大鼠脑内亦有促肾上腺皮质激素释放因子分布

应用放射免疫技术、免疫组织化学以及控制促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)的合成等方法对大鼠脑内不同分区的70个神经核团中CRF 含量进行测试的结果表明,CRF 细胞不仅分布在下丘脑许多神经核团内,而且还分布在其它不同脑区。下丘脑正中隆起外层细胞的CRF 含量最高(39.27±9.50 ng/mg 蛋白),正中隆起内层细胞和垂体柄的含量也相当多。用组织化学的方法可见CRF 染色的神经纤维末梢中有     

高原鼠兔下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子的放射免疫测定

高原鼠兔已被我们选定为研究高原低氧适应机制的模型动物。我们过去的研究从器官水平乃至细胞和亚细胞水平均已证明该动物对高原低氧是不敏感的,属于高原低氧完全适应型动物。在研究下丘脑神经肽对高原低氧神经内分泌系的调控作用时,我们用大 鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(Corticotropin releasing factor,CRF)的抗原、抗体放射免疫方法测定高原鼠免下丘脑CRF水平,获得了满意的结果,其灵敏度范围为3—200微微克/管,批间和批内变异系数分别为2.69％和7.24％。高原鼠兔下丘脑正中隆起处(Median eminence,ME)的提取物等的稀释液显示出与合成的大鼠CRF及其抗体间放射免疫反应的标准曲线,有很好的平行关系。高原鼠兔和大鼠ME处CRF的水平用此法测定分别为10.13±3.05和17.22±3.88微微克/毫克蛋白。大鼠ME处CRF水平随模拟海拔高度的增加而降低,而高原鼠兔不变化。随着肾上腺双侧切除,下丘脑ME之CRF下降,血浆皮质酮水平急剧下降,本结果提示,高原鼠兔的下丘脑确实含有与大鼠相类似结构与组成的CRF。此测定方法的确立,为研究高原鼠兔低氧神经内分泌适应机理,开拓了新路。     

根田鼠下丘脑促性腺激素释放激素的放射免疫学测定

利用大鼠促性腺激素释放激素放射免疫学测定试剂检测了根田鼠下丘脑促性腺激素释放激素水平．测定线性范围为2.5 Pg至160pg/管,批内和批间差为1.7％ (n=10)和7.8%（n=4),样品平均标准回收率为108.2±8.4％。根田鼠下丘脑促性腺激素释放激素测定为0.28±0.04 ng/mg湿重组织。从根田鼠下丘脑提取物稀释曲线与大鼠(人工合成)促性腺激素释放激素有较好的平行关系判断, 可以推知根田鼠下丘脑促性腺激素释放激素结构活性类似于大鼠(人工合成)的活性。     

CRF也能调节垂体中叶和后叶

下丘脑的促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)可强烈刺激在体垂体前部促肾上腺皮质激素(ACTH)的分泌。最近,用组织化学方法显示,在垂体柄和垂体后部存在CRF免疫反应阳性纤维。还有实验表明,CRF也影响垂体中叶肽类物质的释放。这些结果提示:CRF可能对垂体后部及中间部均起一定的作用。Saavedra等用放射免疫测定法观察完全切断垂体柄对大鼠垂体中间部及后部CRF样物质含量的影响。结果表明,假手术组大鼠垂体中叶及后叶的CRF含量分别为591±78和487±34ng/mg蛋白,而切断垂体     

新生大鼠下丘脑CRF和AVP神经元对急性低氧的应答

目的:观察肾上腺摘除新生大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)和精氨酸加压素(AVP)神经元对急性低氧的应答.方法:在低压氧舱中模拟高海拔低氧,用放免法测定AVP和CRP含量.结果:新生大鼠暴露于急性低氧环境下(模拟5 000 m和7 000 m海拔高度,24 h),其下丘脑CRP在3 d和7 d龄大鼠中无明显变化,但14d、21 d和28 d时低于对照;下丘脑AVP在3 d大鼠中亦无变化,但14 d时低于对照,7 d、21 d及28 d时高于对照.两者对低氧的应答模式随日龄而变化.摘除肾上腺后,14 d、21 d及28 d大鼠下丘脑CRF和AVP含量均显著低于同龄完整大鼠,此时暴露于急性低氧环境下,CRF和AVP无进一步的变化.结论:摘除肾上腺抑制下丘脑CRF和AVP的发育,影响它们对低氧应激的正常应答.     

损毀大鼠下丘脑室旁核、后区和视前区对折骨所致血浆皮质酮变化的影响

国内外近年工作表明,产生促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)的神经元胞体大多数不在内侧基底下丘脑(MBH),而在MBH以外的下丘脑区。但CRF神经元轴突则经过视交叉后区、MBH而到达中隆部和神经叶。电刺激大鼠和狗的下丘脑室旁核(PVH),ACTH释放增加。破坏PVH后,中隆部神经分泌物质减少。许多实验表明,在中隆部释放CRF的轴突末梢可     

模拟高原低氧对不同性别新生大鼠下丘脑 CRF和AVP水平的影响

目的:探讨高原低氧对雌雄新生大鼠下丘脑-腺垂体-肾上腺皮质轴中枢部位肽能神经元发育的影响.方法:在低压氧舱中模拟高海拔低氧,用放免法测定精氨酸加压素(AVP)和下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)含量.结果:无论是在2 300 m对照海拔,还是在5 000 m模拟海拔,雌雄生后大鼠具相同的发育模式.低氧下发育至21 d时,CRF水平显著低于对照;相反,21 d及28 d时,低氧组AVP水平高于对照.结论:下丘脑CRF和AVP神经元间不同的发育模式可能与它们的功能及发育阶段特性相异有关.     

低氧暴露对大鼠下丘脑CRF分泌的影响

目的和方法：利用人工模拟低氧及放射免疫测定（RIA）法,观察不同低氧（5km,7km）暴露对大鼠下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放激素（C orticotropin-releasing factor,CRF）的作用和血浆皮质酮水平的变化。比较低氧暴露不同时间（2h,24h,5d,15d）后,大鼠下丘脑CRF分泌和血浆皮质酮的变化。结果：低氧暴露2h,24h后下丘脑的CRF分泌明显增加,血浆皮质酮水平显著升高,这种变化随着低氧程度的加深而增强,随着低氧暴露时间的延长（5d）上述变化减弱。至慢性低氧暴露15d后,下丘脑CRF分泌及血浆皮质酮水平与对照组相比已无显著差异,基本恢复到对照水平。结论：动物暴露于低氧环境后,下丘脑CRF分泌及血浆皮质酮水平变化为：低氧暴露2h,24h后CRF分泌和皮质酮分泌被激活;低氧暴露5d后CRF分泌和皮质酮分泌活动减弱,并开始恢复;至低氧暴露15d后,这种分泌活动基本恢复,进入恢复期。     

大鼠睾丸中发现促皮质素释放因子

近年来发现睾丸可产生几种调节肽,作为不同细胞间通讯的介质。最近美国纽约大学的一篇报告提出,促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)的免疫活性物质存在于大鼠睾丸。用免疫细胞化学方法发现,睾丸间质细胞、生精细胞有很强的 CRF 特异性着色,附睾精子亦有阳性反应。放免测定结果表明,出生后60～90天的成年大鼠,睾丸 CRF 的含量为51～74ng/g,而外周血中含量低于0.05 ng/ml。还发现,睾丸中 CRF 含     

糖尿病大鼠下丘脑Nesfatin-1对胃运动的影响及机制研究

目的:探讨下丘脑腹内侧核Nesfatin-1对正常大鼠及糖尿病大鼠胃运动的影响及其潜在机制。方法:正常大鼠随机分为0.08μg,0.8μg,8.0μg/0.5μL Nesfatin-1组;30μg/0.5μL astressin-B组;(0.8μg Nesfatin-1+30μg astressin-B)/0.5μL组;0.5μL生理盐水(NS)组;正常羊血清+假刺激(NR+SS)组;正常羊血清+电刺激(NR+ES)组;抗NUCB2/Nesfatin-1抗体+假刺激(anti-Nn-Ab+SS)组;抗NUCB2/Nesfatin-1抗体+电刺激(anti-Nn-Ab+ES)组。制作糖尿病大鼠模型,将糖尿病大鼠随机分为0.08μg/0.5μL Nesfatin-1组;0.8μg/0.5μLNesfatin-1组;8.0μg/0.5μL Nesfatin-1组;0.5μLNS组;NR+SS组;NR+ES组;anti-Nn-Ab+SS组;anti-Nn-Ab+ES组。大鼠胃部置入感应器后腹内侧核置管,记录清醒大鼠胃运动及电刺激海马CA1区后的胃运动。结果:与生理盐水组相比,下丘脑腹内侧核注射不同浓度Nesfatin-1,大鼠胃收缩幅度和频率显著降低,下丘脑腹内侧核注射0.5μL(0.8μg Nesfatin-1+30μg astressin-B)混合液后,相比单独给予0.8μg Nesfatin-1组,大鼠胃收缩幅度和频率显著升高。大鼠下丘脑腹内侧核注射0.5μL Nesfatin-1(0.8μg),大鼠胃收缩幅度和频率显著降低,下丘脑腹内侧核注射0.5μL(0.8μg Nesfatin-1+30μg astressin-B)混合液后,相比单独给予0.8μg Nesfatin-1组,大鼠胃收缩幅度和频率显著升高。下丘脑腹内侧核注射抗NUCB2/Nesfatin-1抗体后再电刺激海马CA1区,与正常羊血清+电刺激组相比,大鼠胃收缩幅度和频率进一步增强,下丘脑腹内侧核注射抗NUCB2/Nesfatin-1抗体后再电刺激海马CA1区,与单独注射抗NUCB2/Nesfatin-1抗体+假电刺激组相比,大鼠的胃收缩幅度和频率显著增高。下丘脑腹内侧核注射抗NUCB2/Nesfatin-1抗体后再给予电刺激海马CA1区,与正常羊血清+电刺激组相比,正常大鼠和糖尿病大鼠胃运动指数均显著增加,下丘脑腹内侧核注射抗NUCB2/Nesfatin-1抗体后再电刺激海马CA1区,与单独注射抗NUCB2/Nesfatin-1抗体+假电刺激组相比,正常和糖尿病大鼠的胃运动指数均显著增高。与正常大鼠相比,电刺激海马CA1区、下丘脑腹内侧核注射抗NUCB2/Nesfatin-1抗体后再给予电刺激海马CA1区,或下丘脑腹内侧核微量注射抗NUCB2/Nesfatin-1抗体,糖尿病大鼠胃运动指数均无显著差异。结论:海马-下丘脑Nesfatin-1信号通路参与胃传入信息和胃运动调控,该作用可能与CRF系统活动有关。     

孤束核参与刺激下丘脑室旁核的镇痛作用

本实验用电刺激鼠尾-嘶叫法测痛,观察电刺激下丘脑室旁核的镇痛效应,并采用核团损毁和核团内微量注射药物等方法分析其镇痛通路。实验结果如下:(1)电刺激下丘脑室旁核能产生明显的镇痛效应。同时,放射免疫测定发现脑干加压素含量升高。(2)损毁孤束核能取消刺激下丘脑室旁核的镇痛效应,但对基础痛阈无影响。(3)孤束核内微量注射加压素拮抗剂[d(CH_2)_5 TYr(Me)-AVP]60ng/0.6μl 和加压素抗血清0.6μl 都可明显对抗刺激下丘脑室旁核的镇痛效应。(4)直接在孤束核内微量注射加压素60ng/0.6μl,能模拟刺激下丘脑室旁核的镇痛效应。实验结果表明:电刺激下丘脑室旁核能产生镇痛效应,其机理之一可能是兴奋了下丘脑室旁核中加压素能神经元胞体,后者通过下行投射纤维在孤束核中释放加压素,影响孤束核神经元的活动,从而产生镇痛。     

急性低血糖应激对大鼠下丘脑orexin-A表达的影响

目的研究胰岛素诱导的急性低血糖应激对大鼠下丘脑增食欲素-A(orexin-A)的表达影响。方法通过皮下注射胰岛素建立急性低血糖大鼠模型。采用免疫组织化学染色方法观察大鼠下丘脑orexin-A和Fos双标情况,并采用ELISA方法对脑脊液中的orexin-A含量进行检测。结果禁食组、低血糖进食组和低血糖禁食组阳性神经元计数明显高于对照组(P0.05),但三组之间计数比较差异无统计学意义(P0.05);Orexin-A/Fos双标细胞率(双标细胞占orexin-A阳性细胞的百分率)在低血糖禁食组最高,与禁食组和低血糖进食组比较差异有统计学意义(P0.05)。ELISA检测结果显示,低血糖禁食组脑脊液中的orexin-A含量显著高于其它三组,差异有统计学意义(P0.05)。结论急性血糖的降低可以增强大鼠下丘脑中orexin-A的表达,而摄食行为可以抑制此调控效应。     

Lewis大鼠下丘脑中肾阳虚相关mRNA表达及超微结构观察

目的通过对Lewis大鼠下丘脑肾阳虚相关基因表达和超微结构的观察,进一步对Lewis大鼠肾阳虚体质进行研究。方法采用Lewis大鼠与皮下注射氢化可的松法的肾阳虚模型进行比较,并通过检测各组大鼠下丘脑中TNF-α、IFN-γ、IL-10、CRH、MR、GR mRNA表达和下丘脑、肾上腺组织超微结构的观察等,对Lewis大鼠肾阳虚体质机制进行研究。结果与正常Wistar大鼠比较,Lewis组大鼠下丘脑GR、IL-2 mRNA表达明显升高(P0.01),而下丘脑CRH、TNF-α、IFN-γ、IL-10 mRNA表达明显降低(P0.01);Lewis大鼠肾上腺皮质束状带略变薄,线粒体减少,且有轻微变形肿胀;Lewis大鼠下丘脑神经元细胞体胞核大,核形不规则,线粒体明显减少,神经细胞突触减少,突触前部的分泌小泡减少。结论 Lewis大鼠下丘脑和肾上腺存在一定程度的超微结构改变,且免疫相关细胞因子和CRH mRNA的异常表达,这可能与其自身HPA轴的功能失衡有关。     

化湿液对湿阻证大鼠下丘脑AchE、NOS活性及NO含量的影响

目的研究化湿液对湿阻证模型大鼠下丘脑AchE、NOS活性及NO含量的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组及模型组 化湿液低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余4组用改进后的环境加疲劳法制造湿阻证模型,连续造模6d。造模成功后,正常组和模型组大鼠按2ml/100g的剂量灌胃给予生理盐水;化湿液低、中、高剂量组分别按含生药0.4g/100g、0.8g/100g、1.6g/100g的剂量灌胃给予化湿液。每天1次,连续8d。取大鼠下丘脑,检测下丘脑AchE、NOS活性及NO含量。结果与正常组比较,模型组大鼠下丘脑AchE活性明显升高,NOS活性及NO含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,化湿液可降低湿阻证模型大鼠下丘脑AchE的活性,提高下丘脑NOS活性及NO含量(P<0.05)。结论化湿液具有改善湿阻证大鼠下丘脑AchE、NOS活性及NO含量的作用,对研究化湿液治疗湿阻证的机制有一定价值。     

中枢注射下丘脑生长激素释放因子可刺激大鼠进食

从人类胰腺肿瘤(hp GRF)和大鼠下丘脑(rh GRF)中已分别提纯出下丘脑生长激素释放因子(GRFs)。GRF 与胰高血糖素,血管活性肠肽及PHI 结构相似,它除了有很强的促进生长激素释放的作用外,尚朱发现有其他生理功能。GRF 位于下丘脑腹内侧核边缘,这是与进食行为有密切关系的中枢部位。最近,加拿大多伦多大学F.J.Vaccarino 等发现,脑室注射GRF,在0.21-20.0pmol 剂量范围内,可明显增加饥     

下丘脑八肽胆囊收缩素对大鼠胃窦运动的作用

下丘脑外侧区(LH)和腹内侧区(VMH)微量注射10ng八肽胆囊收缩素(CCK-8)明显抑制清醒大鼠胃窦运动,这一作用可被切断隔下迷走神经所减弱,被阿托品或酚妥拉明静脉灌流所阻断,表明迷走和交感神经都介导CCK-8作用。同时,在LH注射CCK-8后,迷走背核神经元自发放电活动明显减弱。LH微量注射抗CCK-8血清则明显刺激大鼠胃运动,表明在基础状态下,内源性CCK-8对胃窦运动有持续性抑制作用。用免疫组化PAP法显示出在LH和VMH都有CCK-8免疫反应性神经元存在。     

膳食甘油二酯对SD大鼠食欲及下丘脑神经肽Y基因表达的影响

研究膳食甘油二酯对SD大鼠食欲和下丘脑神经肽Y基因表达的影响。方法:将大鼠随机分成三组:5%(wt)甘油三酯组(对照组),20%(wt)甘油三酯组(TG组)和20%(wt)1,3—甘油二酯组(DG组)。大鼠喂养10W,每天记录进食量,每周称体重,于第10周末处死大鼠,称体重和内脏脂肪,计算脂体比,测定血糖、血脂和各种激素水平,RT-PCR的方法检测大鼠下丘脑神经肽Y mRNA表达水平。结果:高甘油二酯组与高甘油三酯组比较,改善体重的增加及内脏脂肪的积累,降低大鼠血糖、血甘油三酯(TG)、胰岛素水平,同时降低大鼠下丘脑神经肽Y mRNA的表达水平。结论:甘油二酯降低脂肪积累和改善血脂水平的可能机制是改变下丘脑有关控制食欲的基因表达,进而影响了脂肪代谢的平衡。     

大鼠发情期和间情期下丘脑ghrelin mRNA的表达

为探索下丘脑ghrelin mRNA及GnRH mRNA在大鼠(Rattus norregicus)发情期和间情期的表达特点,通过外部观察和阴道涂片相结合的方法确定发情期和间情期,将12只未经产SD雌性大鼠分为2组,即发情期组和间情期组,每组6只。取动物下丘脑,用实时荧光RT-PCR方法检测ghrelin mRNA和GnRH mRNA的表达丰度。结果表明,间情期组大鼠下丘脑ghrelin mRNA的表达丰度显著高于发情期组(P<0.01);间情期组大鼠下丘脑GnRH mRNA的表达丰度显著低于发情期组(P<0.01)。研究发现,下丘脑ghrelin mRNA和GnRH mRNA在发情期与间情期具不同的表达模式,提示ghrelin可能在下丘脑水平上对GnRH mRNA的表达具下调作用。     

阉割和睾丸酮替代对雄性老年大鼠下丘脑和血浆促黄体生成素释放激素水平的影响

应用放射免疫分析(RIA)技术比较了年青(2—3月龄)和老年(24—26月龄)雄性大鼠下丘脑和血浆促黄体生成素释放激素(LHRH)水平及其在睾丸切除(ORDX)和睾丸酮(T)替代下LHRH水平的变化。老年大鼠血浆T水平明显降低,下丘脑LHRH含量亦呈明显下降趋势,但血浆LHRH水平与年青大鼠十分接近。在ORDX和T替代下,两组动物血浆T水平没有明显差别,但老年大鼠下丘脑和血浆LHRH的变化率却不同程度地低于年青大鼠。上述结果提示,老年雄性大鼠下丘脑LHRH神经元系统的负反馈能力明显削弱,这也许是下丘脑-垂体-睾丸轴呈增龄性衰变的重要原因之一。