用酵母分泌表达味觉变革蛋白

研究将酸味变成甜味等修饰味觉的蛋白(味觉变革蛋白)的横滨国立大学教育部教授栗原良枝等小组着手研究用基因重组酵母分泌表达味觉变革蛋白奇异果素、葡糖醛酸。奇异果素是与东燃公司,葡糖醛酸是与旭电化工业,东京大学农学部教授荒井综一共同开发的。4月2日在日本农艺化学会上发表了用大肠杆菌表达重组基因的成果,但是用重组大肠杆菌表达的蛋白都没有味觉变革活性。目的是用酵母分泌表达,获得活性型蛋白。为味觉变革蛋白的结构活性的解明和大量生产开辟道     

胆碱脱氢酶的N端氨基酸序列测定

采用SDS-PAGE凝胶电泳及电转移方法,将增溶的鼠肝线粒体胆碱脱氢酶进一步纯化,且去掉增溶线粒体胆碱脱氢酶(CDH)中所包含的大部分磷脂、去垢剂、辅基FAD等. 对进一步纯化的CDH进行了N端氨基酸序列测定,得到CDH N端10个氨基酸残基序列为VAAAAGGGKD,这一部分序列与小鼠CO5蛋白(即补体C5的前体蛋白)、大鼠腺苷酰(基)环化酶(adenylyl cyclase)、人甾体结合蛋白(oxysterol-binding protein)有很高同源性,但与大肠杆菌CDH并无明显的同源性.     

青藏高原藏羚羊朊蛋白基因及氨基酸序列分析

羊瘙痒病是一种自然发生的传染性海绵状脑病,它可以在绵羊和山羊羊群之中传播,其疾病的易感性、潜伏期和跨物种传播的能力主要受宿主朊蛋白基因(prion protein gene,PRNP)的影响。研究藏羚羊PRNP有助于明确藏羚羊和羊瘙痒病之间的关系,从而更好地保护藏羚羊。参照GenBank上已经发表的绵羊PRNP序列设计引物,然后对藏羚羊的PRNP序列进行扩增、测序和分析。测序结果显示藏羚羊PRNP序列由771个核苷酸构成,编码256个氨基酸。序列分析结果显示21只藏羚羊PrP(prion protein,PrP)氨基酸序列完全同源,并且与野生型绵羊PrP氨基酸序列完全一致。此外,藏羚羊PrP氨基酸序列与山羊(99.2%)、汤氏瞪羚(99.2%)、印度羚(99.2%)、驯鹿(98%)、马鹿(98%)、家牛(97.7%)和水牛(96.1%)也具有较高的同源性。在对PrP氨基酸序列136、154、171位多态性分析后发现本次收集的21只藏羚羊样本可能和野生型绵羊一样对羊瘙痒病易感。本研究为羊瘙痒病在藏羚羊羊群中可能出现的风险提供了理论依据,提示要加强藏羚羊羊群中羊瘙痒病的监测。     

天然蛇毒蛋白C激活剂的氨基酸序列及其比较

血浆蛋白Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎＣ，ＰＣ）是人体蛋白Ｃ系统的主要成分，在人体的抗凝血机制中起重要作用。α－凝血酶是其唯一的生理激活剂，它裂解ＰＣ重链氨基端精１２－异亮１３肽键脱下１２肽，形成具有丝氨酸水解酶活化中心的活化ＰＣ而发挥抗凝作用。近年来，在天然蛇...     

对腺苷酸环化酶的氨基酸序列及结构有了新分析法

腺苷酸环化酶(AC)的形式多样,将AC激活剂diterpene forskolin交联在琼脂糖柱上,可通过亲和层析分离此酶;也可利用单克隆抗体进行识别和分离。电泳结果表明,AC的分子量为120～150KD。由于存在封闭的氨末端,很难对完整的蛋白质进行氨基酸序列分析,所以先采用胰蛋白酶将蛋白质水解为14个肽链、进行高压液相层析,再将其中一段进行氨基酸序列分析,并合成相应的核苷酸探针,利用重组DNA技术,确证牛脑AC是由1134个氨基酸组成。     

石蒜核糖体蛋白L21的基因克隆及氨基酸序列分析

根据已知核糖体蛋白L21(RPL21)基因的保守序列设计1对引物,采用PCR技术从石蒜〔Lycoris radiata(L’Hér.)Herb.〕叶片全长cDNA文库中筛选出阳性克隆。通过测序和分析,获得1条石蒜RPL21基因全长cDNA序列,命名为LrRPL21,GenBank登录号为FJ972626;序列全长709 bp,编码1条具有164个氨基酸残基的多肽。采用多种分析程序对石蒜RPL21的理化性质以及氨基酸序列的同源性进行了分析比较。结果显示:石蒜RPL21的预测分子量为18 628,理论等电点为10.36,分子式为C833H1348N254S4,总平均疏水性指数为-0.668,为亲水性蛋白;石蒜RPL21与其他8种植物RPL21的氨基酸序列同源性百分率均较高,达到85%～95%;根据系统树可推测其与油棕(Elaeis guineensis Jacq.)RPL21的进化关系最近。     

高压液相色谱法测定脑活素中氨基酸含量

本文介绍用反相高压液相色谱法分析脑活素注射液中游离氨基酸的组成和含量,游离氨基酸通过与２,４－二硝基氟苯在柱前衍生化反应,生成二硝基氨基酸（ＤＮＰ－氨基酸）,经氨基酸专用分析柱分离,用紫外检测器３６０ｎｍ检测,脑活素的１６种氨基酸在６０分钟内得以良好分离,操作简单、准确。     

嗜硫色谱分离纯化碱性脂肪酶及其氨基酸序列测定

扩展青霉(Penicillium expansum)FS1884所产生的碱性脂肪酶经硫酸铵沉淀、Sephacryl S-200柱层析后,再经嗜硫色谱(Thiophilic Chromatography)柱层析,被纯化了173．8倍,最终比活为5694．9U／mg。纯化后的脂肪酶达到了SDS-PAGE电泳纯、PAGE电泳纯以及毛细管液相色谱(Capillary Liquid Chromatography)纯。该脂肪酶N-端氨基酸序列测定的结果是：A T A D A A A F P D L H R A A K L S S A,与来自青霉属其它真菌脂肪酶一级结构作了比较。     

α—淀粉酶成熟蛋白N—端氨基酸序列变化对蛋白分泌的影响

从地衣芽孢杆菌（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）构建的重组质粒ｐＡｍｙ４１３,经过定点诱变,在α－淀粉酶基因的２７１位引入Ｇ取代原来的Ａ,构建成突变型质粒ｐＡｍｙ４１３Ｃ。成熟的α－淀粉酶氨基酸由＋２Ａｓｎ变为＋３Ａｓｐ,其产量是野生型的２．０２－２．５７倍;Ｎ－端氮基酸序列分析发现：信号肽酶Ｉ的切割位点前移了一个氨基酸,即ＡｌａＡｌａ－＋３Ａｓｐ;二级结构分析发现：在自由能为－５１．７ｋｃａｌ时,突变型与野生型的ｍＲＮＡ都形成１４个环状结构,区别在于２７１位的Ｇ不再与２１１位的Ｕ配对,形成Ｇ突出;蛋白质二级结构分析发现：３３－３７氨基酸的转角结构减少了１个氨基酸,这个氦基酸参与形成α－螺旋;这些空间结构和荷电氮基酸的变化有利于蛋白质的分泌。     

利用高效液相色谱法测定单细胞蛋白发酵液中氨基酸

利用酵母菌发酵工业废糟渣生产单细胞蛋白 (SCP)类饲料 ,其发酵液也含有蛋白类物质 ,酸水解后用高效液相色谱法测定氨基酸含量 ,结果表明 :酵母菌发酵液中氨基酸含量全面 ,总量达 2 95 .1mg·L- 1 ,有较高的应用价值。     

蜱传脑炎病毒东北株E蛋白的核酸和氨基酸序列

从我国东北林区死者脑组织中,分离到蜱传脑炎病毒ＨＬＪ－１株,测定了它的Ｅ蛋白基因序列和推导的氨基酸序列,以及Ｅ蛋白抗原位点反应图谱。将该株与远东亚型Ｓｏｆｙｎ株和中欧亚型Ｎｅｕｄｅｒｆｌ株做了同源性比较,ＨＬＪ－１株与Ｓｏｆｙｎ株Ｅ蛋白基因的核苷酸及氨基酸的同源性分别为９４．３％和９８．８％;与Ｎｅｕｄｏｅｒｆｌ的核苷酸和氨基酸的同源性分别为８３．７％和９６％。在Ｅ蛋白的核苷酸序列中,ＨＬＪ－１和     

稀有氨基酸的测定

<正> 本章讨论几种稀有氨基酸的测定。这些氨基酸在相当少的几种蛋白质中存在。它们的测定存在着特殊的困难或特性,然而,它们的测定方法对今后可能将是重要的。稀有氨基酸的测定蛋白质中除了已遇到的普通氨基酸外,还有许多非普通氨基酸存在,例如,这些非普     

人脂多糖结合蛋白基因的克隆及序列测定

采用PCR技术,从人肝cDNA文库中扩增获得了1.5 kb的脂多糖结合蛋白（LBP）的全长基因.序列分析表明,克隆的LBP基因编码的氨基酸序列与文献报道相同.     

新城疫病毒F和HN蛋白的氨基酸序列对其毒力的影响

新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)属副粘病毒科副粘病毒属,为不分节的负极性单股RNA病毒,有囊膜.它虽只有一个血清型,但不同毒株的致病力差异较大,有强毒株、中毒株和弱毒株之分.业已证明,NDV不存在先天性控制病毒致病性基因,不同的毒株都含有相同的基因组和结构蛋白质组分.     

四环素-绿色荧光蛋白融合蛋白的构建及其活性测定

将来源于水母的绿色荧光蛋白基因 (gfp)和来源于E .coli转座子Tn10的四环素阻遏蛋白基因 (tetR)共同构建到E .coli表达载体pET_30a +上 ,获得TetRC_端与GFPN_端融合蛋白。对经诱导表达并纯化后的融合蛋白 (TR∷GFP)进行荧光发射光谱分析表明 ,该融合蛋白保留了GFP的荧光特性 ,即在 395nm激发下 ,可在 5 10nm附近有特征发射峰。在加入四环素后 ,融合蛋白在 395nm激发下 ,在400nm～700nm范围内的发射光谱发生明显变化 ,荧光强度普遍增加 ,且以 510nm处最大发射峰增幅最大 ,由原来 1132增至 2214 ,而四环素对相同浓度的GFP与TetR荧光影响不大 ,结果表明该融合蛋白 ,能感受外界四环素 ,并产生一定的荧光变化。     

一个新的Br蛋白基因部分序列测定及分析

从新疆北部艾比湖分离纯化到极端嗜盐古生菌AB1,采用PCR方法扩增了其16S rRNA基因（16S rDNA）和编码螺旋C至螺旋G的细菌视紫红质（bacteriorhodopsin,Br）蛋白基因片段,并测定了基因的核苷酸序列。基于16S rDNA序列的同源性比较及系统发育学研究表明,AB1是Natronococcus属中新成员。通过对菌株AB1的Br蛋白亲水性分析表明,AB1的Br蛋白与已报道Br蛋白有类似的超二级结构,进一步的蛋白质序列聚合比对结果表明,AB1中Br蛋白螺旋C至螺旋G的氨基酸序列与其他菌株差异明显。研究结果表明菌株AB1的Br蛋白是一种新的Br蛋白。Abstract: A strain of halophilic archaeum AB1 was isolated and purified from Aibi Lake located in the north of Xinjiang Uygur Autonomous Region. Partial DNA fragment encoding a bateriorhodopsin (Br) protein as well as 16S rRNA of AB1 was amplified by PCR, and their nucleotide sequences were determined subsequently. On the basis of homology and phylognetic analysis about 16S rRNA gene (16S rDNA), it could be speculated that the strain AB1 is a novel member of the genus Natronococcus. The hydrophathy analysis of Br fragment revealed that the AB1 Br had a transmembrane heptahelical structure similar to that of other Brs. On the other hand, homology alignment using the deduced partial amino acid sequence of Br protein of AB1 with other Br proteins showed that AB1 Br protein is obviously different to others. These facts indicated that the Br in halophilic archaeum AB1 is a new Br protein.     

美洲大蠊水解氨基酸含量测定及营养评价

采用酸水解法,测定美洲大蠊中氨基酸的种类和含量,并对其进行营养评价。结果表明:美洲大蠊含有17种氨基酸(色氨酸被水解破坏而未检出),总氨基酸质量分数为43.14%,其中药效氨基酸占总量的55.43%,呈味氨基酸占总量的20.28%,其氨基酸配比较为合理:E/(E+N)=0.35,E/N=0.55,与WHO/FAO提出的参考蛋白模式接近。美洲大蠊中氨基酸种类齐全,含量丰富,富含必需氨基酸和药效氨基酸,具有很高的食用、药用价值,有较好的开发潜力。     

乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白的优势氨基酸序列与热点突变位点的生物信息学分析

乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)全长154个氨基酸,与肝癌发生密切相关。为确定HBx的优势氨基酸序列和热点突变位点,在GenBank中下载所有HBx的氨基酸序列13 950条,剔除插入突变、缺失突变和起始密码子非甲硫氨酸的序列,最后保留7 126条。通过分析这7 126条序列,计算出HBx每个位点的氨基酸分布情况,出现频率最高的氨基酸为该位点的优势氨基酸,其他氨基酸为突变氨基酸。154个位点的优势氨基酸组成HBx优势氨基酸序列。突变率10.0%的热点突变位点有32个。其中第36、42、44、87、88和127位氨基酸有4种(突变率1.0%)以上突变形式,具有较高的多态性。与肝癌密切相关的K130M/V131I双突变率为34.7%。通过7 126条HBx序列与优势序列的同源性比较,随机选出其中50条序列(2条与优势序列同源性75%,48条同源性为76%~99%),与23条参考序列及优势序列共同构建系统发生树。结果显示,HBx优势氨基酸序列属于基因型C,这与基因型C为全球主要流行型一致。本研究首次系统性分析了GenBank中HBx的优势序列,确定了32个HBx热点突变位点和6个多态性较高的位点,为基于HBx突变的基础和应用研究奠定了基础。