高粱根质膜K~＋通道蛋白的溶解及重组

用水两相法纯化的高粱根质膜嵌入水平脂双层膜,可以测得离子通道电流。记录了典型的单离子通道。ＴｒｉｔｏｎＸ－１００使质膜蛋白溶解,除去不溶物后,加入Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ－２使膜蛋白重组为蛋白脂质体。将蛋白脂质体嵌入脂双层,测定了脂双层上Ｋ＾＋通道电流逐渐出现的过程,该典型的通道电流记录的通道电导为１１２ｐＳ。通过改变前后槽ＫＣｌ浓度,测定蛋白脂质体嵌入脂双层后的稳态电流一电压关系。挖计算稳态逆     

盐胁迫对高粱根质膜离子通道通透性的影响

用１００ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ、２００ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ、３００ ｍ ｍ ｏｌ／ＬＮａＣｌ依次处理萌发后３ ｄ 的高粱（Ｓｏｒｇｈｕｍｖｕｌｇａｒｅ Ｐｅｒｓ．）幼苗，分离纯化根质膜。将质膜嵌入预先涂制好的平面脂双层，然后用电学方法测定该脂双层的离子选择通透性。膜的两测分别加入ＮａＣｌ和ＫＣｌ，在电压钳位下测定不同膜电位时的膜电流，通过ＧＨＫ 电压等式计算膜的离子选择通透性。结果表明质膜的离子选择通透性在盐胁迫下发生显著变化，对照的Ｋ＋ 、Ｎａ＋ 通透比（ＰＫ∶ＰＮａ）＝ ３．５，处理后ＰＫ∶ＰＮａ＝ １．５。讨论了这一变化的含义     

菠菜叶片类囊体膜上K^＋通道的直接测定及其离子选择性

将经蔗糖密度梯度离心纯化的菠菜（Ｓｐｉｎａｃｅａ ｏｌｅｒａｃｅａ Ｌ．） 叶片类囊体膜微囊泡嵌入平面脂双层（ｐｌａｎａｒ ｌｉｐｉｄ ｂｉｌａｙｅｒｓ）,至少检测到一种Ｋ＋ 单通道信号, 其电导约为５５ ｐＳ,具有电压依赖特性,对ＴＥＡ（ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌａｍ ｍ ｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）敏感,这一通道的ＰＫ＋ ／ＰＣｌ－ 通透比约为１４．９。离子通道的选择性可以在对称的离子条件下测定不同离子的电导,或者在双离子条件下测定反转电位确定,其对单价阳离子的选择顺序为：Ｋ＋ ＞ Ｎａ＋ ＞ Ｌｉ＋ ＞ ＮＨ＋４ ＞ Ｃｓ＋ 。     

新生大鼠大脑皮层神经元胞体ATP激活的离子通道及其特性

用膜片箝技术的细胞贴附式和内面向外式,在机械分离的新生ＳＤ大鼠的大脑皮层神经元上,记录到ＡＴＰ激活的离子通道。此通道的电导为３２ｐＳ,对Ｎａ~＋,Ｋ~＋和Ｃｓ~＋无选择性通透,而对Ｃｌ~－不通透。通道开放时间分布直方图多数需用双指数拟合,少数可用单指数拟合;通道关闭时间分布直方图均需用双指数拟合。通道的平均开放时间和开放概率均不依赖于膜电位;但通道的开放概率随着激动剂ＡＴＰ浓度的增加而增大。当电极内液无ＡＴＰ时,无通道电流。六烃季胶和美加明不能阻断此通道。上述结果表明,新生大鼠的大脑皮层神经元胞体可能存在ＡＴＰ激活的离子通道。     

大脑皮层神经元NMDA受体的单通道特性

本文用膜片箝技术对机械分离培养的大鼠大脑皮层神经元胞体上的ＮＭＤＡ受体的单通道特性进行了研究,实验用细胞贴附和内面向外两种形式记录单离子通道的活动。电极液内含有ＮＭＤＡ或Ｌ－门冬氨酸时,在皮层神经元上常见电导为３５ｐＳ的离子通道。通道对Ｎａ＋,Ｋ＋非选择性通透,对Ｃｌ－不通透,其平均开放时间和开放概率随超极化程度增大而降低。开放、关闭时间及ｂｕｒｓｔ时程的分布直方图均需双指数拟合。Ｍｇ２＋以电压和浓度依赖性的方式减小通道开放时间,ＡＰＶ能阻断通道活动,温度降低使通道开放时间延长及电流幅度减小。本文结果表明大脑皮层神经元上ＮＭＤＡ受体通道活动自身具有电压依赖性,因此提示ＮＭＤＡ受体通道的正常功能活动可能依赖于某些细胞内调控过程的存在。     

血管平滑肌细胞上的自发内向阳离子通道

采用膜片箝技术的细胞贴附式（ｃｅｌ－ａｔａｃｈｅｄ）,在酶法分离的大鼠尾动脉平滑肌细胞上记录到一种自发的内向阳离子通道。结果发现：１、在实验条件下（池子液：Ｋｒｅｂｓ,电极液：高钾）,该通道电导为２６．５±４．１ｐＳ,且具有明显的电压依赖、时间依赖和Ｃａ２＋依赖的特性;２、该电流具有极显著的内向整流特性;３、离子替换实验表明,该通道对Ｎａ＋和Ｋ＋具有很好的通透性,对Ｃｌ－的通透则很差;４、胞外加入４－ＡＰ（２ｍｍｏｌ／Ｌ或５ｍｍｏｌ／Ｌ）,ＢａＣｌ２（１ｍｍｏｌ／Ｌ）和ＣｓＣｌ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）均不能抑制该电流;５、内向阳离子电流可与Ｃａ２＋－激活Ｋ＋电流在同一细胞上交替活动,提示这两种电流可能在调控平滑肌细胞的基本活动方面起关键作用。     

重组于脂双层的人精子质膜Ca2+通道的膜片箝研究

跨膜离子流动在启动配子间的相互作用,如顶体反应过程中有重要作用。．但由于精子太小,无用论细胞内记录或膜片箝技术都难以对哺乳动物精子膜的离子通病进行研究。本工作将通道蛋白重组于脂双层,在电压箝位下记录了人精子膜的Ｃａ＾２＋通道电流。由１２个健康人的精子分离的膜蛋白通过融合重组于脂双层后,在ＣａＣｌ２溶液中（ｃｉｓ５０／／ｔｒａｎｓ １０ｍｍｏｌ／Ｌ）记录到两类单通道活动,它们的平衡电位都接近Ｃａ＾２     

大脑皮层神经元NMDA受全的单通道特性

本文和膜片箝技术对机械分离培养的大鼠大脑皮层神经元胞ＮＭＤＡ受体的单通道特性进行了研究,实验用细胞贴附和内面向外两种形式记录单离子通道的活动。电极液内含有ＮＭＤＡ或Ｌ－门冬氨酸时,在皮层神经元上常见电导为３５ｐＳ的离子通道。通道对Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋非选择必通透,对Ｃｌ＾－不通透,其平均开放时间和开放概率随超极化程度增大而降低。开放、关闭时间及ｂｕｒｓｔ时程的分布直方图均需双指数拟合。Ｍｇ＾２＋以电压     

盐胁迫下Ca^2＋对小麦根无机离子分布和膜脂脂肪酸的影响

用扫描电镜、Ｘ－射线能谱仪和等离子耦合吸收光谱分析发现,培养在含ＮａＣｌ培养液中,小麦根吸收大量Ｎａ＾＋和Ｃｌ＾－,Ｋ＾＋和Ｃａ＾２＋的吸收降低、质膜相对透性提高,Ｋ＾＋,Ｎａ＾＋和Ｃｌ＾－的相对外渗百分率增加,培养在补充ＣａＣｌ２含ＮａＣｌ培养液的,Ｎａ＾＋和Ｃｌ＾－含量明显减低,Ｋ＾＋和Ｃａ＾２＋提高,质膜相对透性下降,Ｋ＾＋,Ｎａ＾＋和Ｃｌ＾－相对外渗百分率减少。由气相色谱分析可知,用含Ｎａ     

海马神经元膜片与细胞分离前后nAChR通道特性的改变

目的和方法：在新生大鼠海马神经元上,用膜片钳技术研究了乙酰胆碱受体单通道特性,离子选择性及细胞内物质对通道活动的影响。结果：该通道对单价阳离子通透,对Ｎａ＾＋和Ｋ＾＋的通透性相近,但不通透Ｃｌ＾－。     

谷氨酸对大鼠海马CA1区神经元的短暂性外向K+电流的影响

为了在离子通道水平探讨谷氨酸对急性分离海马ＣＡ１区神经元的短暂外向Ｋ＋电流的影响。用７～１０ｄ大鼠,以链霉蛋白酶Ｅ酶解加吸管吹打法制备海马ＣＡ１区神经元;利用全细胞膜片箝技术,观察了谷氨酸对海马ＣＡ１区锥体细胞的短暂性Ｋ＋电流的影响。结果观察到谷氨酸对短暂性Ｋ＋电流有明显抑制作用,且呈明显浓度依赖性、时间依赖性和部分电压依赖性。上述结果表明,谷氨酸对Ｋ＋通道的影响在中枢神经系统中具有重要作用。     

小麦根质膜H^＋—ATPase的部分纯化

以小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）根为材料,采用不连续蔗糖密度梯度离心法制备高纯度质膜微囊。质膜经ＴｒｉｔｏｎＸ１００和ＫＣｌ处理后,再用Ｚｗｉｔｅｒｇｅｎｔ３１４增溶Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ,最后用硫酸铵沉淀得到部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ。ＳＤＳＰＡＧＥ结果表明,经过上述步骤纯化,分子量为９４ｋＤ的膜蛋白组分得到富集;与质膜相比,其含量提高１５．７倍。部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ可以水解ＡＴＰ,受Ｋ＋刺激,并被Ｎ,Ｎ′ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｍｉｄｅ（ＤＣＣＤ）抑制;ＡＴＰ水解活力被Ｎａ３ＶＯ４抑制９５％,但不被ＮａＮ３、ＮａＮＯ３和Ｎａ２ＭｏＯ４抑制。     

大鼠胰腺β细胞离子通道的一些特性

实验以单个Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰腺β细胞为对象,用穿孔膜片箝和细胞贴附式记录技术研究ＡＴＰ敏感Ｋ＾＋通道（ＫＡＴＰ）、延迟整流型Ｋ＾＋通道（ＫＤＲ）、Ｃａ＾２＋通道和Ｎａ＾＋通道的有关特性。结果表明：⑴ＫＡＴＰ通道的内流电导约６５ｐＳ,外流电导约３１ｐＳ,反转电位在－６０ｍＶ左右;⑵ＫＤＲ通道在延迟２０ｍｓ后达到最大激活,ＫＤＲ电流约为ＫＡＴＰ的１／３;⑶钙电流在０ｍＶ左右达到４０－６０ｐＡ的峰值,Ｌ     

等渗NaCl和KCl胁迫对高粱幼苗生长和气体交换的影响

本文比较研究了等渗ＮａＣｌ和ＫＣｌ胁迫下,高粱幼苗生长及叶片离子含量、质膜相对透性和有关气体交换参数的变化。结果表明,在低浓度ＮａＣｌ和ＫＣｌ胁迫７天时,高粱生长、含水量和质膜相对透性与对照相比没有明显变化,而净光合速率、蒸腾速率和气孔导度已明显下降,叶肉细胞间隙ＣＯ２浓度明显增加。ＮａＣｌ胁迫下叶片Ｎａ＋含量成倍增加,而Ｋ＋和Ｃａ２＋含量无明显变化。ＫＣｌ胁迫时叶片Ｋ＋含量明显增加,Ｃａ２＋含量明显下降,而Ｎａ＋含量没有明显变化。随着ＮａＣｌ或ＫＣｌ浓度的增加,幼苗生长和叶片含水量明显下降,质膜透性和细胞间隙ＣＯ２浓度明显增加,净光合速率、蒸腾速率和气孔导度进一步下降。ＮａＣｌ胁迫下叶片Ｎａ＋含量进一步增加,Ｋ＋和Ｃａ２＋进一步下降,而ＫＣｌ胁迫下叶片Ｋ＋含量进一步增加,Ｎａ＋和Ｃａ２＋含量进一步下降。ＫＣｌ对高粱生长抑制、质膜透性、Ｃａ２＋含量下降及光合气体交换参数的影响均明显大于等渗的ＮａＣｌ。     

质膜氧化还原系统中的抑制物及其特性

燕麦（Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ）质膜氧化还原系统的酶反应进行一段时间后,酶反应速率逐渐降低到零,加入反应底物ＮＡＤＨ、Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６ 以及质膜（酶）不能使酶反应速率得到恢复,说明酶被抑制． 酶反应的产物可能为ＮＡＤ＋ 、Ｆｅ２＋ 和Ｈ＋ ,加入ＮＡＤ＋ 、Ｋ４Ｆｅ（ＣＮ）６ 和ＨＣｌ不能使酶活力抑制,因此不是产物反馈抑制． 超速离心除去质膜后,发现抑制物存在于反应介质中,这种抑制物的抑制效果随时间延长而降低,所以此抑制物不稳定． 本文首次报道质膜氧化还原系统中存在抑制物     

花生幼苗下胚轴质膜Ca2+-ATP酶及其对低温胁迫的反应

经６％－１２％ＤｅｘｔｒａｎＴ７０密度梯度离心,获得了纯度较高的７ｄ龄花生幼苗下胚轴质膜制剂,质膜Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ在反应系统不存在Ｍｇ＾２＋时,可正常表现水解ＡＴＰ的活性,但此活性明显低于Ｍｇ＾２＋激活的ＡＴＰａｓｅ,Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ不受Ｎａ３ＶＯ４抑制,不被Ｋ＾＋激活,而被Ｃｌ＾－抑制,Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ的最适,ｐＨ不同于Ｍｇ＾２＋激活的ＡＴＰａｓｅ,低温胁迫显著提高质膜Ｃ     

海马脑片缺氧早期腺苷的作用及其机制研究

本实验采用海马脑片细胞外记录技术,观察了缺氧早期突触功能可逆性抑制中腺苷的作用并初步探讨其作用机制。结果发现：海马脑片缺氧早期突触功能出现可逆性抑制,与外源施加高浓度腺苷反应类同。腺苷Ａ１受体拮抗剂ＣＰＴ以及Ｋ＋通道阻断剂４－ＡＰ可阻断这种抑制作用;而ＴＥＡ以及ＡＴＰ敏感Ｋ＋通道阻断剂ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ均未见显著效应。结果提示：缺氧早期突触功能可逆性抑制与内源性腺苷大量释放有关,腺苷通过作用其Ａ１受体,激活４－ＡＰ敏感Ｋ＋通道,从而抑制突触传递,显示其抗缺氧作用。ＡＴＰ敏感性Ｋ＋通道可能不参于这个过程。     

麻醉剂氟烷对心脏毒蕈碱型钾通道的影响

神经递质乙酰胆碱（ＡＣｈ）调节心脏功能最重要的离子通道就暗毒蕈碱型钾通道（ｉＫ,ＡＣｈ）,该通道由ＡＣｈ经鸟苷酸调节蛋白（Ｇ蛋白）的βγ亚单位而激活。本实验彩全细胞膜片箝方法,观察了麻醉药氟烷对豚鼠心房肌细胞ｉＫ,ＡＣｈ的影响。氟烷对ｉＫ,ＡＣｈ电流具抑制效应,灌注之后可使ＡＣｈ激活的ｉＫ,ＡＣｈ速率减慢,峰植下降。但其抑制ｉＫ,ＡＣｈ的程度依激活方式而异：经正常激活途径,即由ＡＣｈ激活毒蕈碱Ｍ样     

平面双层脂膜系统用于植物离子通道研究

平面双层脂膜系统是人工用脂类涂制的脂双层(BLM)结合电测定来模拟生物膜离子通透的系统。在1963年,Mueller和Rudin首先报道将脂类的溶液涂在一个直径很小的孔上时形成了脂双层,且具有和生物膜类似的电学性质,为将模拟膜系统用于生物膜研究奠定了基础。但是到70年代后,才将一些抗生素类的物质嵌合入BLM进行离子通道的研究。将生物膜嵌入BLM则是在70年代后朗的事,但当时没有受到广泛的重视,直到80年代单离子通道记录及膜片钳技术兴起时,人们才又重新将这一技术进行改     

大鼠纹状体神经元中乙酰胆碱激活的离子通道

用膜片钳技术对培养的纹状体神经元膜上的乙酰胆碱激活的离子通道进行了研究。结果表明,单通道电流为内向电流,随着超极化程度增大而增加,随着去极化程度增大而减少;翻转电位为１５．０±６．１ｍＶ,电导为８２．７１±１６．１７ｐＳ;通道的开放时间分布直方图和关闭时间分布直方图均需双指数拟合,开放时间分布直方图的时间常数分别为１．９３ｍｓ和５．７３ｍｓ,关闭时间分布直方图的时间常数则为０．５２８ｍｓ和２．３２ｍｓ;通道的平均开放时间和开放概率均与超极化程度无明显相关关系。由于电极液中含ＡＣｈ和Ｋ￣＋通道阻断剂Ｃｓ￣＋而不含Ｎａ￣＋或Ｃａ￣（２＋）,且浴槽液中含Ｎａ￣＋通道阻断剂河豚毒素,因此可排除内向Ｎａ￣＋流、Ｃａ￣（２＋）流和Ｋ￣＋流,提示内向电流为ＡＣｈ激活的通道电流。