云南地区鸭源沙门菌的分离鉴定及耐药性和毒力基因分析

【背景】沙门菌是一种重要的食源性人兽共患病原菌,可引起多种食源性疾病。【目的】了解云南地区鸭源沙门菌病的流行现状、耐药现象及毒力基因携带等基本情况。【方法】无菌采集云南各地区病死鸭肝脏样品169份进行沙门菌分离,对分离株进行血清分型鉴定、药敏及相关耐药基因、毒力基因筛查。【结果】分离到鸭源沙门菌48株,分离率为28.40%,鉴定出3种血清型,其中肠炎沙门菌为优势血清型。分离株对青霉素G、林可霉素、克林霉素和利福平的耐药率达100%,每株菌至少对3类6种及以上的抗生素耐药,单株最高可耐14种,产生了22种耐药谱型。共检出耐药基因5种,bla_TEM和tetB检出率分别为27.08%和22.92%,tetA、sul2和EBC的检出率较低。毒力基因共检出10种,其中,SPI-1(avrA)、SPI-3(mgtC)、SPI-4(siiD)、SPI-5(sopB)和bcfC检出率均高达100%,SPI-2(ssaQ)、spvB、spvC、pefA和stn的检出率均达60%以上,cdtB未检出。【结论】云南地区鸭源沙门菌主要流行血清型为肠炎沙门菌,耐药性及多重耐药情况严重,耐药机制复杂,耐药基因与耐药表型符合率低,毒力基因检出率较高。研究结果可为云南地区鸭群沙门菌病的防控和净化提供参考。     

圈养大熊猫肠道微生物分离、鉴定及细菌耐药性研究

对中国卧龙自然保护区大熊猫研究中心-碧峰峡基地64只大熊猫分别采取粪样,用选择性培养基分离大肠杆菌、沙门氏菌,根据形态特征及16S rDNA序列对菌株进行鉴定;用PDA培养基分离真菌,真菌通用引物ITS4、ITS5进行扩增鉴定。采用K-B法(CLSI)药敏试验测试大肠杆菌和沙门氏菌对18种药敏纸片的耐药性。形态学与rDNA-ITS序列鉴定表明,共分离到真菌19株,鉴定为8个属。分离出大肠杆菌88株,沙门氏菌47株;大肠杆菌对各抗生素的耐药率为0%~35.22%,耐药率为TET(35.22%)、AML(12.50%)、S3(12.50%),共产生17种耐药谱,其中TET、AML-TET谱型占优势;沙门氏菌对各抗生素的耐药率为0%~42.55%,耐药率为TET(42.55%)、AML(40.43%)、S3(38.30%),也产生了17种耐药谱,AML和AML-TET谱型占优势。通过对细菌和真菌的分离鉴定以及细菌的耐药性试验,了解大熊猫肠道微生物与不同个体的关系,为研究大熊猫的营养及消化等奠定基础,对预防和诊断大熊猫肠道疾病,提高大熊猫的存活率提供依据。     

猪肝沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

根据动物产品中沙门菌的分离和耐药性分析,来评估猪肝中沙门菌的危害程度。对猪肝沙门菌采用分离培养,并进行药敏纸片扩散试验法分析,得出猪肝中沙门菌耐药现象严重的结论。从猪肝中所分离出的5株沙门菌都有不同程度的耐药存在,而且多重耐药现象也普遍存在,特别是对庆大霉素、利福平、多粘菌素B等常用药物耐药(耐药率100%),建议近期对猪沙门菌病的治疗用药为阿米卡星、头孢克肟、头胞噻肟。这些提示当用药物进行治疗时,必须在用药前对病原菌进行药敏试验,只有这样才能有针对性地筛选敏感药物,以提高疗效。     

海口市污水处理厂活性污泥中细菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解海口市白沙门污水处理厂活性污泥中细菌抗生素耐性情况,采用平板分离技术分离、纯化细菌,并通过BIOLOG微生物鉴定系统对筛选到的细菌进行鉴定,同时采用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法进行药敏试验并进行抗生素耐性分析。本研究共分离到18株细菌,分属8个属,14个种,其中G+和G-均为9株。抗生素药敏性试验结果表明,所有菌株均耐药,菌株单重耐药率、双重耐药性及多重耐药性分别为50%、38.9%、和11.1%。菌株对9种常用抗生素:头孢他啶、环丙沙星、庆大霉素、链霉素、氨苄西林、红霉素、氯霉素、四环素、卡那霉素的耐药率分别为61.1%、0%、5.6%、16.7%、50%、16.7%、11.1%、0%、5.6%。综上所述,白沙门污水处理厂活性污泥中的细菌耐药性比较严重,存在潜在的环境生态和人畜健康风险。本研究揭示了当前白沙门污水处理厂活性污泥中细菌对常见抗生素耐药的严重现状,为建议污水处理厂加强出水及污泥中抗生素耐药性及耐药基因的检测并评估其生态影响提供基础,避免出水及污泥中的抗性菌和耐药基因可能带来的风险问题。     

青海湖斑头雁粪便细菌分离鉴定与耐药性分析

为了解斑头雁(Anser indicus)粪便中携带细菌多样性及其耐药情况,对青海湖斑头雁粪便细菌进行分离培养、生化鉴定、16S r RNA基因PCR扩增和序列分析,并进行细菌耐药性试验。结果显示:从30份斑头雁粪便中共分离到123株细菌,可分为10类细菌,分别从每类细菌中挑出一株代表性菌株进行鉴定,鉴定结果显示这10株细菌分别为大肠埃希菌(Escherichia coli)、水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)、蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sublitis)、柠檬节杆菌(Arthrobacter citreus)、腐败希瓦氏菌(Shewanella pulrefaciens)、河生肠杆菌(Enterobacter amnigenus)、成团泛菌(Pantoea agglomerans)、杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)和产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。选取氨苄西林、哌拉西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢唑林、头孢他啶、氨曲南、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、四环素、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星药敏纸片,对分离菌株进行耐药性分析,发现水生拉恩菌、杀鲑气单胞菌和成团泛菌表现为多重耐药性;其他细菌对氨苄西林和四环素有一定的耐药性,对其余受试药物都有不同程度的敏感性。野鸟携带耐药性的条件致病菌,可能会对野生动物健康造成威胁,本研究对斑头雁粪便中携带的条件致病菌及其耐药性进行探究,以期为野鸟携带细菌的耐药机制提供研究理论依据,同时也对野生动物疫病的监测与防控有重要意义。     

一株铜绿假单胞菌的分离鉴定与耐药性分析

目的:对矽肺患者痰标本中分离到的菌株NY-7进行分离鉴定。方法:将菌株NY-7经形态观察,生化反应,16s rDNA鉴定后分析其耐药性。结果:经生化鉴定及16s rDNA鉴定所分离细菌NY-7为一株铜绿假单胞菌。结论:对病原菌进行有效鉴定,并分析其耐药性,对于临床防治疾病具有重要作用。     

长春地区鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及毒力分析

【背景】奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是一种机会致病菌,广泛存在于周围环境中,常导致动物和人类感染。【目的】探究吉林省长春地区某养鸡场病鸡死亡原因,为疾病防控提供参考。【方法】从病死青年鸡脏器分离到病原菌TSA-1,通过革兰氏染色、生化试验和16S rRNA基因序列鉴定,并进行药敏试验、毒力基因检测、细胞毒性和黏附性试验、大蜡螟攻毒试验研究。【结果】分离株TSA-1在镜下呈短杆状、球状的革兰氏阴性菌,生化特性与奇异变形杆菌相一致,16S rRNA基因序列比对显示与奇异变形杆菌相似度为100%;药敏试验结果显示分离株TSA-1对氨苄西林、四环素、卡那霉素、头孢唑林等14种药物耐药,对环丙沙星、恩诺沙星等7种药物敏感;分离株还具有较强的生物被膜形成能力,携带ireA、ucaA、pmfA、atfA、ptA、zapA、hpmA和flhC这8种毒力基因,并对巨噬细胞RAW264.7表现出细胞毒性,而且对Caco-2细胞具有很强的黏附作用;同时对大蜡螟幼虫表现出比禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coliO78,APEC-O78)更强的致死作用。【结论】从病死鸡脏器分离得到的奇异变形杆菌TSA-1具有多重耐药性,并携带多种毒力基因,对细胞和大蜡螟幼虫表现出强毒性作用,说明该菌是引起病鸡死亡的主要致病菌之一,应引起重视。     

一株花生根际铁载体产生菌的分离鉴定及耐药性分析

目的：从花生根际筛选铁载体产生能力较强的菌株,对其进行鉴定及耐药性分析。方法：用梯度稀释法从花生根际中分离出细菌,在刃天青（CAS）检测平板上依显色圈的大小从中筛选出一株铁载体产生能力较强的菌,并对其进行生理生化鉴定和16S rDNA序列分析,用抗生素梯度平板检测其对9种常见抗生素的抗性。结果：筛选出一株产铁载体的菌株D15,13项生理生化指标除甲基红试验呈阳性外,其他均与恶臭假单胞菌相同;其16S rDNA与恶臭假单胞菌的同源性为100%;该菌对氨苄青霉素、氯霉素、利福平、红霉素、新霉素、链霉素、四环素都有不同程度的的抗性,对卡那霉素和庆大霉素表现较强的敏感性。结论：获得铁载体产生菌D15,经鉴定为恶臭假单胞菌,该菌耐药性符合用转座子诱变法研究铁载体合成的相关基因的条件。     

鹌鹑源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

【背景】在鹌鹑养殖过程中,抗菌药物和消毒剂的不规范使用加剧了耐药菌株在动物、场所和食品之间的相互传播,因此,掌握致病菌株在养殖动物中的耐药状况至关重要。【目的】检测北京周边地区鹌鹑蛋源致病菌株的耐药特征和耐药基因的流行情况。【方法】在天津市武清区部分鹌鹑养殖场采集鹌鹑泄殖腔粪便、鹌鹑蛋表、养殖环境和鹌鹑饮水的样品,通过细菌分离培养、菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定、血清分型、沙门氏菌inv A基因序列测定等方法对分离菌株进行鉴定。同时进行小鼠攻毒试验,测定小鼠半数致死量(median lethal dose, LD50)。再通过药敏试验和PCR方法对分离菌的耐药表型、耐药基因及毒力基因进行检测。【结果】分离菌株菌落颜色、镜检形态和生化试验结果符合沙门氏菌特性,沙门氏菌inv A基因序列测定与鼠伤寒沙门氏菌参考株相似度为99.44%,鉴定为鼠伤寒沙门氏菌,血清型为1,4,[5],[12]:i:l,2。该菌株对小鼠有致病作用,小鼠LD50为2.10×107 CFU/mL;药敏试验结果显示该菌株对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻呋、链霉素、磺胺甲啞唑、磺胺异啞唑、诺氟沙星、环丙沙星表现耐...     

大蒜内生细菌的分离及拮抗菌筛选与鉴定

利用常规分离方法对大蒜鳞茎进行内生细菌的分离,采用对峙法和平板涂布法对分离的内生菌进行拮抗试验研究,并对菌株DSP6进行16S rDNA全序列鉴定。结果表明:分离得到19株内生细菌,其中10株菌对2种以上植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占分离菌总数的52.6%,DSN7对番茄早疫病的抑菌圈半径最大,为13mm;17株菌对5种病原细菌中至少1种有抑制作用,占分离菌总数的89.5%,其中菌株DSP3对大肠杆菌的抑菌圈半径最大,达到10 mm;菌株DSP6对供试的9种病原菌有较强的抑菌作用,且抑菌圈平均半径最大,为6.88mm;16S rDNA全序列鉴定显示,菌株DSP6与芽孢杆菌属Bacillus axarquiensis相似性为100%,表明菌株DSP6为Bacillus axarquiensis。     

一株水稻纹枯菌拮抗细菌的分离与鉴定

【目的】从土壤中分离并鉴定水稻纹枯菌拮抗细菌,测定其体外抑菌和温室防治效果。【方法】采用系列稀释法和平板对峙法筛选拮抗细菌,基于形态、生理特征及16S rDNA序列鉴定其分类地位,采用种子细菌化温室试验测定其防效。【结果】从蔬菜根际土壤中筛选出一株纹枯菌拮抗细菌,命名为kwkjT4。菌株具有明显的体外抑菌活性,对水稻纹枯病的温室防效与井冈霉素相当,初步鉴定为假紫色色杆菌(Chromobacterium pseudoviolaceum)。最适生长条件为pH 7.0,温度32°C,培养时间为36 h;抑菌活性物质产生的最适培养条件为pH 6.0,温度28°C,培养时间为48 h;表明两者并不一致。【结论】kwkjT4菌株在水稻纹枯病的生物防治中具有潜在的应用价值。这是C.pseudoviolaceum拮抗纹枯菌的首次报道。     

鲫源迟缓爱德华氏菌的分离鉴定及其毒力基因的检测

【目的】探明上海某养殖场的异育银鲫(Carassius auratus gibelio)发生死亡的病因,研究致病菌分类地位和毒力基因携带情况。【方法】通过病原菌的筛查和回感试验,确定发病原因,对16S rRNA基因、gyrB和rpoB管家基因测序,建立病原菌系统进化树,结合API-32E细菌鉴定系统对菌株的生理生化进行鉴定,综合判定致病菌的种类及其分类地位;根据已报道的7个毒力基因fimA、citC、gadB、mukF、katB、esrB和sodB序列,设计引物进行PCR扩增,研究病原菌毒力基因携带情况。【结果】致病菌GY15是导致异育银鲫发病的原因,GY15的16S rRNA、gyrB和rpoB基因与已报道的迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)相似性在99%以上,构建系统进化树和API鉴定确定该菌株为E.tarda,腹腔注射回感可导致异育银鲫死亡,半致死浓度(LD_(50))为4.26×105 CFU/m L;已报道的7种毒力基因在该致病菌中均能被检测到;药敏试验结果显示,该菌对恩诺沙星、氟苯尼考和氧氟沙星等15种药物敏感,对新霉素、四环素和复方新诺明等18种药物表现为耐药。【结论】首次报道E.tarda可感染异育银鲫,它对异育银鲫的养殖造成威胁。     

陈皮中微生物的分离与鉴定

摘要:【目的】陈皮保存的时间越长即陈皮越老其药用功效越显著。本工作拟从7年陈皮中分离有益微生物,并制成相应的微生物产品,应用于高品质耐储存陈皮的生产。【方法】以7年陈皮为材料,用4 种培养基分离微生物;采用SDS-PAGE全细胞蛋白电泳和IS-PCR指纹图谱对所分离到的微生物进行聚类分析,再选取每个类群的代表菌株进行分子系统发育分析及生理生化鉴定。【结果】从7年陈皮中分离、纯化23株细菌,但没有分离到真菌与放线菌。23株细菌聚为4个类群,其中类群I属于芽孢杆菌属(Bacillus),类群II、类群III、类群IV 属于类芽孢杆菌属(Paenibacillus)。【结论】4个类群中只有类群II代表菌株cp20具有明显的柠檬酸盐利用能力,在陈皮的试验制作过程中具有防腐耐储存作用。     

猪源致病性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性分析

目的鉴定引起猪渗出性皮炎的病原,并分析猪源致病性金黄色葡萄球菌的耐药性,为临床用药提供依据。方法采集患渗出性皮炎的仔猪标本进行细菌分离培养,联合应用形态学检查、生理生化试验和PCR方法鉴定分离菌株,并进行致病性和药物敏感性试验。结果先后从病猪标本中分离鉴定获得PSA1、PSA2、PSA3和PSA4四株金黄色葡萄球菌,其中PSA1和PSA3分离株的致病性较强。药敏试验结果显示PSA1、PSA2和PSA3分离株为MRSA菌株,PSA4分离株为MSSA菌株。MRSA菌株对14种抗菌药物均呈现不同程度的耐药,尤其是对青霉素、链霉素、四环素、强力霉素、环丙沙星和氧氟沙星等6种抗菌药物的耐药率达100%。所有分离株对万古霉素与替考拉宁均敏感。结论合肥地区猪渗出性表皮炎的病原为金黄色葡萄球菌。猪源致病性金黄色葡萄球菌合肥分离株具有多重耐药性,治疗猪渗出性皮炎应建立在体外药敏试验的基础上,有针对性选择抗菌药物。     

鳜源致病性荧光假单菌的分离与鉴定

为确定导致鳜（Siniperca chuatsi）细菌性感染死亡的病原,从患病濒死的鳜肝中分离出一株优势菌B01,经人工回感实验确定其分离菌的致病性,并利用VITEK-2全自动微生物鉴定仪及16S rRNA序列分析对纯培养细菌进行鉴定。此外,对分离的菌株进行药敏实验。研究结果表明,菌株B01对鳜鱼具有致病性。经VITEK-2全自动微生物鉴定仪鉴定菌株B01为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）（表1）,并在紫外灯可以产生荧光（图1）。进一步的16S rRNA基因序列和系统发育树分析表明,该菌与荧光假单胞菌同源性达到了97%以上,并和（图2）。药物敏感性实验结果显示,该分离株对恩诺沙星、诺氟沙星、链霉素和四环素药物等6种药物高度敏感（表2）。     

水性涂料腐败微生物的细菌群落及耐药性分析

为设计更合理的防腐方案,首先通过菌落总数检测方法检测统计某涂料生产企业三年来的产品及原材料送样的微生物情况,了解变质产品微生物污染状况;通过高通量测序技术分析典型变质样微生物的群落组成和丰度;使用高效液相色谱法分析产品的防腐剂残留情况;再采用最低抑菌浓度实验检测变质菌的耐药性,最后通过防腐功效测试检测环境风险菌对正常生产样的威胁。该企业三年送样总量682个,有菌样87个,其中三年的染菌率分别为11. 71%、12. 7%和13. 28%,腐败变质产品微生物菌落总数数量级已达到10~6CFU/g以上,以变形菌、厚壁菌和拟杆菌为优势菌群,其他细菌为非优势菌群。变质样防腐剂已被降解,分离的变质菌对卡松类防腐剂产生较明显耐药性,对BIT,布罗波尔类防腐剂没有产生耐药性,正常生产的样品能通过防腐功效测试。对于变质菌的耐药性应采用复防腐配体系如BIT、BP类等更有效的防腐剂。至于对卡松类防腐剂产生耐药性的部分变质菌,应筛选更有效的防腐体系。此外要加强原材料和生产环境和工艺流程的清洁控制,以抵御环境污染风险。     

一株杀蛆细菌的分离与鉴定

蝇属昆虫纲,双翅目,能传播霍乱、伤寒、结核及痢疾等多种疾病的病原菌,种类较多,生长很快,分布广泛,危害严重。化学药剂灭蝇,不仅杀虫效果差,而且环境污染严重。生物防治蝇蛆,不仅能避免污染,而且可在蝇蛆中间不断传染,药效较长。但是,目前在国内外尚未见到有这方面的研究报告,仅见到刘世贵等利用类产碱假单胞菌防治草地蝗虫的报道。     

一株产类胡萝卜素细菌的分离与鉴定

从武汉东湖发生水华的水样中分离到一株产橙黄色色素的菌株OB 2 ,经可见光光谱扫描分析 ,证明该菌株所产色素为类胡萝卜素。为了确定OB 2的分类学地位 ,PCR扩增后测定其 16SrRNA基因序列 ,在GenBank中进行同源性比较 ,并与一些相关细菌构建系统发育树。综合分析后将菌株OB 2鉴定为Microbacteriumkitamiense。     

雏鸡源致病性粪肠球菌的分离鉴定及其耐药性分析

[背景]粪肠球菌(Enterococcus faecalis)是人和动物肠道正常菌群之一,也是一种条件性致病菌.近年来,粪肠球菌引起人和动物感染的报道越来越多.[目的]探明引起某养鸡场雏鸡发病死亡的病原及其致病性和有效治疗药物.[方法]结合临床症状和病理剖检,开展病原菌分离、生理生化特性检测和16S rRNA基因序列分...     

一株多重耐药鳗源肺炎克雷伯菌的分离鉴定

从患病花鳗鲡(Anguilla marmorata)的肝脏分离纯化到一株革兰氏阴性杆菌HM2。人工感染试验结果显示, HM2具有较强的致病力, 96h的LD50为9.98107 CFU/mL。经细菌培养特性、生理生化特性和ATB Expression半自动细菌鉴定仪鉴定, 结果符合肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的特征。以细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增, 获得大小为1393 bp的部分16S rRNA基因序列(Genbank登录号为JX282908), 将所测序列与GenBank中的序列进行BLAST比对并构建系统进化树, 结果表明其与肺炎克雷伯菌的同源性最高(100%), 在系统发育树上与肺炎克雷伯菌聚为一簇, 进一步确定菌株HM2为肺炎克雷伯菌。药物敏感性试验显示, HM2对亚胺培南、链霉素、阿米卡星3种药物敏感, 对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、头孢曲松、头孢噻肟、头孢西丁、复合磺胺、磺胺甲基异恶唑/甲氧苄啶、利福平、萘啶酸、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、呋喃妥因、四环素、多西环素、氯霉素17种药物具有耐药性。研究结果为指导临床合理用药提供了科学依据。