茶多酚对几种植物病原真菌的抑制作用及机理研究

用不同浓度的茶多酚液对玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)和莲腐败病菌(Fusarium oxysporum f. sp.)进行抑菌测定.结果表明:茶多酚对三种植物病原真菌生长和分生孢子萌发都具有极显著的抑制作用(P<0.01);不同浓度的茶多酚液对同种植物病原真菌的抑制作用不同,随着茶多酚浓度的增大,其抑制力增强,其中10和5 mg/mL抑制力最强;茶多酚对三种不同的植物病原真菌的抑制程度也不同,其中对玉米小斑病菌的抑制效果最好,10和5 mg/mL茶多酚稀释液的分生孢子萌发抑制率达100%,且原生质外溢,细胞畸变.其作用机理是破坏了菌体的细胞膜结构和抑制了CAT、POD酶活,使其丧失细胞膜的屏障和酶系的保护功能.     

酶法制备壳寡糖对番茄灰霉病病菌抑制机理初探

目的：研究酶降解法制备的壳寡糖对番茄灰霉病病菌的抑制机理。方法：测定壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝发育、孢子萌发的抑制作用以及对菌丝形态、细胞膜透性和对菌丝体可溶性蛋白质含量的影响。结果：当壳寡糖处理浓度为1.5mg/mL以上时,对菌丝生长的抑制率达70%以上,EC50为0.72mg/mL。当处理浓度为6mg/mL时,对分生孢子的抑制率显著优于其他浓度水平,达87.4%,EC50为1.48mg/mL。显微观察,浓度为0.8mg/mL的壳寡糖处理可诱导菌丝分枝增多、菌体分隔增加,分生孢子形成受到抑制。此外壳寡糖能够引起菌丝细胞膜透性发生变化,造成菌丝体内含物的渗漏。壳寡糖处理66 h后,菌丝体可溶性蛋白含量比对照降低了36.7%。结论：壳寡糖对番茄灰霉病病菌抑制机理的探究为研究壳寡糖这一新型生物农药的作用机制提供依据。     

蒲公英植酸对沙门氏菌抑制作用及其抑菌机理研究

为探究蒲公英植酸对沙门氏菌的抑制作用及其抑菌机理。本文利用沉淀法和离子交换法提取蒲公英植酸,滤纸片法分析蒲公英植酸对沙门氏菌(Salmonella)的抑菌作用,倍比稀释法研究蒲公英植酸的最低抑菌浓度。通过分析沙门氏菌的细胞通透性和生长动力学,结合扫描电镜和荧光显微镜研究了蒲公英植酸对沙门氏菌的抑菌机理,表明蒲公英植酸对沙门氏菌具有很好的抑菌能力,其最小抑菌浓度为0.2 mg/mL。而且植酸对沙门氏菌的抑制作用是通过破坏细胞膜达到抑菌的效果,并且植酸浓度越高,抑菌效果越显著。这表明蒲公英植酸可以有效地抑制沙门氏菌生长,其主要是通过破坏菌体细胞膜完整性,增加细胞薄膜的通透性,使细胞内容物外溢达到抑制细菌生长的目的。     

复合生物保鲜剂对松鼠葡萄球菌的抑菌性能及其作用机理研究

以冷藏带鱼中分离出的革兰氏阳性优势菌——松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)为试验菌,研究复合生物保鲜剂(配比浓度为:壳聚糖10.0 g/L,溶菌酶0.3 g/L与茶多酚3.0 g/L)对松鼠葡萄球菌的抑菌效果与作用机理。通过牛津杯法确定复合保鲜剂对松鼠葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC),结合抑菌活力、细菌生长曲线、碱性磷酸酶(AKP)活性、细胞膜完整性、膜通透性与细菌超微结构观察等,综合评价不同浓度复合保鲜剂在不同处理时间内对松鼠葡萄球菌的作用效果。结果表明,复合保鲜剂对松鼠葡萄球菌的MIC与MBC分别为0.8与1.6 mg/mL,随着处理时间的延长,复合生物保鲜剂明显抑制松鼠葡萄球菌的生长,使菌体细胞外的AKP量增多,造成细菌菌体细胞壁通透性增大,细胞结构的完整性受到破坏,菌液电导率值显著升高,菌体电解质等内容物外泄,影响细胞内环境和细胞膜的稳定性,菌体皱缩变形,表面粗糙,细胞壁塌陷,细胞质外泄渗出,导致菌体死亡。     

茶多酚-柠檬提取物混合液对变形链球菌生长与黏附影响的研究

目的探讨茶多酚与柠檬提取物联合应用对变形链球菌生长、黏附的影响。方法采用MTT法分别测定茶多酚、柠檬提取物以及两者混合液的最小抑菌浓度(MIC)值,通过分级抑制浓度(FIC)指数来判断两者联合使用对变形链球菌生长作用的影响,并通过扫描电镜观察低于MIC浓度的混合液对变形链球菌在玻片上黏附的情况。结果茶多酚与柠檬提取物单独用药时,其MIC分别为1.56mg/mL和5.60mg/mL。联用的MIC为茶多酚0.78mg/mL和柠檬提取物4.50mg/mL,FIC为0.75。混合液对变形链球菌的黏附抑制作用随着浓度的降低而明显增强。结论茶多酚与柠檬提取物联合应用对变形链球菌的体外抗菌活性具有相加作用,影响其在玻片表面的黏附。     

秦皮素对大肠埃希菌作用机制的初步研究

目的以大肠埃希菌ATCC 25922为供试菌,探讨秦皮素的抑菌活性及其作用机制。方法利用TTC法测定秦皮素对大肠埃希菌ATCC 25922的最低抑菌浓度;通过测定加药前后菌体培养液电导率和大分子的变化及观察扫描电镜和透射电镜电镜结果,分析秦皮素对其细胞膜的影响;通过SDS-PAGE测定秦皮素对供试菌株蛋白含量的影响;采用逐个检出法研究秦皮素对大肠埃希菌ATCC 25922质粒合成的抑制作用。结果秦皮素可抑制大肠埃希菌ATCC 25922的生长,其最低抑菌浓度为40μg/mL。秦皮素作用菌体5 h后,培养液中的电导率比对照组增加1.96%,但DNA和RNA大分子增加的不明显。秦皮素作用大肠埃希菌20 h后,菌体可溶性蛋白总量比对照组降低42%。秦皮素对大肠埃希菌的质粒有消除作用,药物作用48 h后,秦皮素对大肠埃希菌的质粒消除率为60.3%。结论秦皮素可抑制大肠埃希菌的生长,其抑菌作用机制与抑制菌体内蛋白质合成和消除菌体内的质粒有关,但对大肠埃希菌细胞膜的影响不大。     

茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌机理

以革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性的铜绿假单胞菌为试验菌,通过测定茶多酚与两种菌作用前后细菌培养液的电导率和可溶性总糖的变化,以及菌体在磷代谢和蛋白质表达方面的变化,初步阐明了茶多酚对这两种菌的抑菌机理。研究结果表明,茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌均有抑菌活性,但对金黄色葡萄球菌的抑菌活性更强。经茶多酚处理后,细菌培养液的电导率和总糖浓度均增大,表明了茶多酚可破坏细胞膜的结构、导致细胞通透性增加,进而使细胞内容物外泄。另一方面,经茶多酚处理后的两种菌对磷的消耗量降低,以致严重影响了核酸、磷脂等细胞重要成分的合成以及能量代谢;通过SDS-PAGE分析,证实茶多酚可以阻碍细菌蛋白质的正常表达,以致影响其细胞的结构组成以及酶的催化活性,最终导致细菌正常生理功能的丧失。     

枯草芽孢杆菌K-268的分离鉴定及对水稻稻瘟病的防病效果

生防细菌是绿色防控稻瘟病的有效措施。为了发掘高效拮抗稻瘟病菌的生防细菌,本研究采用平板对峙法从感病品种K020268的健康稻株叶片中筛选获得1株对稻瘟病菌抑制效果较好的拮抗细菌K-268,同时测定该菌的抑菌谱。通过形态学观察、生理生化鉴定16S rRNA 和gyrA序列分析对其进行菌种鉴定,并初步研究了该菌株的生物学特性和对稻叶瘟的防治效果。结果表明,菌株K-268对稻瘟病菌菌丝生长抑制率为86.30%±0.70%,同时对水稻纹枯病菌、玉米大斑病菌及柑橘沙皮病菌等供试的14株植物病原菌均有抑制作用;经鉴定菌株K-268为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌株对数生长期为14-32 h,生长最适温度为30℃,生长最适pH值为6.0-7.0,并且其具有良好的耐盐性。离体接种实验结果表明,稀释10倍即菌液浓度6×10⁸ CFU/mL时,预防组和治疗组的叶瘟发病率分别为14.81%和23.46%,效果与稀释750倍的75%三环唑稀释液(WP)效果相当。活体喷雾接种结果表明,在接种稻瘟病菌分生孢子悬浮液(1×10⁶个/mL)前 24...     

壳聚糖微球分散体系的抑菌性研究

以乳化交联法制备的壳聚糖微米微球(CMs)为试验材料,研究其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌行为,并对其浓度因素、粒径因素和抑菌机理做了探讨。结果表明CMs的抑菌作用随其浓度的增加和粒径的减小而增强。在浓度<0.7 mg/mL时,CMs对细菌的生长具有先抑制后促进的作用;当浓度≥0.7 mg/mL时对细菌有杀灭作用。CMs对两种细菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为0.8、1.4 mg/mL和1.0、1.8 mg/mL,表明壳聚糖微球对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有明显的抑制作用,且金黄色葡萄球菌对微球抑制作用的反应比大肠杆菌更敏感。扫描电子显微镜观察发现,细菌能迅速贴附在CMs表面,并且贴壁后的细菌发生了明显的形态变化,有的甚至完全被破坏。     

中药鹿藿的抑菌实验研究

研究发现中药鹿藿在体外可瞬间抑制人类精子的运动。为了研究中药鹿藿的抑菌作用,本实验对几种女性生殖道常见致病菌和条件致病菌进行了体外抑菌实验,发现鹿藿对金黄色葡萄球菌、淋病奈瑟氏菌和大肠杆菌有抑制作用,并可抑制常见耐药菌株的生长。金黄色葡萄球菌的MIC折合生药为31.25mg/mL,大肠杆菌的MIC250mg/mL,淋球菌的MIC为31.25mg/mL。结果表明中药鹿藿在能有效抑制精子运动的浓度可以抑制某些男、女性生殖道常见细菌的生长。     

生物抑菌剂抑制大肠埃希菌效果研究

为研究生物防腐剂壳聚糖、ε-聚赖氨酸、乳酸链球菌素(Nisin)能否代替化学性食品防腐剂,通过敏感性测定、杀菌动力学测定、正交优化实验、应用效果试验,研究了其对指示菌大肠埃希菌的抑制效果。结果表明,壳聚糖、Nisin、ε-聚赖氨酸的最小抑菌浓度分别为10、2.5、0.078mg/mL。当壳聚糖、Nisin、ε-聚赖氨酸的浓度分别为5、0.04、0.01mg/mL时对大肠埃希菌的抑制作用最好,在这一最佳组合条件下对大肠埃希菌杀菌率达88.57%。     

壳聚糖体外抗白念珠菌生物膜作用的初步研究

目的观察壳聚糖对白念珠菌生物膜形成的影响,探讨其可能的作用机制。方法 XTT减低法评价壳聚糖对白念珠菌生物膜形成及黏附的影响,镜下观察壳聚糖对白念珠菌生物膜形态的影响;实时定量RT-PCR法观察壳聚糖对白念珠菌的Ras信号通路因子CDC35、PDE2、EFG1和HWP1的基因表达的影响。结果低浓度(0.02 mg/mL)和高浓度(0.32mg/mL)壳聚糖对白念珠菌生物膜形成的抑制率分别为(19.6±1.2)%和(96.96±0.6)%,0.16 mg/mL浓度下壳聚糖对早期(0 h)、中期(12 h)和成熟期(48 h)的生物膜抑制率分别为(78.6±0.5)%、(54.4±0.9)%和(41.1±1.1)%,不同浓度的壳聚糖对各黏附阶段的白念珠菌细胞黏附均有抑制作用,壳聚糖可剂量依赖性地下调白念珠菌生物膜Ras信号通路基因CDC35、EFG1和HWP1的表达水平,上调Ras信号通路抑制剂PDE2的基因表达水平(P<0.05)。结论壳聚糖可能通过影响Ras信号通路及抑制细胞黏附而对白念珠菌生物膜的形成具有抑制作用。     

乳酸钠、茶多酚与壳聚糖协同抑制铜绿假单胞菌的效果

以铜绿假单胞菌为研究对象,通过常量肉汤稀释法和琼脂扩散法探讨乳酸钠和茶多酚、壳聚糖复配后对铜绿假单胞菌是否有协同抑制效果。利用响应面方法对3种复合防腐剂的抑菌效果进行优化。应用BoxBehnken试验设计,建立3种防腐剂的二次多项式回归方程模型并进行分析。结果表明:三者对铜绿假单胞菌的抑菌效果(从大到小)顺序为乳酸钠、壳聚糖、茶多酚;乳酸钠和茶多酚交互作用极显著(p0.01),存在明显的拮抗作用;乳酸钠和壳聚糖交互作用显著(p0.05),二者存在明显的协同作用;而茶多酚和壳聚糖之间交互作用不显著(p0.05)。在乳酸钠62.50 mg/mL、壳聚糖3.17 mg/mL的条件下复合防腐剂对假单胞菌的抑菌圈达到最大,抑菌效果最好。     

The entomopathogenic fungus Beauveria bassiana and its compatibility with triflumuron: effects on the twospotted spider mite Tetranychus urticae

Laboratory studies were conducted to determine the effects of the mycoinsecticide Naturalis-L (Beauveria bassiana conidial formulation) on the twospotted spider mite Tetranychus urticae. Compatibility of B. bassiana with triflumuron (benzoylphenyl urea typically used as an insecticide, but also with acaricide effects), was also investigated in order to incorporate both in the control of this pest. For each juvenile stage, 180–22,800 viable conidia/mL on deutonymphs, 380–12,160 viable conidia/mL on protonymphs, and 712–7480 viable conidia/mL on larvae were evaluated. For the adult stage, the concentrations ranged from 213 to 54,720 viable conidia/mL. The mortality data used in the analysis were those accumulated after 5 days of treatment for deutonymphs and protonymphs, 7 days for larvae and 9 days for adults. The lethal concentration to kill 50% (LC₅₀) for the juvenile stages was 3184 viable conidia/mL (their probit-log concentration regression lines were the same), and 1949 viable conidia/mL for adults. No significant differences in mortality were observed among egg age classes (24-, 48-, 72-, and 96-h-old eggs) at the tested concentrations (1400–22,800 viable conidia/mL). When B. bassiana was combined with 0.25 g Alsystin (25% triflumuron as a wettable powder)/L, mite egg mortality decreased significantly. Triflumuron reduced mycelial growth but not conidial germination of B. bassiana. This fungus is a possible candidate to be included in integrated pest management programs with triflumuron of T. urticae. In such programs, the possible antagonist effects of triflumuron should be considered.     

新蚜虫疠霉连续液体培养的菌丝生物量、产孢量及杀蚜毒力

继代培养常被疑为虫霉菌种毒力下降或某些生物学性状发生改变的原因之一。从研究新蚜虫疠霉 (Pandoraneoaphidis)固体平板菌落的液体培养获得的初始菌液出发 ,连续 6次继代液培 ,测定了其在萨氏营养液中继代培养生产的菌丝生物量、产孢量及其对桃蚜 (Myzuspersicae)的毒力。在初始菌液的生物量 8 8mg mL和产孢量 7 2× 1 0 5孢子 mg的条件下 ,以三种转接比 (种液 营养液 ,v v)连续 6次继代培养 ,在 1 2 0转接比下的菌丝生物量和产孢量分别为 6 4～ 1 0 0mg mL和 7 3× 1 0 5～ 1 0 8× 1 0 5孢子 mg,在 2 2 0下为 5 7～ 8 5mg mL和 1 0 0× 1 0 5～ 1 2 1× 1 0 5孢子 mg ,在 4 2 0下为 5 5～ 1 0 9mg mL和 6 4× 1 0 5～ 1 0 9× 1 0 5孢子 mg。方差分析表明 ,继代培养对生物量和产孢量均无显著影响 (P <0 0 5)。用初始菌液和 1 2 0转接比下继代培养的菌液制备而成的接种体对桃蚜进行两组毒力测定 ,每一组测定的接种…     

石榴皮多酚提取物及纯化物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究

采用紫外分光光度法研究了石榴皮多酚提取物及其2种纯化物(P-1和P-2)对α-葡萄糖苷酶体外抑制作用以及纯化物对该酶的抑制作用类型.结果显示,石榴皮多酚提取物和纯化物对α-葡萄糖苷酶活性均表现出较强的抑制作用,且其作用大小与浓度呈明显的剂量-效应关系;3种多酚样品中,纯化物P-2的抑酶活性最强,纯化物P-1次之,提取物最弱,它们对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC50,mg/mL)分别为0.045、0.185和0.278.石榴皮多酚纯化物P-2对α-葡萄糖苷酶抑制作用类型为反竞争性抑制;浓度为0.01 mg/mL时该纯化物对α-葡萄糖苷酶的抑制常数Ki为1.22 μg/mL.     

野生仙人掌多糖对肺鳞癌细胞SK-MES-1 生长的抑制作用

目的:探讨仙人掌多糖对体外肺鳞癌细胞(SK-MES-1)生长抑制作用。方法:体外培养SK-MES-1细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察野生仙人掌多糖对其生长的抑制,计算最低抑制浓度及抑制率;观察不同浓度多糖对细胞形态的影响;SDS-PAGE凝胶电泳简析不同组别蛋白质表达的差异。结果:野生仙人掌多糖24 h和48 h对肿瘤细胞的最低抑制浓度和抑制率分别为0.0625 mg/ml.34.06%和0.0625 mg/ml 35.37%;不同组间蛋白质表达有差异。结论:野生仙人掌多糖对SK-MES-1肺鳞癌细胞有抑制作用。     

昆虫病原真菌长孢蜡蚧菌TF-2菌株对豌豆蚜的侵染过程和致病力

【目的】豌豆蚜Acyrthosiphon pisum是世界性的重要农业害虫,给豆类作物造成巨大的经济损失。本研究在前期筛选已获得豌豆蚜致病菌长孢蜡蚧菌Lecanicillium longisporum TF-2菌株的基础上,检测了该致病菌分生孢子对豌豆蚜的毒力效用及侵染方式,以期为利用昆虫病原真菌防治豌豆蚜提供理论基础。【方法】采用离体叶片饲养法检测在不同浓度长孢蜡蚧菌TF-2菌株孢子悬浮液(1.0×10~3～1.0×10~7孢子/mL)中浸渍后对豌豆蚜成虫的致病力;应用扫描电镜和体视显微镜观察豌豆蚜成虫接种TF-2菌株(1.0×10~7孢子/mL)后长孢蜡蚧菌TF-2菌株侵染症状和侵染过程。【结果】不同浓度长孢蜡蚧菌TF-2菌株分生孢子浸染豌豆蚜成虫致病力随分生孢子浓度升高而逐渐增强,侵染后6 d对豌豆蚜成虫的半致死浓度(LC_(50))为3.26×10~4孢子/mL,最高浓度分生孢子(1.0×10~7孢子/mL)对豌豆蚜成虫的半致死时间(LT_(50))为2.92 d。扫描电镜观察结果表明,接种后24 h,TF-2菌株分生孢子在豌豆蚜成虫体表皮萌发形成芽管和附着胞;接种后48 h,芽管伸长在复眼、触角基部、足基节、腹末生殖节等部位形成网络结构;接种后96 h,菌丝布满整个虫体,新的分生孢子产生。【结论】长孢蜡蚧菌TF-2菌株对豌豆蚜成虫具有较强的致病力,扫描电镜观察揭示了其分生孢子在其虫体上的侵染过程,结果为进一步应用昆虫病原真菌进行生物防治提供理论基础和参考依据。     

Action of sisal (Agave sisalana, Perrine) extract in the in vitro development of sheep and goat gastrointestinal nematodes

Active compounds from Agave sisalana with antiparasitic action against gastrointestinal nematodes (GINs) could be an alternative to diversify the range of parasite management methods in the livestock sector. The objective of this study was to evaluate the in vitro action of A. sisalana extract on the development of sheep and goat GINs. The extract, obtained from shredded sisal leaves, was utilized at various concentrations in the egg hatch test (EHT), larval development test (LDT), larval feeding inhibition test (LFIT) and adult motility test (AMT). The LC(50) and LC(95) in the EHT were 6.90 and 24.79 mg/mL, in the LDT were 0.041 and 0.067 mg/mL and in the LFIT were 0.053 and 0.24 mg/mL, respectively, showing a dose-dependent relationship. The development and feeding inhibition on L(1) were both 100% at a dose of 0.12 mg/mL. In the AMT there was 100% inhibition at 75 mg/mL after 24h of exposure. The extract of A. sisalana therefore demonstrated significant action on L(1) at 0.12 mg/mL. So, if part of the A. sisalana extract passes through the animal's gastrointestinal system, this material can have a significant effect on the parasites in the feces. This is an interesting approach because it can drastically reduce the pasture contamination as well as the infection of herds.     

温度和氮磷浓度对平裂藻和栅藻生长及竞争的影响

为了解温度及氮磷浓度对平裂藻和栅藻生长及竞争的影响,分别在18、25和35℃条件下,以BG11培养基为基础,设置了不同的氮磷浓度组,进行了2种藻的单独培养试验和混合培养试验,结果表明:在纯培养条件下,低营养浓度组(磷浓度分别为0.1和0.5 mg/L)平裂藻在3种温度下基本停止生长,高营养盐浓度组(磷浓度分别为1.0和1.5 mg/L)除18℃1.0 mg/L组停止生长外,其余均能正常生长增殖,且细胞最大密度表现为25℃ 18℃ 35℃, 1.5和1.0 mg/L浓度组细胞生长差异不显著。栅藻在纯培养条件下,细胞密度总体表现为随着营养盐浓度升高而增加的趋势,细胞最大密度表现为18℃ 25℃ 35℃。在混合培养试验中,除35℃、1.5 mg/L组平裂藻对栅藻的竞争抑制参数大于栅藻对平裂藻的竞争抑制参数外,其余试验组均表现为栅藻受平裂藻影响较小。在混合培养体系中, 0.1 mg/L组平裂藻仍基本停止生长, 0.5 mg/L组受栅藻的刺激作用,生长优于纯培养体系。1.0和1.5 mg/L组均受栅藻的抑制作用,且浓度越高抑制作用越强。