HFCL细胞对U937细胞的诱导分化作用

为了观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对急性单核细胞白血病U937细胞促分化作用,及其对经典诱导分化剂TPA诱导分化作用的影响,先建立U937细胞和HFCL细胞共培养体系,以细胞形态学改变、硝基四氦唑蓝(NBT)、流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原作为诱导分化指标;Western印迹检测P38蛋白的表达变化。结果发现,与HFCL细胞共培养后,U937细胞出现分化成熟的形态学改变,且与HFCL细胞直接接触组的诱导分化作用大于用transwell组。同时发现U937细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增高,S期细胞减少;CD11b、CD13、CD14和CD33表达增高;且NBT阳性细胞增高至46、3％。Western印迹检测结果显示,直接接触组总P38蛋白表达增加。而且HFCL细胞还能增强TPA对U937的诱导分化作用。     

经典饲养层细胞Wnt表达的差异及其对人胚胎干细胞Wnt/β-Catenin信号通路的影响

目的:研究比较三种经典饲养层体系使用的成纤维细胞中Wnt基因的表达,及其对共培养的人胚胎干细胞的影响。方法:PCR验证19种Wnt基因在三种不同来源饲养层细胞中的表达情况,q PCR验证各组共培养人胚胎干细胞的Wnt/β-Catenin信号通路相关基因表达水平,流式检测其在不同密度饲养层条件下的增殖分化情况。结果:在全部19种Wnt基因(Wnt1,Wnt2,Wnt2b,Wnt3,Wnt3a,Wnt4,Wnt5a,Wnt5b,Wnt6,Wnt7a,Wnt7b,Wnt8a,Wnt8b,Wnt9a,Wnt9b,Wnt10a,Wnt10b,Wnt11,Wnt16)的表达检测中,昆明白小鼠来源饲养层细胞表达其中的16种,ICR小鼠来源饲养层细胞表达其中的10种,人成纤维细胞来源饲养层细胞表达其中的10种;增加饲养层细胞密度能够不同程度活化Wnt/β-Catenin信号通路下游基因的表达,并激活人胚胎干细胞中的负反馈机制;高密度小鼠饲养层条件促进人胚胎干细胞的分化,高密度人饲养层条件促进人胚胎干细胞的增殖和分化。结论:不同经典饲养层体系提供的Wnt环境不同,其培养的人胚胎干细胞状态也有差异。     

GATA转录因子家族在细胞命运调控中的作用

在胚胎发育过程中,组织器官的形成依赖于干细胞在空间与时间上正确的定向分化、增殖,以及中间细胞的凋亡.这一细胞命运决定的过程必须被严格精确地调控,从而保证胚胎发育过程中组织器官形成得以顺利地进行.在此过程中,GATA转录因子家族扮演了不可或缺的角色,它们在胚层分化、造血系统和心脏形成、胸腺和肠道发育以及肿瘤发生中都起到了重要的作用.本文结合目前对GATA转录因子家族的研究和本课题组实验结果,介绍其在干细胞分化和维持,以及它们在细胞重编程中所起的作用.     

Toll样受体增强树突状细胞中腺苷受体A2B亚型的表达及功能

树突状细胞(dendritic cell,DC)表面所表达的腺苷受体A2B亚型(ADOR-A2B)可促进DC对辅助性T淋巴细胞(T helper cell,Th)的激活,导致自身免疫性疾病的发生或加重.本文旨在研究作为免疫反应的诱导分子Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是否可调节ADOR-A2B在DC中的表达并籍此影响其功能.体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞(BM-DC),以多种TLRs的配体,Pam3csk4、polyIC、LPS及CpG进行干预.提取细胞总RNA,real-time PCR测定ador-a2a、ador-a2b的表达;放射性配体结合实验测定BM-DC对3H-腺苷结合能力的变化.以LPS及选择性ADOR-A2B激动剂BAY 60-6583协同干预BM-DC,ELISA测定培养基中IL-1、IL-6及IL-12的含量.以干预后的BM-DC刺激naive CD4细胞,ELISA测定培养基中IL-17A、IFNγ的含量,荧光抗体染色及流式细胞仪分析检测CD4细胞的分化.结果显示,TLR-4的配体LPS可显著提高BM-DC中ador-a2b的表达及对腺苷的结合能力.BAY 60-6583与LPS相协同可刺激BM-DC分泌多种致炎因子,并增加其诱导CD4细胞向Th1及Th17分化的能力.由此可见,Toll样受体可上调adora2b在DC中的表达,并可籍此增加DC分泌促炎因子的能力及对CD4细胞的刺激作用.     

CD11b/DNA双参数流式细胞术检测HL-60细胞分化的细胞周期

目的采用双参数流式细胞术研究全反式维甲酸(alltransretinoidacid,ATRA)诱导人类急性早幼粒白血病细胞HL-60细胞分化的细胞周期。方法HL-60细胞经分化诱导剂ATRA(终浓度为1μmol/L)诱导不同时间点后,利用CD11b/DNA双参数流式细胞术同时检测分化细胞表面抗原CD11b的表达及分化细胞DNA含量。结果HL-60细胞经ATRA诱导后,细胞表面分化抗原CD11b表达明显升高,细胞阻滞于G0/G1期,且CD11b阳性细胞主要位于G0/G1期。结论CD11b/DNA双参数流式细胞术能简便,快速,直观地检测细胞分化的细胞周期。     

MicroRNA-449a/b抑制人结肠癌细胞内Fra-1的表达

MicroRNAs (miRNAs) 是一类长度约为22 nt的非编码的调控性小RNA,它们在诸多的生命活动中发挥重要作用,如参与调控细胞的增殖、分化、凋亡以及肿瘤的发生发展. MicroRNA-449a/b (miR 449a/b) 是脊椎动物中进化保守的miRNA,作为抑癌基因,参与了许多癌症的发生过程,但其在结肠癌中的作用尚不清楚. 本文利用实时荧光定量技术研究了miR-449a/b在结肠癌组织中的表达. 利用双荧光素酶报告基因检测系统及Western印迹鉴定miR-449a/b的靶基因. 应用MTS法和Transwell分别检测miR-449a/b对结肠癌细胞增殖和迁移的影响. 检测组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA) 对结肠癌细胞中miR-449a/b表达的影响. 研究结果表明：与正常结肠组织相比,miR-449a/b在结肠癌组织中低表达;miR 449a/b能够结合到FRA-1 mRNA 3′-非翻译区 (3′-untranslated region, 3′-UTR),从而抑制结肠癌细胞HCT116内源Fra 1的表达;外源转染miR-449a/b明显抑制结肠癌细胞HCT116的增殖和迁移;并且TSA处理能够诱导结肠癌细胞HCT116中miR-449a/b的表达. 以上结果提示: miR-449a/b可能通过抑制靶基因Fra-1的表达,进而抑制结肠癌细胞的增殖和迁移．     

MiR-196a促进人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299侵袭转移的研究

目的:非小细胞肺癌发生、发展的分子机制仍是目前研究的热点与难点,新近研究表明microRNA在肿瘤的发展过程中起着重要的作用.本研究旨在探讨miR-196a在人非小细胞肺癌组织及细胞系中的表达水平,以及抑制miR-196a对非小细胞肺癌细胞侵袭转移能力的影响.方法:通过real-time PCR技术检测人非小细胞肺癌及细胞系中miR-196a的表达水平,通过转染miR-196a inhibitors抑制miR-196a的表达水平,并通过定量PCR检测转染效率.利用transwell实验检测下调miR-196a对NCI-H1299细胞的迁移、侵袭能力的影响.结果:相对于正常肺组织及细胞,在非小细胞肺癌组织和细胞中miR-196a的表达水平出现了显著的上调,NCI-H1299细胞中转染miR-196a inhibitors能显著抑制miR-196a的表达水平且抑制miR-196a的表达能降低NCI-H1299细胞的迁移、侵袭能力.结论:定量PCR结果显示miR-196a在非小细胞肺癌组织及细胞中表达显著上调,而封闭其表达能影响非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭功能,提示miR-196a的表达上调可能在非小细胞肺癌的发生、发展中起着关键的作用,并有可能作为将来非小细胞肺癌诊断、预后的分子靶标.     

大鼠肝脏前体细胞--小圆细胞的分离与特性的初步研究

通过与大鼠肝卵圆细胞的对比,对肝脏中一种新的前体细胞--小圆细胞进行分离和初步特性分析.以分步消化法制备小圆细胞,MTI法观察其增殖特点,以白蛋白、细胞角蛋白19、甲胎蛋白为标志物,应用免疫细胞化学染色的方法,对其进行鉴定.同时用DMSO刺激小圆细胞分化,检测分化结果,并与卵圆细胞加以比较.结果显示,小圆细胞增殖不明显.小圆细胞与卵圆细胞均表达白蛋白和角蛋白19.DMSO刺激后小圆细胞向卵圆细胞分化,分化前细胞AFP呈阳性,分化后细胞形状、标志物表达与卵圆细胞一致.本实验提示,小圆细胞很可能是早于卵圆细胞的一种肝脏前体细胞.     

Toll样受体调节树突状细胞中腺苷受体A2B亚型的表达及功能

树突状细胞（dendritic cell,DC）表面所表达的腺苷受体A2B亚型（ADOR-A2B）可促进DC对辅助性T淋巴细胞（T helper cell,Th）的激活,导致自身免疫性疾病的发生或加重. 本文旨在研究作为免疫反应的诱导分子Toll样受体（Toll-like receptors, TLRs）是否可调节ADOR-A2B在DC中的表达并籍此影响其功能. 体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞（BM-DC）,以多种TLRs的配体,Pam3csk4、polyIC、LPS及CpG进行干预. 提取细胞总RNA,real-time PCR测定ador-a2a、ador-a2b的表达;放射性配体结合实验测定BM-DC对3H 腺苷结合能力的变化.以LPS及选择性ADOR-A2B激动剂BAY 60-6583协同干预BM-DC,ELISA测定培养基中IL-1、IL-6及IL-12的含量. 以干预后的BM DC刺激naive CD4细胞,ELISA测定培养基中IL-17A、IFNγ的含量,荧光抗体染色及流式细胞仪分析检测CD4细胞的分化. 结果显示, TLR 4的配体LPS可显著提高BM DC中ador-a2b的表达及对腺苷的结合能力. BAY 60-6583与LPS相协同可刺激BM DC分泌多种致炎因子,并增加其诱导CD4细胞向Th1及Th17分化的能力. 由此可见,Toll样受体可上调ador-a2b在DC中的表达,并可籍此增加DC分泌促炎因子的能力及对CD4细胞的刺激作用.     

低氧对NG108—15细胞生长及分化的影响

神经母细胞瘤和神经胶质瘤细胞融合的克隆细胞系ＮＧ１０８－１５细胞在含分化剂双于基环化单磷酸腺苷的培养液培养后分化,成为具神经细胞特征的细胞。本实验利用四唑盐微量比色法,并结合焦油紫染色,测定和观察细胞的生长及分化状况,研究了低氧（２％Ｏ２＋９３％Ｎ２＋５％ＣＯ２）对未分化的,分化中的和已分化完成的ＮＧ１０８－１５细胞的影响。获得的主要结果是：低氧明显降低未分化细胞增殖和存活率,使分化完成的影响大量     

BPOZ基因纯合缺失ES细胞系的建立及其生长和分化研究

研究BPOZ基因缺失对细胞生长和分化的影响.以高浓度的G418筛选BPOZ基因杂合缺失型ES细胞,PCR鉴定抗高浓度G418细胞克隆基因型;半定量RTPCR分析3种基因型ES细胞BPOZ基因的表达情况,分析3种基因型ES细胞Oct34基因的表达以明确ES细胞分化状态.利用3种基因型ES细胞进行细胞生长曲线和3H胸嘧啶核苷参入实验比较其生长速度和增殖能力.以裸鼠荷瘤实验和类胚体形成实验比较BPOZ基因纯合缺失型ES细胞与野生型ES细胞生长分化能力.结果表明,筛选获得两个BPOZ基因剔除的纯合ES细胞克隆;筛选得到的纯合ES细胞中BPOZ基因表达完全缺失,细胞处未分化状态.与野生型ES细胞相比,BPOZ基因纯合缺失型ES细胞生长受抑,增殖能力减弱.BPOZ基因纯合缺失型ES细胞可分化形成类胚体和具备来自3个不同胚层的细胞和组织的畸胎瘤.BPOZ基因剔除使ES细胞生长受抑,对ES细胞分化发育没有明显影响.     

小鼠ES细胞种系嵌合体的获得

种系嵌合体的获得是实现ＥＳ细胞介导的转基因途径的决定步骤,ＥＳ细胞种系分化能力的保持是决定种系嵌合的前提条件,而事体的主种系嵌合体的获得则是判定ＥＳ细胞系是否具有种系分化能力的唯一方法,为考察本室新近建立的３种小鼠ＥＳ细胞系ＭＥＳＰＵ２１．ＭＥＳＰＵ２２和ＭＥＳＰＵ２９的种系分化能力,选用近交系Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ及远交系ＫＭＷ和ＩＣＲ为受体胚胎提供者,分别通过囊胚注射法和８细胞期桑椹胚注射法进行了嵌     

细胞壁与细胞的发育

细胞壁除了起着机械支持、参与物质运输和防御反应等功能外,与细胞的发育密切相关。它们可作为信号分子,促进植物细胞的分裂增殖,决定细胞的分化方向,参与细胞识别过程等。概述了近年来细胞壁调节细胞发育的新进展。     

决定,分化与细胞间相互作用

细胞的“决定”和“分化”是胚胎发育早期的重要事件,它们是两个既有密切联系而又不应混淆的过程。“决定”指的是胚胎细胞发育命运逐渐被局限到某一方面的过程,也就是获得向某一方面发育的能力,但是还未显示出应有的形态或明显的生化变化的过程。“分化”是逐渐显示这些变化的过程是某一基因在一定时间和一定部位的表达,例如红细胞产生出其特有的     

干细胞在细胞移植法治疗心肌损伤中的应用

干细胞是指同时具有自我更新和产生分化细胞的增殖性细胞.干细胞具有分化成多种机体组织细胞,包括心肌细胞的潜能.把胚胎干细胞和成熟组织干细胞分化成心肌细胞的体内和体外实验,以及把这些分化出的心肌细胞用于细胞移植来治疗心肌损伤的可能性加以总结.虽然干细胞用于治疗心肌损伤的细胞移植疗法具有广阔的前景,但在临床应用方面仍有很多问题尚待解决.     

小鼠腹水型肝癌细胞对竹红菌乙素的摄取和滞留

采用 SDS 胶束增溶法较详细地研究了小鼠腹水型肝癌细胞对竹红菌乙素的摄取和滞留过程.从实验结果表明:a.细胞摄取乙素与弗伦德里希吸附等温式符合较好,细胞的饱和吸附量为每个细胞吸附1.23×10⁸乙素分子.b.摄取速度很快,37℃下3min 即可达到饱和.c.被细胞摄取的乙素较难重新释放到溶液,而且未发生明显代谢变化.d.血清可携带乙素在细胞间传递.e.乙素趋向于进入细胞膜双分子层的深处.还结合实验结果对所采用的 SDS 胶束增溶法进行了评述.     

多表位肽抗原诱导特异性CTL抗慢性髓性白血病细胞的体外实验研究

目的：在应用基因工程技术人工表达获得多表位BCR-ABL融合蛋白的基础上,对该融合抗原在体外诱导对自血病细胞的特异性杀伤效应进行检测,探索慢性髓性自血病（CML）免疫治疗的新途径。方法：从外周血单个核细胞培养树突细胞（DC）,以BCR-ABL融合抗原脉冲刺激DC,诱导特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）产生;MTT法检测CTL对白血病靶细胞的特异性杀伤活性。结果：以BCR-ABL融合抗原刺激产生的CTL能特异性抑制b3a2＋的靶细胞生长,包括K562细胞（P〈0．01）和HIJA-A2＋／b3a2＋的CML原代细胞（P〈0．05）,而对HIA-A2-或b2a2＋靶细胞无明显抑制作用。结论：设计表达的多表位BCR-ABL融合抗原能在体外诱导特异性抗CML免疫反应,抑制b3a2＋自血病细胞生长,有望为进一步的体内实验奠定基础。     

Mir-18b对滋养细胞HTR-8细胞功能的影响

目的:通过研究mir-18b对滋养细胞HTR-8增殖、凋亡和凋亡相关蛋白的影响,了解mir-18b对人滋养细胞功能的调控作用,进一步明确mir-18b在子痫前期发生发展过程中的作用.方法:实验组通过化学方法合成mir-18b inhibitor,用脂质体2000包裹mir-18b inhibitor转入HTR-8细胞中,空白转染组为空白对照组.用Realtime-RT-PCR检测mir-18bmRNA水平的表达.应用流式细胞术检测细胞凋亡和增殖周期的变化.Western Blot检测P53、Bcl-2凋亡蛋白的表达.结果:Realtime-RT-PCR结果显示转染mir-18b inhibitor后mir-18b表达量与空白对照组相比表达量明显降低;细胞周期检测两组之间无明显差异;与空白对照组相比mir-18b inhibitor组细胞凋亡率增加三倍;Western Blot检测结果显示:转染了mir-18b inhibitor后P53的表达量增加,Bcl-2表达量减少.结论:研究结果显示,转染mir-18b inhibitor后细胞的凋亡率升高,P53表达量增加,Bcl-2的表达量减少.说明mir-18binhibitor可能通过调控P53与Bcl-2的表达增强了HTR-8细胞的凋亡能力.为研究PE的发病机理提供新的依据和线索.     

角质细胞生长因子-2研究进展

角质细胞生长因子 2 (KGF 2 )也叫成纤维细胞生长因子 10 (FGF 10 ) ,是成纤维细胞生长因子家族的一员 .能特异性促进上皮细胞的增殖、分化和迁移 ,对脊椎动物多种组织和器官的发育起重要调控作用 ,对临床上多种疾病的治疗也有很好的应用前景 .1　KGF 2与受体KGF 2有两种细胞膜表面受体 :FGFR1Ⅲb和FGFR2Ⅲb .KGF 2与FGFR2Ⅲb的亲和力很高 ,而与FGFR1Ⅲb的亲和力很低 ,只有在高浓度KGF 2存在时才与FGFR1Ⅲb结合 .KGF 2与受体结合后 ,促使受体胞内的C端酪氨酸残基磷酸化 ,磷酸化的受体具有了酪氨酸蛋白激酶活性 ,并与一系…     

果蝇发育中细胞决定和分化与基因表达环境

胚胎发育是个程序化的,复杂而有趣的生命现象。在胚胎发育中,不同细胞的分化和其 功能由基因决定,受到核内遗传物质的控制。而细胞的决定和分化则是在不同的细胞质对细胞核的不断作用下,才能逐步进行。核质之间的相互作用先建立特定的基因表达状态,从而选择性表达发育调控基因或分化基因。发育调控基因产物一旦进入胞质,就可改变原来的基因表达环境,使细胞核进入新的基因表达状态,选择表达新的发育调控基因。如果新的发育调控基因的产物再影响细胞核,改变原来的基因表达状态,其它的发育调控基因的表达就可使胚胎细胞进一步分化。在发育过程中,细胞质和细胞核的这个相互作用不断进行,使控制发育程序的不同基因群在特定的时空中表达,受精卵分裂产生的子细胞才能不断决定和逐步分化,最后形成组成个体所必须的各种细胞类型。