人乳头瘤病毒E6及E7蛋白研究进展

高危型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的Ｅ６及Ｅ７蛋白是致瘤蛋白，均有锌指结构，致瘤方式都是作用于抑癌蛋白使细胞周期紊乱，Ｅ６还能激活端粒酶，使细胞不能正常凋亡，对Ｅ６及Ｅ７免疫表位的研究表明，Ｅ７及Ｅ７蛋白的鼠Ｔ细胞表位均在Ｃ端区及锌指区，但其ＨＬＡ－Ａ表位除了存在于锌指区，也存在于Ｎ端区，Ｅ６及Ｅ７蛋白的结构，功能及免疫表位的研究为防治ＨＰＶ疾病奠定了基础。     

Epstein-Barr病毒诱导永生化人上皮细胞恶性转化

为了使ＥＢ病毒能直接感染人上皮细胞,将ｐＳＧ－ＣＲ２－Ｈｙｇ载体转入永生化人上皮细胞（２９３细胞）中。通过间接免疫荧光法测定发现,转化的细胞表达ＥＢ病毒受体。用ＥＢ病毒感染ＣＲ２－２９３细胞后,２３％的细胞可表达ＥＢ病毒抗原。用ＴＰＡ作用于这些细胞后,表达病毒抗原的细胞数增加。用ＰＣＲ法从ＥＢ病毒感染细胞ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒ＤＮＡＷ片段。在ＴＰＡ持续作用下,ＥＢ病毒感染细胞的形态特征发生改变。把ＥＢ病毒感染细胞接种在裸鼠皮下,每周注射ＴＰＡ,可诱导细胞在裸鼠体内形成肿瘤。经组织病理检查确诊,肿瘤为低分化上皮细胞癌。杂交试验证明,肿瘤组织细胞中有ＥＢ病毒ＥＢＥＲｓ存在。上述结果表明,ＥＢ病毒在ＴＰＡ协同作用下,可诱导永生化上皮细胞恶性转化。     

Epsten—Barr病毒诱导永生化人上皮细胞恶性转化

为了使ＥＢ病毒能直接感染人上皮细胞,将ＰＳＧ－ＣＲ２－Ｈｙｇ载体转入永生化人上皮细胞（２９３细胞）中。通过间接免疫荧光法测定发现,转化的细胞表达ＥＢ病毒受体。用ＥＢ病毒感染ＣＲ２－２９３细胞后,２３％的细胞可表达ＥＢ病毒抗原。用ＴＰＡ作用于这些细胞后,表达病毒抗原的细胞数增加,。用ＰＣＲ法从ＥＢ病毒感染细胞ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒ＤＮＡＷ片段。在ＴＰＡ持续作用下,ＥＢ病毒感染的形态特征发生改变。把Ｅ     

草鱼出血病病毒多肽的基因定位

用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化的草鱼出血病病毒ＧＣＨＶ８７３的基因组ｄｓ－ＲＮＡ的１１个片段,分别在麦胚无细胞翻译体系中进行翻译。其翻译产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ系统分析。结果表明,基因组片段１、２、３、４、５、和１０分别编码病毒核心衣壳的结构多肽ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４、ＶＰ５和ＶＰ１０,片段６和７分别编码病毒外层衣壳的结构多肽ＶＰ６和ＶＰ７。片段８和９分别编码５２ｋＤ和４１ｋＤ的多肽,片段１１编码两种多肽,分子量分别为２９ｋＤ和１９．５ｋＤ,它们与病毒结构多肽无明显对应关系。病毒基因组与多肽大体是一一对应的关系。     

人乳头状瘤病毒诱导人胚食管上皮永生化细胞恶性转化

为了证实ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因诱导的人胚食管上皮永生化细胞（ＳＨＥＥ）６１代（ＳＨＥＥ６１）部份细胞（ＳＨＥＥ６１Ａ）已经恶性转化,以寻找监控细胞早期恶性转化的方法。对培养的ＳＨＥＥ第１０代（ＳＨＥＥ１０）和６１代（ＳＨＥＥ６１）细胞,用光学是为微镜和电子显微镜观察细胞形态及生长形式;用流工细胞仪分析细胞周期;用染色体Ｇ带核型分析和间期核染色体１、７、８号着丝粒探针荧光原位杂交９ＦＩＳＨ）检测细胞     

从病人外周血单个核细胞中检测HHV—6：分离培养和基因扩增

收集婴幼儿急疹及淋巴系统增生性疾病患者外周血单个核细胞进行体外培养,从７例婴幼儿急疹及２例淋巴系统增生性疾病患者中分离出一种病毒,此病毒能在ＰＨＡ激活的人脐血单个核细胞中传代生长,产生典型ＣＰＥ：形成气球样巨细胞。电镜下观察,感染细胞中可见直径１８０ｎｍ左右,有包膜,疱疹样病毒颗粒;血清学试验证明分离株与ＨＳＶ－１,２、ＨＣＭＶ、及ＥＢＶ无抗原交叉,而与ＨＨＶ－６ＧＳ株间存在抗原一致性;多聚酶链反     

从病人外周血单个核细胞中检测HHV－6：分离培养和基因扩增

收集婴幼儿急疹及淋巴系统增生性疾病患者外周血单个核细胞进行体外培养,从７例婴幼儿急疹及２例淋巴系统增生性疾病患者中分离出一种病毒,此病毒能在ＰＨＡ激活的人脐血单个核细胞中传代生长,产生典型ＣＰＥ：形成气球样巨细胞。电镜下观察,感染细胞中可见直径１８０ｎｍ左右,有包膜,疱疹样病毒颗粒;血清学试验证明分离株与ＨＳＶ－１,２、ＨＣＭＶ、及ＥＢＶ无抗原交叉,而与ＨＨＶ－６ＧＳ株间存在抗原一致性;多聚酶链反应表明该分离株ＨＨＶ－６特异性ＤＮＡ阳性;综合以上结果,初步认为该分离株为ＨＨＶ－６。同时还用ｐＣＲ法对所收集的标本直接检测ＨＨＶ－６特异性ＤＮＡ。ＰＣＲ法与病毒分离法相比较,前者ＨＨＶ－６检出率为８８．８％（１６／１８）．后者为３８．９％（７／１８）。     

人乳头瘤病毒16型E7基因的体外扩增及其克隆和序列分析

人乳头瘤病毒１６型Ｅ７基因是转化基因。作者设计了一对ＰＣＲ引物,在引物的５′端分别引入ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切序列,以ＨＰＶ１６ＤＮＡ为模板成功地扩增出Ｅ７基因。通过ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切位点将Ｅ７基因定向克隆入ｐＵＣ１８载体,经过ＰＣＲ、酶切分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交鉴定得到Ｅ７重组克隆ｐＨＳＥ７、ＤＮＡ序列分析表明所克隆的Ｅ７基因与已发表的ＨＰＶ１６Ｅ７基因序列完全一致且读框正确。     

鸡减蛋综合征病毒（EDSV—76）基因组E1区结构特点分析

ＥＤＳＶ－７６病毒中国株ＡＡ－２经常规方法提取其病毒ＤＮＡ后,建立了限制性内切酶ＰｓｔＩ水解片段的全基因文库。对其中ＰｓｔＩ－Ｇ片段和ＰｓｔＩ－Ａ片段的正反链进行序列测定,获得ＥＤＳＶ Ｅ１区（０－８．８ｍ．ｕ）的核苷酸序列。经分析,ＥＤＳＶ Ｅ１区具有与其他腺病毒Ｅ１区类似的结构。以大于６０个氨基酸残基为标准,ＥＤＳＶ Ｅ１区共有７个开放读码框架（ＯＲＦ）,其中Ｒ１、Ｒ２、ＥｌｂｓＴ和Ｅ１ｂ１Ｔ     

人乳头瘤病毒16型长控制区上YY1结合位点的破坏可增强病毒诱导细胞永生化能力

细胞转录调节因子 Ｙ Ｙ１ 可抑制人乳头瘤病毒１６ 型（ Ｈ Ｐ Ｖ １６） 癌基因启动子 Ｐ９７ 的活性, Ｙ Ｙ１ 位点的突变和缺失不仅可诱导 Ｐ９７ 活性增强而且可在全基因组内增强 Ｅ６ 癌基因转录,同时使病毒对啮齿类动物纤维细胞的转化能力增强。为了观测人乳头瘤病毒１６ 型长控制区（ Ｈ Ｐ Ｖ１６ Ｌ Ｃ Ｒ） 序列上 Ｙ Ｙ１ 蛋白特异性结合位点破坏在完整基因组范围内对人原代包皮角源细胞永生化能力的影响,将 Ｈ Ｐ Ｖ １６ Ｙ Ｙ１ 位点突变株和野毒株转染至人原代包皮角源细胞。筛选结果表明,突变株可诱导形成永生化细胞,永生化能力明显高于野毒株。对４ 株永生化细胞系 Ｄ Ｎ Ａ检测发现,均含有呈整合状态的 Ｈ Ｐ Ｖ １６ Ｄ Ｎ Ａ,其中３ 株的 Ｅ１／ Ｅ２ 区域有缺失。 Ｒ Ｎ Ａ 检测显示,４株细胞内均有 Ｅ６／ Ｅ７ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的转录。这表明, Ｈ Ｐ Ｖ １６ Ｌ Ｃ Ｒ 上 Ｙ Ｙ１ 蛋白特异性结合位点的破坏,可在完整基因组范围内增强病毒使人原代包皮角源细胞永生化的能力。     

健康人肠道双歧杆菌和大肠杆菌数量在不同季节的动态观察

本文研究了季节因素对肠道重要菌群双歧杆菌和大肠杆菌的影响。在春、夏、秋、冬四季分别定量检测Ｔ２０名健康青年粪便中的上述两种菌,结果表明：两种细菌数值均有明显的季节变动规律,双歧杆菌秋季显著高于春、夏冬三季;大肠杆菌夏季显著高于冬、春季,而与秋季的差异无显著意义。ｚＬ歧杆菌与大肠杆菌在一年四季中的比值也有明显的季节特征,即秋季明显高于其它三季。     

中国人群(京津地区)载脂蛋白E基因多态性和表型分布的研究

本文利用作者建立的密度梯度超速离心分离VLDL的新方法和分析等电聚焦电泳,测定了95例中国人Apo-E基因多态性和其表型分布以及血脂水平。所得表型分布趋势与国外报告一致:E_3/E_3频率最高,E_3/E_2和E_3/E_4次之,E_4/E_4,E_4/E_2和E_2/E_2最低。同对发现中国人群的E_3/E_3表型百分分布明显高于西方人群,但未发现有E_2/E_2表型。我国人群Apo-E表型分布的这种特征可能与中国人群冠心病的患病率较西方人群为低有关。血清脂质测定和分析表明,具有不同表型人群的血脂水平无显著的统计学差异。     

维生素E对体外培养的人脐静脉内皮细胞白介素-8表达的影响

目的探讨维生素E(α-生育酚)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)白介素-8(IL-8)表达的影响.方法体外培养HUVEC,将其随机分为正常对照组和实验组,实验组细胞在用激动剂脂多糖(LPS)刺激之前,分别给予0、10、20、30mg/Lα-生育酚,然后在6h、24h、48h三个时段,利用双抗体夹心酶联免疫吸附技术(ELISA)和原位杂交技术(ISH)检测各组细胞IL-8蛋白表达及mRNA表达水平.结果 (1)正常对照组IL-8有基础表达;(2)与正常对照组比较,ELISA和ISH的结果均显示LPS能够明显诱导IL-8高表达:蛋白表达增强约28倍(P<0.01),mRNA表达增强约4.3倍(P<0.01);(3)维生素E能够抑制LPS诱导的IL-8的表达:ELISA结果显示20mg/L-48hα-T处理组作用最强,IL-8蛋白表达减少72.7%(P<0.01);ISH结果显示20mg/L -24hα-T处理组作用最强,IL-8mRNA表达减少73.2%(P<0.01).结论维生素E可显著抑制LPS诱导的HUVEC高表达IL-8,表明维生素E可通过影响对动脉粥样硬化有重要作用的IL-8的表达来发挥其抗动脉粥样硬化作用.     

人乳头瘤病毒HPV16 E7蛋白基因在沙门氏菌疫苗菌株X4072中的表达

采用ＰＣＲ方法,从ＨＰＶ１６型质粒中分离出ＨＰＶ１６Ｅ７基因片段,用ＥｃｏＲＩ和Ｓａｌｌ双酶解后,定向插入到表达质粒ｐＹＡ３３３２（ａｓｄ＋）的Ｐｔｒｃ启动子下游,构建成ｐＹＡ３３３２－ＨＰＶ１６－Ｅ７重组表达质粒。在大肠杆菌Ｘ６２１２上筛选出重组质粒后,通过中间菌株Ｘ３７３０的转化过渡,将重组质粒导入鼠伤寒沙门氏减毒疫苗菌株Ｘ４０７２（ａｓｄ－）,构建成宿主和载体之间具有平衡致死结构的ＨＰＶ１６     

p27蛋白和Cyclin E在食管鳞状细胞癌的表达及意义

目的　探讨 p2 7和CyclinE在食管鳞状上皮和鳞癌细胞中的表达特点及意义。方法　收集正常食管鳞状上皮粘膜组织和不典型增生的食管粘膜组织共 41例 ,食管鳞状细胞癌组织 73例 ,采用S P免疫组织化学方法进行染色。结果　CyclinE和 p2 7在正常鳞状上皮中无阳性表达 ;不典型增生上皮组阳性率分别为 3 3 3 3 % ( 7/ 2 1)和 2 3 80 % ( 5 / 2 1) .在鳞癌中CyclinE和 p2 7阳性率分别为 5 3 42 % ( 3 9/ 73 )和 2 7 40 % ( 2 0 / 73 ) .经统计 ,CyclinE与癌组织分化程度有关 ,低分化组阳性率明显高于中、高分化组 (P <0 0 5 ) ;而p2 7在高分化组阳性率明显高于低分化组 (P <0 0 5 ) ;两者差异显著 (P <0 0 5 )。结论　p2 7和CyclinE表达与食管鳞癌的生物学行为有关。CyclinE过表达是食管鳞癌恶性度较高的指标 ,而p2 7过表达是恶性度较低的指标     

人和猴T淋巴细胞表面TRBC受体和E受体的比较研究

TRBC受体不同于已知的全T细胞表面分化抗原CD2,CD3/TCR复合物,CD5,CD6和CD7。CD2分子不参与TRBC玫瑰花结的形成,也不是介导E花结的唯一分子。至少有两个或两个以上蛋白质与TRBC玫瑰花结和E花结的形成有关,其中有的分子为E受体和TRBC受体所共有。因此,很可能有不同于CD2的分子参与了TRBC玫瑰花结的形成。     

人胰岛素A、B链基因的合成、克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据人胰岛素A、B链的多肽顺序,设计并用一种简便快速的多肽基因合成了A、B链基因。合成的A 链和B 链基因分别克隆到pWR590质粒上,构建了表达型质粒pWR590-HIA和pWR 590-HIB,它们能够表达由β-半乳糖苷酶N-端约590个氨基酸残基与A 链或B 链组成的融合蛋白(两者之间由Met 连接)。A 链或B 链融合蛋白经BrCN 降解,磺化及分离纯化等步骤,得到了磺化A、B 链。磺化A、B链体外重组得到人胰岛素。     

大肠杆菌诱导U937细胞凋亡过程中bcl-2和bax基因的表达

目的研究bcl-2和bax在大肠杆菌诱导U937细胞凋亡中的作用。方法U937细胞的凋亡用AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪技术测定。Bcl-2和bax基因表达用RT-PCR法测定。结果当细胞与细菌浓度比分别为0,1:5,1:10,1:20,1:50及1:100时作用30min均可诱导U937细胞凋亡,凋亡率分别为3·16%±0·90%,9·46%±0·84%,17·90%±1·41%,35·59%±3·76%,38·35%±7·12%和55·07%±5·82%,呈浓度依赖性。在细胞凋亡过程中bcl-2和bax的表达均呈现趋势变化,bax表达逐渐增强,bcl-2表达逐渐减弱。结论E.coli可诱导U937细胞凋亡;其机制涉及bcl-2表达下调和bax表达上调。