果蝇心脏基因一个新人同源基因WNT-10A的研究初报

Ｗｇ基因是控制果蝇心脏前体细胞形成的一个关键基因,根据物种间同源异型基因结构上的保守性与功能上的相似性,我们运用计算机克隆的方法获得了一个新的人同源基因,命名为ＷＮＴ－１０Ａ。该基因有一富集ＧＣ碱基的启动子,ｍＲＮＡ全长约２．４ｋｂ,３′末端包含ＡＴＡＡＡ的加尾信号,编码一段长４１７个氨基酸的蛋白质,与小鼠Ｗｎｔ－１０ａ的编码蛋白高度相似。其心脏ＥＳＴ数目占正常组织ＥＳＴ总数的４５％,表明该基因在心脏组织高度表达,提示其可能与心脏发育有关。该基因与其基因家族成员具有相似的同源框序列,在肿瘤细胞中大量表达（占总ＥＳＴ的３１％）,表明该基因相似于其家族成员,可能与肿瘤的发生有关。     

环状芽孢杆菌C—2几丁酶基因在大肠杆菌中的表达

对已克隆的环状芽孢杆菌Ｃ－２的几丁酶基因片段所作的亚克隆分析表明,该几丁酶基因位于１．７ｋｂ Ｐｓｔ Ｉ－Ｓｔｙ Ｉ片段 。ＣｈｉＩ基因在大肠杆菌ＪＭ１０７,ＤＨ５α,ＸＬ１－ｂｌｕｅ,ＴＧ－１等菌株中均能表达,但表达水平不同,其中ＪＭ１０７的表达活性最高,其胞外几丁酶活性与供体菌Ｃ－２菌株的胞外酶活性几乎相当。     

P转位子诱变的果蝇心脏发育基因的突变（Ⅱ）：第3染色体基因突变

本文报道了利用Ｐ转位子诱变果蝇心脏发育基因第３染色体的基因突变的部分结果．利用Ｐ转位子诱变,共建立了２５９个第３染色体隐性致死基因平衡系,其中２６个品系表现有心脏突变表型,２个品系同时具有Ｐ转位子在心脏组织的特异ＬａｃＺ表达,表明这２个品系的Ｐ转位子可能插入到与心脏发育有关的基因中或这些基因的附近,因此,这２个品系值得进一步研究     

癌基因mdm2及其产物

ｍｄｍ２（ｍｕｒｉｎｅ ｄｏｕｂｌｅ ｍｉｎｕｔｅ２）基因定位于人染色体１２ｑ１３－１４,转录产物为－５．５ｋｂｍＲ－ＮＡ,在人体正常组织中有广泛表达,其编码区为１４７６ｂｐ,ＭＤＭ２蛋白定位在细胞核中,半寿期很短,利用单抗或多抗发现和有５种与ｍｄｍ２相关,但分子量不同的蛋白,ＭＤＭ２蛋白在体内外都能与突变型或野生型Ｐ５３蛋白结合,抑制Ｐ５３蛋白介导的反式活化作用。ｍｄｍ２可作为一种癌基因使Ｐ５３     

Cx43基因在人类及小鼠胎心发育中的时空表达规律

目的　检测Cx4 3在人类和小鼠的胚胎心脏的表达 ,了解该基因在心脏发育过程中的表达规律。方法　选取人类 6～ 18孕周正常胚胎或胎儿心脏 6 3例 ,小鼠孕龄 9 5～ 16 5d胚胎心脏 6 4例 ,采用免疫组化法显示Cx4 3基因在心脏的表达。结果　早期人类胚胎心脏中 ,Cx4 3在心室肌中没有表达 ,心房肌表达微弱 ,原始小梁网中表达很高 ,随着胚胎发育 ,在心房和心室的表达逐渐增强 ,小梁网的表达在胚胎 13～ 14周达到高峰。室间隔的肌部表达量较弱 ,膜部室间隔不表达。房室瓣和大动脉根部管壁Cx4 3没有明显表达。除了在大动脉管壁表达不同 ,小鼠胚胎心脏表达规律与人类基本相同。结论　Cx4 3对于胚胎心脏的发育至关重要。     

bcl－2基因家族对细胞凋亡的调节

ｂｃｌ－２基因为一原癌基因,因其在淋巴瘤和白血病中出现重排而得名。近年研究表明,ｂｃｌ－２基因是细胞凋亡的重要抑制基因,它的过度表达是癌症和自身免疫病发生的重要原因。最近又发现了几个与ｂｃｌ－２基因有不同程度同源性的调节基因,也在细胞凋亡中发挥作用。     

FMR—1同源基因在大鼠脑发育过程中持续表达

以克隆的人ＦＭＲ－１ ｃＤＮＡ片段为探针，进行ＲＮＡ印迹杂交，检测发育过程中大鼠脑组织ＦＭＲ－１同源基因的表达，结果显示从胚胎早期至出生后一个月该基因有持续表达，其中在胚胎发育晚期表达量较高，提示ＦＭＲ－１基因可能参与胎脑发育的调节。     

马铃薯GBSS基因5‘侧翼区调控作用的研究

将０．４、０．８、１．６、２．９ｋｂＧＢＳＳ基因的５＇侧翼区与ＧＵＳ基因融合,构建了双元表达载体。０．８ｋｂＧＢＳＳ－ＧＵＳ通过基因枪介导在块茎切片中获得了瞬间表达。以上建构物通过农杆菌介导转入了马铃薯。Ｘ－Ｇｌｕｃ染色及ＰＣＲ结果证实已获得转基因植株。利用离体块茎诱导系统,ＧＵＳ表达用荧光进行定量检测,结果显示,２．９、１．６、０．４ｋｂＧＢＳＳ－ＧＵＳ的表达均以块茎明显高于茎段,达２￣１０倍。     

鸡AchRγ亚基基因远上游增强子样作用依赖生肌因子

先前曾报告鸡ＡＣｈＲγ亚基基因５连接区－５３８／－２８８片段（含一对Ｅ盒子）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用,为进一步观察ＤＮＡ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互作用对γ基因转录激活功能的影响,利用瞬时表达体系研究了鸡ｎＡＣｈＲγ亚基基因５端－５３８／－２８８片段调控机能,ＣＡＴ分析表明：γ基因－５３８／－２８８片段可显著激活ｔｋ启动子在分化的Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性,但不能激活在未分化Ｃ２Ｃ     

MLC_2-糜酶融合基因克隆及转基因小鼠的产生

为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系,并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达,构建肌球蛋白轻链－２启动子（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ－２ｐｒｏｍｏｔｅｒ,ＭＬＣ２）－糜酶融合基因并产生转基因小鼠．通过删除糜酶基因启动子序列,构建结构基因克隆,然后与大鼠心脏肌球蛋白轻链－２启动子序列相拼接,构建ＭＬＣ２－糜酶融合基因克隆,回收并纯化融合基因片段,显微注射入小鼠受精卵产生转基因小鼠,经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＰＣＲ扩增产物的测序,筛选和确定转基因鼠．在新出生的４６只小鼠中有２只为转基因阳性鼠,且外源基因能稳定遗传给后代,从而获得了可用于研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系的转基因小鼠模型．     

Islet1基因与心脏发育

心脏发育及心脏疾病干细胞的治疗要求对心脏发育过程中的控制细胞增殖及分化的相关基因的作用机制进行深入了解.Islet1基因(Isl1基因)含有6个外显子和5个内含子,定位于人类5号染色体5q11.2.该基因在基因组内约占12kb,目前所知其最长可读框(ORF)至少由5个外显子组成,编码一个由384个氨基酸组成的转录因子蛋白.最近研究发现,不同的心脏细胞可能源于同一种多能心脏祖细胞—Isl1+细胞,心脏的这一发育模式与血液细胞的形成模式非常相像.另外有研究结果显示,Isl1是与心脏发育密切相关的转录因子之一,其表达随着心脏发育成熟而逐渐下调.虽然针对Isl1基因做了较多的研究工作,但是它表达调控的具体模式及发挥功能的详细作用机制目前仍未完全清楚,本文对最近几年Isl1基因的研究进展作一综述.     

鸡AChRγ亚基基因远上游增强子样作用依赖生肌因子

先前曾报告鸡ＡＣｈＲγ亚基基因５＇连接区－５３８／－２８８片段（含一对Ｅ盒子）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用,为进一步观察ＤＮＡ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互作用对γ基因转录激活功能的影响,利用瞬时表达体系研究了鸡ｎＡＣｈＲγ亚基基因５＇端－５３８／－２８８片段调控机能。ＣＡＴ分析表明：γ基因－５３８／－２８８片段可显著激活ｔｋ启动子在分化的Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性,但不能激活在未分化Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性。这种组织特异性转录激活作用与距离无关,因而是一个典型的增强子;－５３８／－２８８片段的增强子样作用既依赖于两毗邻Ｅ盒子的完整性,又依赖于ｍｙｏｇｅｎｉｎ等生肌调节因子的存在。强化表达ｍｙｏｇｅｎｉｎ可激活ｐＢＬＣＡＴ２－γ（－５３８／－４３３）和ｐＢＬＣＡＴ２－γ（－４３２／－２８８）（各含一个Ｅ盒子）在分化肌细胞中的表达,究竟是克隆片段中的独立Ｅ盒子对这种表达起贡献还是出现在克隆位点附近的反向Ｅ盒子（ＧＴＣＧＡＣ）或ｔｋ启动子中的另一个Ｅ盆子起作用？尚不十分清楚。     

小鼠成纤维细胞凋亡过程中P53与bcl-2表达的时序性

为探讨细胞凋亡过程中,ｂｃｌ－２与Ｐ５３,这两种凋亡关键性基因的相互关系,用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠正常与恶性转化的成纤维细胞的凋亡,观察了这两种基因在凋亡过程中表达变化的时序．经流式细胞计检测,这两种细胞在５－Ｆｕ作用２４ｈ均出现了凋亡峰,细胞存活率随之下降,ＤＮＡ电泳显现梯状断裂．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示,在５－Ｆｕ作用６ｈ后两种细胞Ｐ５３ｍＲＮＡ水平已明显增高,而ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ水平则在作用１２ｈ方明显降低．Ｐ５３上调与ｂｃｌ－２下调的明显时序性,说明Ｐ５３具备作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的条件．由此,为进一步了解凋亡过程的ｂｃｌ－２基因下调机理提供了线索     

汉滩病毒S基因及其5‘端真核表达载体的构建及在细胞中的表达

体外研究汉滩病毒（ＨＴＮＶ）Ｓ基因及其５'端表达的意义,为核蛋　白Ｔ细胞表位的研究奠定基础。设计２套引物,用ＰＣＲ方法从ＰＢＶ２２０－Ｓ２２原核质粒中扩增出Ｓ　基因全读码框（３７－１３２６ｂｐ）及Ｓ基因５'端（３７－５０１ｂｐ）,用ＴＡ克隆将其克隆入ｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５－Ｈｉｓ－ＴＯＰＯ载体中,成功构建ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ真核表达载体,并通过脂质体转　染至Ｖｅｒｏ细胞中,进行了瞬时表达。间接免疫荧光成功检测到ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ在Ｖｅｒｏ细胞中的表达。ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ真核表达载体有较高的转染效率,目　的基因能在宿主细胞中表达,有利于研究ＨＴＮＶ－Ｓ基因在Ｔ细胞表位研究中的意义。     

籼稻蜡质基因5＇上游区与GUS基因编码区融合基因的构建和在水稻中的瞬间表达

为了鉴定水稻蜡质基因５＇上游区的顺式作用因子与研究它们在组织专一性表达中的作用,我们对籼稻品种２３２的蜡质基因５＇上游－１１５至－２１２０的区域进行了顺序测定,并将此基因的５＇上游区同报告基因ＧＵＳ构建成融合基因,用基因枪粒子轰击的方法将此融合基因导入水稻未成熟种子的幼胚和糊粉层细胞中,瞬间表达检测的结果表明,我们构建的融合基因中蜡质基因５＇上游区的长度已足以使ＧＵＳ基因在上述组织中表达。     

与人体ε—珠蛋白基因5‘旁侧正调控元件（ε—PREⅡ）…

人体ε－珠蛋白基因５’旁侧ＤＮＡ序列对该基因时空表达与调控起着十分重要的作用。本文运用交电泳阻抑法,ＤＮａｓｅＩ足印法和Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析法发现在胚胎裂红白血病细胞株Ｋ５６２细胞中有一个特异的核蛋白因子,它能专一地与人体ε珠蛋白基因５‘旁侧一个红细胞专一和发育时期特异的正调控元件（ε－ＰＲＥⅡ,－４４６ｂｐ到－４１９ｂｐ）相结合竞争实验表明该因子与ε－ＰＲＥⅡ的结合能被人体ε－     

多个顺式作用元件调节血管紧张素原基因表达

血管紧张素原是最强的血管活性物质——血管紧张素Ⅱ的唯一前体,在不同的生理和病理条件下,其水平各异．为了研究血管紧张素原基因表达的调控,将人血管紧张素原基因５′端侧翼序列１．２ｋｂ同氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）基因编码序列连接,构成表达载体,并且在此基础上构建５′端系列缺失的突变表达载体,用这些表达载体转染ＨｅｐＧ２和ＣＯＳ－７,确定了正负调控元件;同时应用ＤＮＡ－蛋白质凝胶泳动检测技术,发现核蛋白质与该顺式元件的结合,从而证明多个顺式作用元件调节血管紧张素原基因的表达．     

RGD肽与尿激酶B链融合蛋白原核重组表达质粒的构建,表达和？…

将化学合成的ＲＧＤ肽（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ）编码寡核苷酸与尿激酶Ｂ链ｃＤＮＡ相连成为融合基因后,克隆至原核表达质粒ｐＢＶ２２０中,在ＰＲＰＬ自动子的作用下,经４２℃热诱导,在大肠杆菌ＤＨ５α中获得了融合基因的表达,其表达量占菌体总蛋白的９．２％,表达产物以无活性的包含体形式存在。经变复性处理得到纯化的融合基因的表达产物,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明产物具有与天然尿激酶相似的抗原性,     

cIts857基因的克隆,修饰及温敏诱导表达载体

从噬菌体λＤＮＡ克隆出９９０ｂｐ的ｃＩｔｓ８５７基因,经缺失,点突变等修饰改造和ＤＮＡ序列测定,获得了带有自身启动子区的修饰型ｃＩｔｓ８５７基因（７７０ｂｐ）。进而利用它大肠杆菌表达载体ｐＢＬＭＶＬ２和一套含３种不同阅读框架Ｉｉｎｋｅｒ区的表达载体ｐＢＬＭＦＶ４、５Ｂ、６。上述表达载体,用于表达人工合成的牛生长激素、人干扰素－γ△Ｃ－１３和酵母ｐｈｏ８５等外源基因,都观察到这些基因产物的温敏表达。     

学习记忆对脑内c-fos基因表达的影响

学习记忆是人和动物重要的脑功能，大量事实表明，学习记忆过程与脑内ｃ－ｆｏｓ基因的表达密切相关。由学习记忆所诱导的ｃ－ｆｏｓ基因表达在脑内广泛分布，以皮层、海马和边缘系统为多，依学习记忆训练模型的不同，其表达时程有所差异，但一般于训练后立即或３０分钟左右出现，１～２小时左右达峰值。被动和主动回避训练、光辨别训练及味觉厌恶性条件反射训练等多种学习记忆模型均可诱导脑内ｃ－ｆｏｓ基因的表达。其他影响学习记