发作的程度 ,使发作的潜伏期延长 (P <0 .0 5 )。免疫细胞化学的实验显示 ,蝎毒抗癫痫反复发作的相关脑区是海马。 8例蝎毒治疗的大鼠与实验对照组相比 ,有 6例背侧海马GFAP免疫染色明显减轻 ,未见星形胶质细胞增生 ;CA1区无明显神经元缺失 ;而且与空白对照组相比无显著差异。结论 :癫痫大鼠蝎毒治疗三周后 ,能明显减轻癫痫发作的行为 ,抑制海马星形胶质细胞的增生肥大 ,减轻海马神经元受损的程度。蝎毒抑制海马星形胶质细胞增生很可能是蝎毒抗癫痫反复发作的重要机制之一。     

蝎毒对癫痫大鼠海马内强啡肽原mRNA表达的影响

目的和方法：本工作用红藻氨酸癫痫模型,通过对癫痫大鼠蝎毒处理后民内哟啡肽原ｍＲＮＡ（ＫＰＵＹＮｍＲＮＡ）表达的原位杂交观察,对国产蝎粗毒抗癫痫反复发作的细胞分子机制进行初步探讨。结果：原位杂交的实验显示,三周ＫＡ后,实验对照组与空白对照组相比,腹侧海马尤其是海马门区ＰＤＹＮｍＲＮＡ阳性数目明显减少（Ｐ〈０．０１）。实验给药组大鼠８例,其中有６例腹侧海马门区ＰＤＹＮｍＲＮＡ阳性神经元数目未见减少且有     

蝎毒诱导红藻氨酸癫痫大鼠海马内胆囊收缩素原mRNA的表达

目的和方法：本工作用红藻氨酸（ＫＡ）癫痫模型,对用蝎毒处理住房第马内胆囊收缩素原ｍＲＮＡ（ＰＣＣＫ ｍＲＮＡ）表达进行原位杂交观察,并对国产东亚钳蝎粗毒抗癫痫反复发作的机制做了初步探讨。结果：原位杂交的实验显示,三周ＫＡ后,实验对照组与空白对照组相比,腹侧海马是海马门区ＰＣＣＫ ｍＲＮＡ阳性神经元数目明显减少（Ｐ〈０．０５）;实验给药组大鼠８例,其中有６例腹侧海马门区ＰＣＣＫ ｍＲＮＡ阳性神经元数     

微生态调节剂抗癫痫敏感性形成作用中神经胶质原纤维酸性蛋白免疫活性变化

用红藻氨酸（ＫａｉｎｉｃＡｃｉｄ,ＫＡ）１２ｍｇ／ｋｇ给ＳＤ大鼠颈部皮下注射,诱发动物出现癫痫发作,该癫痫发作于８小时内完全缓解。ＫＡ后１周再次给予ＫＡ（此次为阈下剂量５ｍｇ／ｋｇ）,检测上述动物对癫痫刺激的敏感性。结果表明,与对照组比较,于４周前开始并连续灌服微生态调节剂实验组动物癫痫敏感性的形成受到明显抑制（Ｐ＜０００１）,同时用免疫细胞化学方法观察大鼠脑内海马部位星形胶质细胞的神经胶质原纤维酸性蛋白（ＧｌｉａｌＦｉｂｒｉｌａｒｙａｃｉｄｉｃｐｒｏｔｅｉｎＧＦＡＰ）免疫反应活性的变化,发现ＫＡ后１～７天,实验组与对照组比较,海马部位神经胶质原纤维酸性蛋白免疫反应活性明显受到抑制。结果表明微生态调节剂的抗癫痫敏感性作用可能与抑制胶质细胞过度增生有关。     

全蝎抗癫痫发作敏感性的阿片肽机制

红藻氨酸（ＫａｉｎｉｃＡｃｉｄ,ＫＡ）癫痫模型,探讨全蝎抗癫痫发作敏感性长期增强的阿片肽机制。本实验选用ＳＤ大鼠,随机分为两组,分别给予生理盐水（ＮＳ）和全蝎粗提液灌胃１０天,１０天后两组均分别颈部皮下注射ＮＳ和惊厥剂量（１０ｍｇ／ｋｇ）的ＫＡ,再分别继续给予ＮＳ和全蝎粗提液灌胃１０天后,用阈下剂量（５ｍｇ／ｋｇ）的ＫＡ检测癫痫敏感性;用Ｆｏｓ免疫反应活性检测海马结构中神经元的兴奋性;用原位杂交技术检测海马脑啡肽原（ＰＥＮＫ）ｍＲＮＡ的动态变化过程。结果显示：实验对照组大鼠癫痫行为敏感性明显增强,脑内癫痫敏感性相关脑区海马齿状回颗粒细胞（ＤＧＣｓ）ｃ－Ｆｏｓ免疫反应阳性细胞数目明显增加,同时海马内具有致癫痫作用的脑啡肽原（ＰＥＮＫ）ｍＲＮＡ表达也明显增加;而实验组动物未见上述改变。本工作证实中药全蝎有明显降低海马神经元兴奋性及抗癫痫发作敏感性形成的作用,并提示这很可能与其抑制ＰＥＮＫｍＲＮＡ表达增加有关     

蝎毒抗癫痫反复发作的GFAP基因调控机制

已有的资料证实红藻氨酸 (Ｋａｉｎｉｃａｃｉｄ ,ＫＡ)癫痫模型具有癫痫发作敏感性长期增强的特征 ,伴有海马结构胶质原纤维酸性蛋白 (ｇｌｉａｌｆｉｂｒｉｌｌａｒｙａｃｉｄｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＡＰ)的大量表达 ,其为海马结构反应性胶质化的神经病理学基础 ;用反义ＧＦＡＰｍＲＮＡ转染的星形胶质细胞的细胞株内不再表达ＧＦＡＰ。新近 ,我们从ＫＡ癫痫大鼠海马结构中发现调控ＧＦＡＰ基因表达的序列特异的ＤＮＡ结合蛋白。我们从前的工作已证实蝎毒具有明显的抗癫痫反复发作的作用 ,抑制癫痫大鼠海马结构ＧＦＡＰ的过量表达 ,但蝎毒阻…     

白细胞介素-2对大鼠海马谷氨酸能神经元和γ-氨基丁酸能神经元的影响———免疫组织化学和狭线杂交研究

本研究应用免疫组织化学（ＰＡＰ法）的方法,观察到侧脑室内注射白细胞介素２（ＩＬ２）后,大鼠海马回和齿状回内谷氨酸（Ｇｌｕ）免疫反应阳性神经元的数量明显减少、胞体皱缩、突起及其分支减少;γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应阳性神经元的数量、突起及其分支皆减少。用３２Ｐ标记的ＧＡＢＡＴｃＤＮＡ探针对大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ进行狭线杂交结果显示：实验组大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ的含量明显增多。由于ＧＡＢＡ在ＧＡＢＡＴ的作用下,可转变为Ｇｌｕ,因此,以上结果表明ＩＬ２不仅可影响海马神经元合成和释放Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ,而且还使Ｇｌｕ的释放量大于其合成量。这些变化可能与癫痫的发病机理有关     

地塞米松对大白鼠海马兴奋性神经元和抑制性神经元的影响

为了探讨糖皮质激素对海马兴奋性神经元和抑制性神经元的作用,本实验将地塞米松注入大白鼠侧脑室,２ｈ 后经Ｎｉｓｓｌ染色法、免疫组织化学方法和细胞计数法观察了海马谷氨酸免疫反应性（ＧｌｕＩＲ）神经元和γ氨基丁酸免疫反应性（ＧＡＢＡＩＲ）神经元的变化。结果显示：（１）ＣＡ１、ＣＡ３ 和ＳＧ区的ＧｌｕＩＲ神经元明显增多,特别是ＣＡ１ 区。经细胞计数统计分析表明,与对照组相比ＣＡ１ 有极显著性差异（Ｐ＜ ０００１）,ＣＡ３区有显著性差异（００１＜ Ｐ＜ ００５）,ＳＧ处无明显差异（Ｐ＞ ００５）。（２）与对照组相比,ＧＡＢＡＩＲ神经元无明显变化。结果表明,糖皮质激素有增加海马谷氨酸能神经元的作用。尽管γ氨基丁酸能神经元无明显变化,并不表明糖皮质激素对其无影响     

红藻氨酸致敏癫痫大鼠海马内AP-1 DNA结合活性和成分的改变

一次皮下注射惊厥剂量（７．５ｍｇ／ｋｇ）的红藻氨酸（ｋａｉｎｉｃ ａｃｉｄ,ＫＡ）诱发Ｆｉｓｈｅｒ３４４大鼠出现急性癫痫发作,７ｄ后即可形成癫痫敏感大鼠,继用Ｇｅｌ ｓｈｉｆｔ、Ｓｕｐｅｒ－ｓｈｉｆｔ和Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ方法测定大鼠海马内ＡＰ－１ ＤＮＡ结合活性及其组成成分。Ｇｅｌ ｓｈｉｆｔ结合显示,癫痫敏感大鼠海马内ＡＰ－１ ＤＮＡ结合活性的基础水平较对照组为高;Ｓｕｐｅｒ－ｓｈｉｆｔ实研     

癫痫发作敏感大鼠前深梨状皮层T区神经病理观察

目的和方法：采用颞叶癫痫红藻氨酸（kainic acid,KA)模型,制备癫痫发作敏感大鼠,并分别以硫瑾染色和GFAP（神经胶质原纤维酸性蛋白,glial fibrilary acidic protein)免疫组化方法检测前深梨状皮层T区（area tempestas,AT)内神经元损伤及星形胶质细胞增生情况,并与经蝎毒（scorpion venom,SV)处理后癫痫发作敏感性明显降低的大鼠进行比较。结果：与对照组比较,癫痫敏感动物前深梨状皮层T区锥体细胞数目明显减少,GFAP免疫反应阳性星形胶质细胞数目明显增加,染色强度明显增强,（P＜0．05）以剂量为100mg/kg/日的蝎毒给予动物连续灌胃三周,可明显降低其癫痫发作敏感性（P＜0．05）,而脑内梨状皮层T区锥体细胞脱失减轻,GPAP免疫反应活性未见明显增强。结论：推测梨状皮层T区硬化（神经元脱失,星形胶质细胞增生肥大）很可能是癫痫发作敏感性长期存在的重要原因。     

局部高频电刺激海马对海人酸致痫大鼠海马细胞外谷氨酸和γ-氨基丁酸释放的影响

目的：通过高频电刺激海人酸癫痫模型大鼠海马,观察海马细胞外谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）的动态变化。方法：将SD大鼠分成4大组（n=10）：①空白组;②海人酸组;③假刺激组：植入刺激电极未予电刺激;④电刺激组：海人酸注射后予130 Hz电刺激。利用微透析技术收集不同时段海马细胞外液,应用高效液相-荧光检测法测定收集液Glu、GABA的浓度。结果：注射海人酸后Glu明显升高,并持续至第14天,电刺激使Glu明显下降;而注射海人酸后GABA呈短暂性升高,后逐渐下降于第4天后保持稍高于正常水平,电刺激并无明显改变GABA的水平。结论：海马细胞外Glu下降在海马电刺激治疗癫痫中起到重要作用;高频电刺激海马选择性地减少谷氨酸能神经元活动,但不影响GABA的释放。     

雷公藤甲素对KA损伤大鼠星形胶质细胞的影响

目的:观察海人藻酸(Kainic acid,KA)海马内注射后星形胶质细胞的变化及雷公藤甲素(TRP)对其的影响.方法:90只SD大鼠(200～220g)随机分为3组:右侧海马注射生理盐水后生理盐水灌胃作为对照组(NS+NS),右侧海马注射海人藻酸后生理盐水灌胃干预组(KA+NS),右侧海马注射海人藻酸后雷公藤甲素灌胃干预组(KA+TRP).动物存活1天,3天,5天,7天,14天后免疫组织化学结合图像分析技术观察海马内星形胶质细胞形态和数目的变化.结果:(KA+NS)组海马内星形胶质细胞数目明显增多,胞体明显增大,突起变短,变粗,与(NS+NS)组相比差别具有显著性(p＜0.05);(KA+TRP)组星形胶质细胞数量明显减少,胞体变小,突起变细长,与(KA+NS)组相比差别具有显著性(P＜0,05).结论:KA注射后可导致大鼠海马内星形胶质细胞的激活,雷公藤甲素对KA诱导的星形胶质细胞的活化有抑制作用.     

TRP 对KA 诱导的AD 模型大鼠学习记忆的影响及其作用机制

目的:观察雷公藤甲素(Triptolide,TRP)对海人藻酸(Kainic acid,KA)海马内注射后大鼠学习记忆的影响及其作用机制。方法:采用Morris水迷宫筛选空间学习记忆能力正常的SD雄性大鼠90只(200～220g)。将实验动物分成3组:右侧海马注射生理盐水后生理盐水灌胃对照组(NS+NS)、右侧海马注射海人藻酸后生理盐水灌胃干预组(KA+NS)、右侧海马注射海人藻酸后雷公藤甲素灌胃干预组(KA+TRP)。动物存活1天,3天,5天,7天,14天,每个时间点6只,处死前分别于各相应时间点用Morris水迷宫检测各组动物空间位置记忆能力;免疫组织化学方法结合图像分析技术检测海马CA1区神经元COX-2的表达。结果:与NS组(NS+NS)比较,KA组(KA+NS)大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),跨越原平台次数减少(P<0.05);海马CA1区的神经元COX-2表达升高(P<0.05);TRP组(TRP+KA)与KA组比较,大鼠的平均逃避潜伏期从第5天起缩短(P<0.05),跨越原平台次数增多(P<0.05),海马CA1区神经元COX-2表达在5天,7天时下调(P<0.05)。结论:KA海马内注射,可以导致大鼠学习记忆功能障碍及上调海马CA1区神经元COX-2表达;雷公藤甲素干预治疗,能够改善动物的学习和记忆能力,能抑制KA诱导的海马CAl区神经元COX-2的表达。     

红藻氨酸癫痫大鼠海马GFAP基因调控蛋白表达的变化

目的和方法：用Southwestern印迹从红藻氨酸（KA）癫痫大鼠海马结构中筛选调控胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）基因表达的DNA结合蛋白;并观察其在海马内表达变化的规律,旨在从基因调控水平深入探讨癫痫反复发作形成的神经病理学机制。结果：Southwestern印迹的实验显示海马结构内有两种调控GFAP基因表达的序列特异的DNA结合蛋白,分子量分别为39kDa和35.5kDa;KA后1d,两种调控蛋白的表达即开始增加,5－7d时表达显著增加,3周时表达最多,3个月时表达仍很高。结论：KA通过上调调控GFAP基因表达的转录因子,使海马GFAP过量表达,提示该转录调控因子很可能参与一次KA后癫痫反复发作的形成。     

Effect of intranasal and oral administration of levetiracetam on the temporal and spatial distributions of SV2A in the KA-induced rat model of SE

To investigate the effectiveness of nasal delivery of levetiracetam (LEV) on the distributions of synaptic vesicle protein 2 isoform A (SV2A) in epileptic rats with injection of kainic acid (KA) into amygdala. A total of 138 rats were randomly divided into four groups, including the Sham surgery group, the epilepsy group (EP), and the LEV oral administration (LPO) and nasal delivery (LND) groups. The rat intra-amygdala KA model of epilepsy was constructed. Pathological changes of rat brain tissue after status epilepticus (SE) were detected using haematoxylin and eosin staining. Expression of SV2A in rat hippocampus after SE was evaluated using the western blotting analysis. Expression and distribution of SV2A in rat hippocampus after SE were detected based on immunofluorescence staining. The EP group showed evident cell loss and tissue necrosis in the CA3 area of hippocampus, whereas the tissue damage in both LPO and LND groups was significantly reduced. Western blotting analysis showed that the expressions of SV2A in the hippocampus of both EP and LND groups were significantly decreased 1 week after SE, increased to the similar levels of the Sham group in 2 weeks, and continuously increased 4 weeks after SE to the level significantly higher than that of the Sham group. Results of immunofluorescence revealed largely the same expression patterns of SV2A in the CA3 area of hippocampus as those in the entire hippocampus. Our study revealed the same antiepileptic and neuronal protective effects by the nasal and oral administrations of LEV, without changing the expression level of SV2A.     

褪黑素对海人酸致痫大鼠海马内TGF-β3水平的影响

目的探讨褪黑素(me1atonin,MT)对海人酸(kainic acid,KA)致痫大鼠海马内TGF-β3的影响,进一步明确其在中枢内的作用。方法将实验大鼠随机分为3组:生理盐水对照组(NS组)、海人酸组(KA组)、褪黑素+海人酸组(MT+KA组)。各组大鼠给予相应试剂处理后观察并记录大鼠行为学改变,用免疫组织化学方法、RT-PCR检测大鼠海马内TGF-β3(transforming growth factor-β3)的表达情况及其mRNA变化。结果动物行为学观察显示,NS组无癫痫发作,KA组发作程度为Ⅲ-V级,MT+KA组为0-Ⅲ级;免疫组织化学结果显示,TGF-β3在3组大鼠海马内均有表达,其中KA组、MT+KA组较NS组表达增强,MT+KA组较KA组增强,差异具有显著性意义(P0.05);RT-PCR结果显示,与NS组相比较,KA组、MT+KA组大鼠海马内TGF-β3 mRNA含量均升高;但MT+KA组升高较KA组多,差异具有显著性意义(P0.05)。结论褪黑素能明显改善海人酸诱发的大鼠癫痫,增强海马内TGF-β3的表达,减轻海马神经元损伤,发挥中枢保护作用。