紫菜苔芬粉超低温保存及其原生质体分离

研究了紫菜苔花粉超低温保存的影响因素：花粉发育时期,冰冻保护剂与隆温程序。建立了较适宜的保存流程。保存６０、９０天期间,成熟花粉与近成熟花粉生活力保持不变,幼嫩花粉生活力稍有下降。前二与后相对存活率分别达９１％与８４％左右。保存的和新鲜的幼嫩花粉经培养均能诱导脱分化,发生细胞分裂。改进和简化了紫菜苔成熟花粉原生质体分离技术,并在其幼嫩花粉原生质体分离上取得成功。保存的成熟花粉化冻后直接酶解,原     

甘蓝型油菜叶柄原生质体培养再生植株

Two cultivars of Brassica napus,Altex and Canadian twins,were used as materials.Protoplasts isolated from petioles of plants grown in vitro were cultured in Nitsch mediumsupplemented with 0.5mg/L BA,0.5mg/L NAA,1mg/L 2,4-D,100mg/L serine,800mg/Lglutamine,4% sucrose and 0.4mol/L mannitol.After 2 days of culture,the first division wasobserved.The division frequency estimated after 10 days of culture was 30—60%.One weekafter transferring onto MS medium containing 6mg/L GA_3 and 3mg/L BA,protoplast-derivedcalli regenerated into shoots.The regeneration frequency of the two cultivars was 24% and31% respectively.It was found that the protoplasts isolated from petioles could float on thesurface of the 3% sucrose contained solution which was very favourable both to purificationand culture of the protoplasts.     

甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养的研究

从甘蓝型油菜下胚轴分离纯化原生质体。种子萌发时进行光照处理对原生质体产率影响不大,但可提高其活力。对液体浅层、固体平板和“琼脂岛”3种培养方法进行比较,结果“琼脂岛”法效果最好,不但细胞分裂速度快,而且克隆形成频率高。再生的愈伤组织转到分化培养基上后迅速分化出芽。诱导生根后进行移栽,生长状况良好。     

甘蓝型油菜与蔊菜的原生质体融合与植株再生

以甘蓝型油菜下胚轴和蔊菜叶片为外植体提取原生质体, 采用PEG-高pH、高Ca²⁺附加DMSO的原生质体融合方法, 用液体浅层静置培养融合体, 获得了10株融合杂种, 观察了杂种形态学和细胞学。结果表明：1%纤维素酶+0.2%离析酶+3 mmol/L MES 酶解14 h 可获得较高产率的油菜原生质体, 0.25% 纤维素酶+0.5%离析酶+5 mmol/L MES酶解12 h可获得较高产率的蔊菜原生质体; 30% PEG + 0.3 mol/L葡萄糖+50 mmol/L CaCl₂•2H₂O +15%DMSO的融合条件下, 获得了10.4%的融合率; 实验所获的原生质体融合材料可作为新种质。     

Ogura CMS紫菜苔×萝卜×甘蓝型油菜杂种的获得及细胞遗传学研究

以OguraCMS紫菜苔×萝卜杂种F1(AR ,2n =19)为母本 ,以甘蓝型油菜 (AACC ,2n =38)为父本进行杂交 ,获得了 4棵杂种植株。其中 1株 (PRN 1)的花色为嵌合体 ,该植株上的花多为黄色 ,但是也有乳白色花 ,另外还有 1朵花甚至 1个花瓣上同时具有黄色和白色区域 ,其余 3株 (PRN 2、 3、 4 )都开白花。PRN 4的花药开花前退化 ,其余 3株都可以看到 3～ 6枚花药 ,能够产生部分花粉 ,但是PRN 2的花粉不能被I2 KI溶液染色。PRN 2具有 4个蜜腺 ,PRN 1和PRN 3具有 2个蜜腺 ,PRN 4无可见蜜腺。在低温下PRN 2叶色正常 ,其余 3株幼叶表现不同程度缺绿。PRN 1的染色体数目为 2n =38,染色体平均配对构型为 14 6 7Ⅰ +10 0 7Ⅱ +1 0 6Ⅲ ,其染色体组构成可能是AACR ;PRN 2的染色体数目为 2n =35 ,染色体平均配对构型为 13 89Ⅰ +8 33Ⅱ +1 33Ⅲ +0 11Ⅳ ,PRN 3的染色体数目为2n =33,染色体平均配对构型为 14 0 0Ⅰ +7 82Ⅱ +1 0 0Ⅲ +0 0 9Ⅳ。PRN 4的染色体数目未能确定。与甘蓝型油菜回交后PRN 1～ 3植株各自产生了一定数量的种子 ,而PRN 4则未产生种子。对这些杂种及其后代的遗传及育种意义进行了讨论     

芸苔属花粉—下胚轴原生质体融合再生杂种小植株

从青菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＬ．）单胞中后期至二胞早期花粉分离出原生质体,用聚乙二醇法诱导其与甘蓝型油菜（Ｂ．ｎａｐｕｓＬ．）下胚轴原生质体融合。通过控制双亲原生质体的数量与比率,提高了异源融合率。融合体在离体条件下发生细胞分裂,形成愈伤组织,再生了小植株。染色体计数与酯酶同工酶酶谱分析初步证明获得了１ 株异源三倍体,２ 株异源四倍体。这是以游离花粉时期的原生质体与体细胞原生质体融合,取得“配子－体细胞杂交”成功的首次报道     

三种植物花粉原生质体的大量分离与初步培养

利用花粉水合导致外壁破裂,使内壁得以酶解,分离出鸢尾（Iris tectorum Maxim),风雨花（Zephyranthes grandiflora Lindl)和萱草（Hemerocallis fulva L.)三种植物成熟花粉的原生质体。初步分离出萱草四分体至成熟花粉（单核早期除外）各时期的原生质体,经过纯化处理,获得较纯净的有生活力的原生质体群体,萱草花粉原生质体的培养实现了细胞壁再生,管状及其它多种结构的形成以及生殖核的一、二次分裂。     

用PEG法把外源基因导入甘蓝型油菜原生质体再生转基因植株

通过PEG处理把外源基因导入甘蓝型油菜原生质体。转化介质中二价阳离子的种类和浓度、携带DNA及PEG溶液的pH值都会影响基因导入效率。以潮霉素抗性和卡那霉素抗性作标记,均成功地筛选到了抗性愈伤组织。相对转化频率分别为1.3%和0.2%。前者明显高于后者。把抗性愈伤组织转到分化培养基上,分化出芽。诱导生根后移栽到土壤中,生长状况良好。酶活性测定和Southern blotting分析表明外源基因已插入到植物细胞基因组中。该遗传转化系统存在的主要问题是抗性愈伤组织分化频率较低。本文对其原因作了初步分析。     

甘蓝型油菜和白菜型油菜种间杂种的小孢子培养

利用分离小孢子培养从甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ）和白菜型油菜（Ｂ． ｃａｍ ｐｅｓｔｒｉｓ）种间杂种中获得了胚和再生植株。所用的培养程序是,将甘蓝型油菜和白菜型油菜杂种小孢子在蔗糖浓度为１７％ 、ＢＡ 为０．１ ｍ ｇ／Ｌ的液体ＮＬＮ 培养基中３２ ℃下暗培养４８ ｈ,再转入蔗糖浓度为１０％ 的ＮＬＮ 培养液中２５ ℃下暗培养３ 周。不同杂种间小孢子胚胎发生能力存在差异,其中ＵＭ９２１（白菜型油菜）×９１１１８６（甘蓝型油菜）正反交杂种的胚产量显著高于供试的其它组合。供体植株种植在１０ ℃／５ ℃（昼／夜）条件下能显著改善杂种小孢子胚产量和质量。杂种小孢子胚产量和杂种植株每荚种子数存在极显著正相关,但杂种植株的花粉育性和胚产量间相关不显著。大多数甘蓝型油菜和白菜型油菜杂种小孢子胚衍生植株为非整倍体,２２．８％ 的植株起源于具亲本染色体数的小孢子,几乎全部为ｎ＝ １９ 的类型。讨论了影响种间杂种小孢子胚胎发生的因素以及种间杂种小孢子培养技术的可能用途     

Release of Pollen Protoplasts in Large Quantities in Brassica napus and B. compestris var. purpurea

Protoplasts were released in large quantities from mature pollen of Brassica napus L. and B. campestris var. purpurea for the first time, with a yield up to 66.7% and 70.4% respectively. Most of the pollen protoplasts were viable as tested by fluorochromatic reaction with fluorescein diacetate. The success of isolation of pollen protoplasts in these two Brassica species relied on a technique modified from the previous method developed for several monocotyledonous flowers. The procedure included two steps: First, the pollen was hydrated in 1 mol/L of sucrose solution at 28–30℃ for ca. 9h. During this process, the exine of most pollen dehisced and was detached from the pollen grains which were then covered by intine alone. Second, the hydrated pollen was transferred into an enzyme solution containing 1% cellulase, 1% pectinase, I mol/L mannitol, 0.5% potassium dextran sulphate and Ks medium salts. After 4–6 of enzymatic maceration, the intine was degradated resulting in the release of protoplasts. Factors affecting the two steps have been investigated.     

菜心下胚轴原生质体培养和植株再生

以萌发３—４ 天（长约４ ｃｍ ）的菜心（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｖａｒ．ｐａｒａｃｈｉｎｅｓｉｓ）无菌苗苍白下胚轴为材料,酶解分离原生质体。经纯化的原生质体,在含０．５ ｍ ｇ／ＬＺＴ、０．５ ｍ ｇ／Ｌ２,４－Ｄ、１．０ ｍ ｇ／ＬＮＡＡ 和０．４ ｍ ｏｌ／Ｌ葡萄糖的Ｋ８ｐ 培养基中,进行微滴培养。在起始培养１４—１８小时,原生质体再生新的细胞壁。３６ 小时再生细胞开始第一次分裂。第三天分裂细胞频率可达３５％ 。培养第８—９ 天,可见含８—１６个细胞的小细胞团,植板率为１５％ —１８％ 。３ 周后将发育成直径为２ ｍ ｍ 的白色小愈伤组织,转到含０．３ ｍ ｇ／Ｌ ２,４－Ｄ并用ｇｅｌｒｉｔｅ半固化的培养基上,增殖成４—５ ｍ ｍ 直径的愈伤组织。在ＭＳ＋ ３．２（或１．６） ｍ ｇ／Ｌ ＢＡ＋ １．６（或０．８） ｍ ｇ／ＬＺＴ＋ ０．０１ ｍ ｇ／Ｌ ＮＡＡ＋ ０．１ ｍ ｇ／ＬＧＡ３ 和０．２％ 蔗糖的分化培养基上,获得芽的分化。切下约２ ｃｍ 长的芽苗,转移到含０．２ ｍ ｇ／ＬＩＡＡ 和２％ 蔗糖的培养基上,生根形成完整植株     

影响油菜子叶外植体不定芽高频率再生的因素

采用７个甘蓝型和２个白菜型油菜品种研究了影响子叶外植体芽再生的一些因素和不同基因型的子叶外植体的离子体培养反应和芽再生能力。结果表明,苗龄４ｄ的幼苗叶子含２,４－Ｄ０．５－１．２ｍｇ／Ｌ和６－ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ的培养基培养２或６ｄ后再转到分化培养基上培养,芽再生率３４％－４６％。     

改良菜心离体培养植株再生体系的研究(简报)

菜心(Brassica campestris L.subsp.chinensis Makino var.parachinensis Tsen et Lee)为十字花科芸薹属芸薹种中国白菜亚种中的一个变种,又名“菜薹”。它是我国南方特产蔬菜之一,在蔬菜的周年供应上有重要地位。目前迫切需要培育抗病虫、抗逆和具有其他优良农艺性状的新品种,以提高菜心的     

热胁迫下不结球白菜和甘蓝叶片组织结构的变化

利用显微及扫描电镜方法,研究不结球白菜及甘蓝的耐热品种和感热品种种在高温（３８－３９℃）胁迫下,叶片表皮和组织结构的差异。结果如下：耐热品种叶片下表皮比感热品种气孔频度高,气孔体积小且开张度小。耐热品种部分气孔呈关闭状态,而感热品种气孔基本上呈开放状态。显微结构观察到耐热品种叶肉组织细胞排列紧密,叶脉的维管束发达,特别是木质部的导管数量多且孔径大。而感热品种相比于耐热品种叶肉细胞排列疏松,维管束相     

原生质体来源的大白菜悬浮细胞系的超低温保存

原生质体来源的大白菜 Brasstca campessris var.pekinsis 悬浮细胞系在二甲亚砜的保护下,能在液氮中(-196℃)长期冻存。加入山梨醇能增强保护作用;而加入甘露糖则降低保护作用。培养基对冻存也有明显的影响。在液氮中存放的时间长短对细胞存活率没有多大影响。冻后相对活性最高可达75.4％,恢复生长快,化冻后重新悬浮培养6天,生长量可达300-500％。遮光比不遮光对恢复更有利。冻存后恢复生长的悬浮细胞,能与未经冰冻的对照一样进行原生质体分离和培养。     

芥蓝与芸苔属几个常见种花粉形态的比较

本文通过对芸苔属(Brassica L.)几个常见种芥蓝(B. alboglabra Bailey)、芥菜(B.juncea(L. )Coss.)、油菜(B. campestris L.)和花椰菜(B. oleracea var. botrytis L.)等花粉形态的光学显微镜和扫描电镜的观察比较,得知它们的花粉形态特征比较一致。而与杨萍等关于芥蓝的花粉形态特征——无极,具散孔这一报道截然不同;亦与黄增泉(Huang Tseng-chieng)关于芥菜的花粉特征——不具萌发孔的报道不同。作者的研究表明,上述几个种的花粉均具3沟,沟长而明显。外壁具网状纹饰,网眼较粗。但种与种间其花粉大小有所不同。作者不同意杨萍等关于“由于芥蓝的花粉形态与芸苔属其它种的花粉明显区别,说明芥蓝与芸苔属其它种不很亲缘”的观点,而认为,从花粉形态看,芥蓝与芸苔属其它种是基本一致的,把它们置于同一自然类群是合理的。