非酶促转氨测定蛋白质相对分子量及研究空间结构的变化

在非酶促转氨过程中测定生成甘氨酸的量,计算蛋白质的相对分子量是一种方便、节省经费和快速的方法,该方法的应用不受蛋白分子量大小的限制。非酶促转氨的另一产物２－羰化氨基酸可作为制备各种喹喔啉衍生物的原料。苯丙氨酸非酶促形成的苯丙酮酸与邻苯二胺反应生成３－苯基－２－羰基喹喔啉。该产物在３６３ｎｍ具有荧光发色性质。胰岛素及不同一级结构的短肽２－羰酰衍生物和２－喹喔啉衍生物的荧光在盐酸胍和不同ＰＨ训的变化各     

酸性蛋白酶的测定方法及缓冲液和底物的选择

酸性蛋白酶的测定方法 福林—酚试剂显色反应法的原理是:福林试剂(磷钨酸和磷钼酸的混合物),在碱性条件下极不稳定,可被酚类化合物还原,因而呈蓝色反应(钨蓝和钼蓝的混合物)。由于蛋白质分子中含有带酚基的氨基酸,利用蛋白酶分解蛋白质(底物),生成含酚基的氨基酸,与福林试剂作用,因而也呈蓝色反应。显色程度与底物在酶作用下产生的水解产物数量成正比,因此可推算出     

pH值对高效液相(OPA法)测定氨基酸的影响

<正> 前言氨基酸的分离是在强阳离子中变换柱子通过pH梯度进行的。洗脱出来的各种氨基酸再与OPA反应生成衍生物,最后应用萤光检测分离出的各种氨基酸。其反应如下:     

N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐在多肽合成中的应用

本文介绍了N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐在多肽合成中应用的研究结果。N-保护氨基酸的三级铵盐在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中与N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐反应,先形成N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐酯的活化中间体,然后在第二分子的三级胺的存在下与氨基酸或肽的酯缩合得到N-保护的肽酯。用该试剂进行缩合反应具有反应速度快、缩合率高、副产物容易去除等优点。我们用这个方法合成了一系列二肽衍生物,并用逐步递增法合成了亮氨酸脑啡肽(五肽)。N-保护的氨基酸活化后与胺基组分缩合成肽酯,其收率一般都在85%左右。     

肽链及蛋白质N-末端喹喔啉类荧光衍生物的形成

蛋白质及肽链N-末端经Dixon转氨后的羰酰基与邻苯二胺作用可形成喹喔啉类荧光衍生物.形成这一发色团的过程较为缓慢;喹喔啉短肽的激发(Ex 293-305nm)与发射(Em 360-365nm)波长随肽链氨基酸残基组成不同而有一定变化;喹喔啉胰岛素荧光衍生物的激发光波长为Ex318nm,发射波长为Em 353nm.喹喔啉三肽的荧光在乙二醇溶液中的变化因其氨基酸残基组成的不同而有差异.以上结果提示:喹喔啉类荧光衍生物可能作为研究蛋白和肽结构与功能的一种手段.     

蛇肌甘油醛-3-磷酸脱氢酶的研究 Ⅲ.萤光衍生物的生成

蛇肌CM-Apo-GAPDH在NAD~ 存在的条件下,经紫外光照产生萤光衍生物。其校正发射光谱峰值在420nm,校正激发光谱呈三峰形,峰值在240nm、285nm、325nm。蛇肌GAPDH萤光衍生物生成的最适条件为:在pH7.6～8.0的缓冲液中光照8分钟,NAD~ 与酶克分子浓度的比值为60。用325nm激发、410nm发射的萤光滴定测NAD~ 与CM-GAPDH的结合,表明由于蛇肌GAPDH羧甲基化使NAD~ 与酶的结合所表现的负协同性变得弱得多。萤光衍生物A_(280)/A_(260)为1.61～1.63,相当于蛇肌GAPDH萤光衍生物每分子中的四个亚基含有二分子NAD~ ,蛇肌GAPDH萤光衍生物的生成也属于半位反应。     

龙虾肌羧甲基甘油醛-3-磷酸脱氢酶NAD~+荧光衍生物的生成与性质

龙虾肌甘油醛-3-磷酸脱氢酶与兔肌酶一样,用碘代乙酸修饰后,在NAD~+存在下经紫外光照射也能形成荧光衍生物。 pH对荧光衍生物的生成和稳定性有很大影响,同时,异类离子的不同影响也很明显。 定磷分析法测定荧光衍生物上的NAD~+含量,同位素示踪法观察衍生物生成过程的脱羧,都证明此光化学反应为半位反应。     

pH对黑水虻蛋白美拉德产物风味特性的影响

黑水虻含有丰富的蛋白质,其水解后产生的氨基酸及低分子多肽是美拉德反应香精前体物质的优质原料,在与还原糖等加热后可产生强烈的肉香风味,是十分理想的天然香精。通过比较不同pH(5～9)黑水虻蛋白酶解液为底物制备的美拉德产品的褐变程度、游离氨基酸含量、电子鼻响应值和挥发性风味成分后发现：pH在黑水虻蛋白酶解液美拉德反应过程中对于产品风味特征的呈现具有重要作用;黑水虻蛋白酶解液美拉德反应的最适pH为8。在此条件下制备的美拉德风味肽产品香气浓郁,持香时间持久,整体风味良好。     

水杨醛保护法鉴定生物合成聚赖氨酸的单体连接方式

建立了一种有效、方便的分析和鉴定聚赖氨酸结构的方法。采用水杨醛与游离氨基反应生成席夫碱．用NaBH4将席夫碱C=N还原成C-N,在酸性条件下将还原产物水解,用薄层层析法分析了水解产物,根据生成的N保护氨基酸不同,鉴定了生物合成的聚赖氨酸的结构为ε-型结构。此法也可用于蛋白质或多肽的N-末端氨基酸的分析。     

蛇肌甘油醛-3-磷酸脱氢酶的研究——Ⅲ.萤光衍生物的生成

蛇肌CM-Apo-GAPDH在NAD~ 存在的条件下,经紫外光照产生萤光衍生物。其校正发射光谱峰值在420 nm,校正激发光谱呈三峰形,峰值在240 nm、285nm、325nm。蛇肌GAPDH 萤光衍生物生成的最适条件为:在pH7.6～8.0的缓冲液中光照8分钟,NAD~ 与酶克分子浓度的比值为60。用325nm 激发、410nm 发射的萤光滴定测NAD~ 与CM-GAPDH 的结合,表明由于蛇肌GAPDH 羧甲基化使NAD 与酶的结合所表现的负协同性变得弱得多。萤光衍生物A_(280)/A260为1.61～1.63,相当于蛇肌GAPDH 萤光衍生物每分子中的四个亚基含有二分子NAD~ ,蛇肌GAPDH 萤光衍生物的生成也属于半位反应。     

碱催化合成4-甲基-2'-羟基-4'-甲氧基查尔酮及其晶体结构

探讨超声波辅助下用碱催化合成查尔酮的方法。常温超声波辅助下用碱催化使丹皮酚和4-甲基苯甲醛发生克莱森-斯密特反应,生成一种含有1,3-二苯基丙烯酮结构的丹皮酚衍生物:4-甲基-2'-羟基-4'-甲氧基查尔酮,产率高达71.57%,经过现代光谱学技术紫外、红外、质谱并结合核磁的氢谱、碳谱以及135°DEPT谱表征其结构。用X射线衍射技术分析该丹皮酚衍生物的单晶结构并确定其分子的构型和构象,4-甲基-2'-羟基-4'-甲氧基查尔酮属于单斜晶系中的P2(1)/n空点群,晶胞参数:a=1.1288(10)nm、b=0.6916(6)nm、c=2.0509(4)nm、α=90.0(8)°、β=109.8(8)°、γ=90(8)°,晶胞体积V为1.4056(5)nm3,密度Dc为1.272 mg/cm3。在超声波辅助下用碱催化可使丹皮酚和4-甲基苯甲醛通过克莱森-斯密特反应来合成含有1,3-二苯基丙烯酮结构的丹皮酚衍生物。     

植物游离氨基酸样品的制备方法

<正> 绪言在植物组织中,氨基酸除了组成肽或蛋白质外,还能游离存在。游离氨基酸包括蛋白质氨基酸及非蛋白氨基酸,除去蛋白质的20种普通氨基酸外,在植物体内发现的非蛋白氨基酸已超过200种,近年来还陆续有新的发现。它们大多数是蛋白质中存在的。α-氨基酸的衍生物,但是也发现有β-,γ-,或δ-     

低聚壳聚糖与α-丙氨酸/天冬酰胺的美拉德反应及其衍生物的抗氧化性能研究

研究低聚壳聚糖(COS)与α-丙氨酸/天冬酰胺的美拉德反应,考察了两个体系(低聚壳聚糖的羰基与氨基的物质量比均为1∶1)的pH、吸光度和荧光值的变化。醇沉法提取低聚壳聚糖衍生物CA和CN。对两种衍生物进行红外表征和分子量测定,并研究其对超氧阳离子O2-.、DPPH自由基的清除能力以及还原能力。结果显示:抗氧化能力强弱次序为CA>CN>COS,即美拉德反应后低聚壳聚糖衍生物抗氧化能力得到显著提高,且CA的抗氧化活性优于CN,表明与小分子氨基酸进行美拉德反应制得的壳聚糖衍生物具有更好的抗氧化性。     

泛肽的结构与功能

泛肽(ubiquitin)是一种活细胞内普遍存在的小分子蛋白质,分子量仅8565道尔顿,为76个氨基酸组成的单链多肽。以前根据牛和人泛肽氨基酸顺序测定的结果,认为它是一条羧基末端含精氨酸的74肽;后来才知道,76肽才是泛肽的真正活性分子。从不同种属分离提取的泛肽,在进化过程中其氨基酸顺序保存得完好,例如,从昆虫、乌龟、牛及人红细胞里鉴定出的泛肽,其1～74位氨基酸顺序完全相同。泛肽的理化性质颇为独特,它虽含有7个赖氨酸和4个精氨酸,但却能耐受胰蛋白酶特异性消化,pH 与温度变化也不影响其稳定性。核磁共振(NMR)研究表明,pH1.18～8.48和23～80℃温差范围     

一种新型亮氨酸5-羟化酶NmLEH的异源表达、纯化及酶学性质分析 *

羟基化氨基酸是一种新型氨基酸衍生物,可广泛用作化工材料的前体物及医药合成的中间体。将来源于Nostoc minutum的新型L-亮氨酸5-羟化酶 (NmLEH) 通过重组质粒在大肠杆菌中异源表达。结果表明,在BL21(DE3) 宿主细胞中,诱导温度为25℃,IPTG诱导浓度为0.5mmol/L,诱导10h时,蛋白质表达量最高 (0.45mg/ml);通过Ni-亲和层析和凝胶过滤层析两步分离纯化获得了高度纯化的重组NmLEH蛋白;对NmLEH的酶学性质进行了表征,该酶的最适反应温度为25℃,最适pH 为7.5,在pH 7.0~9.0较为稳定,最适底物为亮氨酸和甲硫氨酸;同源序列分析表明NmLEH属于亚铁和α-酮戊二酸依赖性双加氧酶家族[Fe(II)/αKG-Dos],并预测了该酶的保守催化活性位点(H150、D152、H236);通过同源建模得到了该蛋白质的模拟结构,分析了该蛋白质催化活性中心的形成机制。     

一新中温碱性蛋白酶基因的克隆及原核表达

摘要:【目的】从环境中分离筛选产蛋白酶、降解蛋白质的菌株,寻找使用价值较高的碱性蛋白酶。【方法】通过酪蛋白平板法分离筛选产蛋白酶菌株,经生理生化方法及16S rDNA 基因序列鉴定菌株;利用简并引物及基因组步移克隆蛋白酶完整开放阅读框;蛋白酶前体蛋白及成熟肽序列在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中进行重组表达;纯化活性蛋白酶后,利用化学合成多肽底物(succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide)检测酶活性质及其催化活力。【结果】分离到的菌株L010被鉴定命名为芽胞杆菌( Bacillus sp.)L010;蛋白酶开放阅读框包含了1149个碱基,编码382个氨基酸,氨基酸序列按其功能分为N端的30个氨基酸残基组成的信号肽,77个氨基酸残基构成的前导肽,C端275个氨基酸残基组成的成熟肽;此蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族中枯草杆菌蛋白酶类(Subtilisins)成员,并命名为SprD;SprD的前体蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中重组表达时,在前导肽辅助下自加工为活性蛋白酶;SprD呈现出较高的催化活力,其反应最适条件为温度70℃,pH9－10。【结论】SprD在碱性(pH 7.0－ 10.0)、中高温(25℃－60℃)条件下的稳定性及较高的催化能力使其具有一定的研究和潜在利用价值。     

小肽在猪营养中的研究

蛋白质在消化道中的消化终产物往往大部分是小肽而非游离氨基酸,小肽能完整地被吸收并以二、三肽形式进入血液循环,小肽在蛋白质营养中有着重要的作用。动物为了达到最佳生产性能,必须需要一定数量的小肽,作者就目前国内、外对小肽在猪营养中的研究及应用现状作一综述。随着蛋白质和氨基酸营养研究的深入,人们已逐渐认识到肽营养的重要性。Aga r(1953)观察到,肠道能够完整转运双甘肽。其后Naey(1959)和Smith(1960)首先提出肽可被完全转运的确切证据。最简单的肽是由2个氨基酸组成的二肽,其中含有1个肽键。含有3、4、5个等氨基酸的肽分别被称为三、四、五肽等。由2--10个氨基酸通过     

哺乳动物氨基酰-tRNA合成酶的研究

1 氨基酰-tRNA合成酶及哺乳动物细胞中氨基酰 tRNA合成酶的特点 1．1 氨基酰-tRNA合成酶催化的反应氨基酰-tRNA合成酶家族(aaRS)参与生物体中的遗传解码过程。它们催化氨基酸与其对应的 tRNA之间的酯化反应,生成氨基酰-tRNA参与蛋白质的生物合成,它反应的专一性确保了蛋白质生物合成的精确性。氨基酸与其对应的tRNA之间的     

固定化胰蛋白酶亲和层析法制备低STI残存大豆分离蛋白质

聚苯乙烯阴离子交换树脂(GM201)经预处理除去杂质后先与戊二醛(2—6％)反应,再与胰蛋白酶(5000u/mg,8—10mg/mL,pH 8.0)反应即制得固定化胰蛋白酶。此法得到的固定化胰蛋白酶具有良好的热稳定性,贮藏稳定性和操作稳定性,可用于工业化目的。脱脂豆粉经萃取(PH9.0)后,稀释4倍,在pH5.0下沉淀分离出大豆球蛋白,然后用酸性水(pH5.0)洗涤两次,并进行碱溶与酸沉淀两次,即可将大豆分离蛋白质的STI残留降低到1.85％,比活性降到1u/mg以下。最后再用固定化胰蛋白酶亲和层析,就可以除去大豆分离蛋白质中残留的STI。     

胰岛素B链中肽段的合成 Ⅱ.苄氧羰白·S-苄基半胱·甘·丝·咪唑-苄基组·白·缬氨酸甲酯的合成

胰岛素B链中B_(6-12)七肽的衍生物,即Cbz·leu·(S-Bz)cys·gly·ser·(im-Bz)his·leu·val·OCH_3曾用DCCI法依(3 4)途径,和叠氮法依(4 3)途径分别合成。两法所得产物的熔点、旋光等数据,完全—致。七肽酯及其中间体自由三肽和自由四肽,均分别用氨肽酶水解,释放出等当量的组成氨基酸,证明并无消旋氨基酸存在。