首次发现扶桑绵粉蚧体内存在沃尔巴克氏体

沃尔巴克氏体(Wolbachia)是广泛分布在节肢动物生殖组织中的一类细胞质遗传的细菌，它们可以调控宿主的生殖活动。利用沃尔巴克氏体wsp基因的1对通用引物(81F，691R)从新入侵我国的扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsis Tinsley雌成虫的总DNA中扩增到1个550 bp左右的片段，并克隆得到了Wolbachia的wsp基因序列，首次发现了沃尔巴克氏体对扶桑绵粉蚧的感染现象。     

沃尔巴克氏体在中国三种稻飞虱中的感染

用PCR方法检测了采集于不同地域稻田的3种稻飞虱共生菌沃尔巴克氏体(Wolbachia)的感染,发现灰飞虱Laodelphax striatellus、褐飞虱Nilaparvata lugens、白背飞虱Sogatella furcifera为沃尔巴克氏体所感染。克隆了编码沃尔巴克氏体外膜蛋白质的wsp基因并进行了序列测定。对wsp的RFLP分析证实了这些飞虱为单一沃尔巴克氏体感染。研究了灰飞虱中沃尔巴克氏体所诱导的胞质不相容性及其在不同地域灰飞虱中的分布。还发现能寄生于上述3种飞虱的稻虱红螯蜂也受同种沃尔巴克氏体感染。沃尔巴克氏体可能通过这种寄生蜂在不同昆虫间横向传播。     

水稻二化螟内共生菌杀雄菌属和沃尔巴克氏体的检测与分析

应用杀雄菌属(Arsenophonus)23S rDNA基因和沃尔巴克氏体(Wolbachia) wsp基因的特异引物,通过PCR扩增的方法对我国20个水稻二化螟地理种群感染两类内共生菌的情况进行了检测.结果表明: 我国水稻二化螟不同地理种群的Arsenophonus和Wolbachia感染率不一致,哈尔滨、惠水、吉林、南阳和扬州5个地理种群的Arsenophonus感染率为5.0%～50.0%;汉中、南宁和扬州3个地理种群的Wolbachia感染率为25.0%～40.0%,其他地理种群中没有检测到这两种共生菌的存在.水稻二化螟不同地理种群感染的Arsenophonus 23S rDNA基因序列完全一致,将该基因株型命名为csArs.但所检测到的Wolbachia wsp基因序列不一致,分别为wChisup1、wChisup5和wChisup6,其中wChisup1属于A群,其他属于B群.这说明水稻二化螟感染的Arsenophonus为同一株型,而感染的Wolbachia株型较为复杂.通过构建系统发育树发现,水稻二化螟体内的Arsenophonus23S rDNA基因和Wolbachia wsp基因与其他物种体内相关序列完全一致或高度相似.     

几种常见桔园螨类Wolbachia基因检测与序列分析

应用共生菌沃尔巴克氏体Wolbachia的wsp、ftsZ和16SrDNA基因特异引物,通过PCR扩增法对采自江西省南昌、九江和赣州等3地桔园内的东方钝绥螨、江原钝绥螨、尼氏真绥螨、巴氏新小绥螨、桔全爪螨和酢浆草如叶螨等6种常见螨类进行了检测。结果表明,在采自南昌桔园内的酢浆草如叶螨体内检测到Wolbachia感染,其wsp、ftsZ和16SrDNA基因长度为593、758和896bp,Genbank登录号依次为GQ162482、GQ162483和GQ162484,而其他5种螨体内均未检测出Wolbachia的感染;同时通过对酢浆草如叶螨体内感染的Wolbachia的wsp基因序列进行系统发育分析,得出其与B大组的Epo组的Wolbachia株十分相近,可能是相近或相同的株。     

铃木氏果蝇不同地理种群中Wolbachia的检测和系统发育分析

铃木氏果蝇Drosophila suzukii是原产于东南亚地区的重要果树害虫, 近年来传入北美和欧洲等地区造成严重的危害。本研究利用Wolbachia的16S rDNA和wsp基因特异引物（分别为16S-F/16S-R和81F/691R）对铃木氏果蝇7个地理种群（中国的5个种群、 韩国的1个种群和美国的1个种群）的Wolbachia进行了PCR检测并对检测结果进行了比较; 对感染个体体内Wolbachia的16S rDNA基因片段进行测序, 确定了我国铃木氏果蝇体内Wolbachia的分类地位。基于Wolbachia的16S rDNA基因特异引物检测结果发现, 我国5个铃木氏果蝇种群广泛感染Wolbachia（感染率36.7%~80.0%）, 而韩国和美国2个种群均未检测到该菌的感染。而利用wsp基因特异引物无法检测到该菌。基于Wolbachia的16S rDNA基因构建系统发育树表明, 我国铃木氏果蝇种群感染的Wolbachia全部属于A组。这些结果为研究Wolbachia感染对铃木氏果蝇生物学及生态学的影响奠定了基础。     

我国桃蛀螟四个地理种群感染Wolbachia的研究

Wolbachia是一类广泛分布于节肢动物体内的细胞内共生菌,能参与调控寄主的多种生殖活动.桃蛀螟Conogethes punctiferalis (Guenée)可危害多种粮食作物和经济作物,近年来已成为我国玉米生产的重要害虫之一.本研究对通过对16S rRNA、fts以及wsp基因片断的PCR扩增,对我国桃蛀螟4个地理种群进行了Wolbachia感染检测,并对感染个体中wsp基因片断克隆测序,初步探究了我国桃蛀螟种群中Wolbachia的感染率和感染类群.研究结果表明我国4个桃蛀螟种群中Wolbachia感染率在2.0%～8.0%,平均感染率为4.5%.通过对不同种群感染的Wolbachia中wsp序列比对及系统树构建分析,在桃蛀螟中发现了5种Wolbachia亚型,分别命名为wPun1-wPun5,分属于A组的Uni、Dro亚组,以及B组的Div、Con亚组.此外,本研究在采自河北保定的桃蛀螟种群中发现了Wolbachia的超感染现象.     

我国麦蚜体内的沃尔巴克氏体(Wolbachia)的检测

沃尔巴克氏体是广泛分布于节肢动物体内的一类共生细菌 ,它们参与多种调控其寄主生殖活动的机制。本研究通过wsp基因的特异性扩增证实了沃尔巴克氏体在麦长管蚜Sitobionavenae(Fabricius)体内的共生。而且在麦长管蚜的两种体色型 (绿色型和红色型 )中都检测到了沃尔巴克氏体的共生。     

莽山部分蜘蛛Wolbachia的感染及其wsp基因的序列分析

沃尔巴克氏体(Wolbachia)是一类广泛存在于节肢动物和线虫体内的胞内共生菌,能调控宿主的生殖方式。现用PCR方法检测了莽山自然保护区跳蛛科(Salticidae)、漏斗蛛科(Agelenidae)和狼蛛科(Lycosidae)部分蜘蛛种类的Wolbachia感染状况。结果证实跳蛛科蓝翠蛛(Siler cupreus)、狼蛛科小雾豹蛛(Pardosa mionebulosa)和漏斗蛛科指形龙角蛛(Draconarius digitusiformis)受Wolbachia感染,其感染率分别为3.7%、8.6%和40.0%。同时,基于Wolbachia的wsp基因序列构建系统发育树,结果表明:D.digitusiformis感染的Wolbachia属于A群,P.mionebulosa感染的Wolbachia属于B群,S.cupreus感染的Wolbachia属于G群;而且同一科的蜘蛛感染的Wolbachia亲缘关系较远,而不同科蜘蛛感染的Wolbachia系统发育关系较近,这可能与Wolbachia的水平传播有关。     

沟眶象体内感染的Wolbachia的wsp基因克隆与序列分析

Wolbachia是广泛分布于昆虫细胞内的一类共生菌,为明确Wolbachia在沟眶象Eucryptorrhynchus chinensis(Olivier)体内的感染情况和分类地位,采用Wolbachia的wsp基因片段对沟眶象5个地理种群(宁夏灵武、中宁、中卫、安徽淮北、山东聊城)共100个样本,进行分子检测。经过克隆和测序得到wsp基因片段593 bp(Gen Bank number:KP713759),明确了沟眶象体内存在Wolbachia的感染,并且其在不同地理种群内的感染率均为100%;通过wsp通用引物检测发现沟眶象体内感染了1种Wolbachia,属于A群Dro亚群。     

Wolbachia引起黑腹果蝇产生“修饰-挽救”因子的初步探究

沃尔巴克氏体(Wolbachia)是一种广泛分布于昆虫体内的共生细菌,对宿主的生殖具有多种调控作用,其中,最常见的调控方式称为细胞质不亲和(Cytoplasmic Incompatibility,CI),即感染了Wolbachia的雄性宿主与未感染或感染不同品系Wolbachia的雌性宿主交配后,胚胎在发育早期死亡。关于CI产生的原因,目前人们认为是一种"精子修饰-卵子挽救"机制,本研究初步探索了黑腹果蝇中参与"修饰-挽救"机制的重要因子。本研究采用定量RT-PCR方法,检测了3种基因:yem-α(yemanuclein)、uif(uninflatable)、Prosα4T1(proteasomeα4 subunit,Testis-specific 1)在感染和未感染果蝇中的表达差异。结果发现,Wolbachia感染能够显著上调雌蝇中yem-α和uif的表达,并且显著下调雄蝇中yem-α的表达。尽管Prosα4T1在雄性果蝇体内特异表达,但是Wolbachia感染对Prosα4T1表达无明显影响。因此,yem-α可能是Wolbachia产生"修饰-挽救"机制的重要因子之一,Wolbachia可能通过调控果蝇体内yem-α的表达,影响卵子发生和精子发生进程,导致CI的产生。     

Diversity and phylogeny of Wolbachia infecting Bactrocera dorsalis (Diptera: Tephritidae) populations from China

Wolbachia are a common and widespread group of symbiotic bacteria found in the reproductive tissues of arthropods. Bactrocera dorsalis (Hendel) is an important pest causing considerable economic losses of fruits and vegetables in several southern provinces of China. In this study, polymerase chain reaction (PCR) with general Wolbachia surface protein (wsp) primers was used to test the presence of Wolbachia in 1,500 individuals of B. dorsalis from five geographical populations of China. We detected 19 individuals of B. dorsalis infected by Wolbachia, and the infection rates of different populations varied. Comparison of wsp gene sequences from 19 individuals and search of the GenBank identified four new sequences, probably representing four Wolbachia strains. Sequence comparison showed that the four Wolbachia strains from B. dorsalis in China belonged to three groups (Kue, Mel, and Cuc). Phylogenetic analysis of the wsp sequences suggests that geographical isolation of Wolbachia exists among the populations of B. dorsalis in China, and gene flow of Wolbachia might have occurred between B. dorsalis populations of China and Thailand. Phylogenetic analysis performed on the host mitochondrial cytochrome oxidase I (COI) gene and wsp gene suggests that host has coevolved with Wolbachia.     

朱砂叶螨体内感染的Wolbachia的wsp基因序列测定与分析

应用Wolbachia的wsp基因特异引物,通过PCR扩增法对我国朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus7个地理种群进行了检测。在采自黑龙江佳木斯、安徽安庆、江苏镇江和浙江慈溪的4个地理种群中扩增出了596bp左右的Wolbachia的wsp基因片段,而在河北威县、山东滨州和湖北赤壁3个地理种群中未发现这个Wolbachia特征基因片段,表明 Wolbachia在我国朱砂叶螨中的侵染较为普遍。通过对我国朱砂叶螨体内感染的 Wolbachia的wsp基因序列进行系统发育分析,得出它们全部与B大组的Ori组的Wolbachia株十分相近或完全相同,提示它们可能是相近或相同的株。     

Wolbachia在玉米螟赤眼蜂内的三重感染

Wolbachia是一类广泛存在于节肢动物体内的共生菌。玉米螟赤眼蜂Trichogramma ostriniae是我国玉米田间的优势赤眼蜂种, 据报道, 赤眼蜂种内有Wolbachia感染。本文利用Wolbachia的16s rDNA和wsp基因引物通过PCR方法对玉米螟赤眼蜂的野生种群进行了调查, 发现以wsp基因为鉴定依据, 检测的所有个体都感染了3种Wolbachia ［wOstGDAa (GenBank accession no. EU157103), wOstGDAb (GenBank accession no. EU157104) 和 wOstGDB (GenBank accession no. EU157105)］。本文首次报道了野生赤眼蜂种群内Wolbachia的三重感染率几乎为100%。根据本研究的结果, 可以推测当不同种赤眼蜂寄生同一寄主时, Wolbachia可能会在不同赤眼蜂种间进行横向传播。     

三色书虱体内共生微生物Wolbachia的wsp基因的分子检测

采用常规PCR和巢式PCR方法对三色书虱Liposcelis tricolor体内的共生微生物Wolbachia的wsp基因进行分子检测;通过Wolbachia的通用引物以及A、B亚群引物分别比较了常规PCR和巢式PCR对wsp基因扩增的灵敏性。从三色书虱体内扩增出了610bp的Wolbachia的wsp基因片段,500bp的WolbachiaA亚群的wsp基因片段和450bp的Wolbachia B亚群的wsp基因片段。扩增结果说明三色书虱被A和B两个亚群的Wolbachia混合感染;巢式PCR比常规PCR更为灵敏。     

Super-infections of Wolbachia in byturid beetles and evidence for genetic transfer between A and B super-groups of Wolbachia

Wolbachia are maternally inherited bacteria responsible for altering host reproduction. The two main groups found in insects, A and B, are based on molecular characterization using ribosomal, ftsZ, wsp (Wolbachia surface protein) or groE genes. We have used the wsp and ftsZ genes to study Wolbachia in byturid beetles. Byturus affinis contained a single copy of the ftsZ gene which grouped with A ftsZ sequences and a single copy of the wsp gene which grouped with B wsp sequences. This suggests that genetic exchange between A and B groups has occurred in the Wolbachia of this beetle. FtsZ and wsp sequences that were identical or nearly identical to those of B. affinis were found in B. tomentosus, suggesting that it also contains the same recombinant Wolbachia genotype. Most other byturids had more than one wsp sequence with at least one from the A and B groups, suggesting multiple copies of bacterial genes or multiple infections. B. ochraceus and B. unicolor both had four distinct wsp gene sequences. All the byturids had a closely related A wsp sequence and most a closely related B wsp sequence. Therefore, there appears to be an association between specific A and B wsp types.     

Wolbachia infections of the whitefly Bemisia tabaci

We report the first systematic survey for the presence of Wolbachia endosymbionts in aphids and whiteflies, particularly different populations and biotypes of Bemisia tabaci. Additional agriculturally important species included were predator species, leafhoppers, and lepidopterans. We used a polymerase chain reaction (PCR)-based detection assay with ribosomal 16S rDNA and Wolbachia cell surface protein (wsp) gene primers. Wolbachia were detected in a number of whitefly populations and species, whitefly predators, and one leafhopper species; however, none of the aphid species tested were found infected. Single, double, and triple infections were detected in some of the B. tabaci populations. PCR and phylogenetic analysis of wsp gene sequences indicated that all Wolbachia strains found belong to group B. Topologies of the optimal tree derived by maximum likelihood (ML) and a ML tree in which Wolbachia sequences from B. tabaci are constrained to be monophyletic are significantly different. Our results indicate that there have been at least four independent Wolbachia infection events in B. tabaci. The importance of the presence of Wolbachia infections in B. tabaci is discussed.     

小麦和大豆蚜虫中内共生菌Wolbachia的感染检测和系统发育分析

Wolbachia是一类在节肢动物中广泛感染的胞内共生菌。为了了解其在我国蚜虫中的感染情况, 本研究通过扩增wsp基因片段对采集自我国多个地区的3种小麦蚜虫（荻草谷网蚜Sitobion miscanthi、 麦二叉蚜Schizaphis graminum和禾谷缢管蚜Rhopalosiphum padi）和1种大豆蚜虫（大豆蚜Aphis glycines）样品进行了内共生菌Wolbachia的感染检测。结果显示： 3种小麦蚜虫中均未检测出Wolabchia。大豆蚜也仅在采集自北京和杭州的种群中发现了Wolbachia的感染, 感染率分别为95.8%和22.9%, 并且所检测的个体均为单株系感染。wsp基因序列的比对分析显示, 大豆蚜感染的Wolbachia株系与多个亲缘关系较远的昆虫物种中所感染的Wolbachia株系间具有高度一致的基因序列。wsp基因序列构建的系统发育关系和序列一致性均表明大豆蚜感染的Wolbachia株系属于B大组CauB组。本研究为今后探讨Wolbachia在我国蚜虫中的寄主范围和株系多样性提供了数据支持。     

神农架林区6种盖蛛体内Wolbachia的感染检测

采用Wolbachiawsp基因的1对通用引物81F和691R检测了神农架林区6种盖蛛的Wolbachia感染情况。检测结果表明,只有1头双线盖蛛（Neriene limbatinella）感染了Wolbachia,且对检测到的Wolbachia品系进行系统发育分析结果表明,双线盖蛛感染的Wolbachia品系属于Wolbachia品系分类的B组。     

二斑叶螨体内感染的Wolbachia的wsp基因序列测定与分析

应用Wolbachia的wsp基因特异引物, 通过PCR扩增法检测了二斑叶螨Tetranychus urticae Koch 12个地理种群（辽宁兴城、河北昌黎、湖南长沙、河南郑州、江苏徐州、甘肃兰州、云南昆明、山东泰安、新疆石河子、宁夏银川、陕西眉县和上海）感染Wolbachia的状况。结果表明,12个地理种群全部感染了Wolbachia。克隆分离得到了它们的wsp基因序列,在GenBank的登录号依此为： AY585714、 AY585712、AY785376、AY785375、AY585713、AY785374、AY785371、AY712954、AY712955、AY785372、AY785377和AY785373。对序列进行系统发育分析,发现它们全部与B大组Ori组的Wolbachia株系十分相近或完全相同。总体来看,它们的聚类关系基本上呈平行交叉分布,在不同种群之间没有构成明显的地理分布聚集性。